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Development of real-time PCR method for rapid detection and quantification of Heterosigma akashiwo 被引量:1
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作者 何闪英 于志刚 米铁柱 《Journal of Harbin Institute of Technology(New Series)》 EI CAS 2008年第1期118-123,共6页
To rapidly detect the harmful algae H.akashiwo qualitatively and quantitatively, sequences of the 18S rDNA deduced from H.akashiwo were used for designing species-specific primers, and a RFQ-PCR (Real-time Fluorescent... To rapidly detect the harmful algae H.akashiwo qualitatively and quantitatively, sequences of the 18S rDNA deduced from H.akashiwo were used for designing species-specific primers, and a RFQ-PCR (Real-time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction) method was developed for quantitative detection of H.akashiwo. Primer H.akashiwo and TaqMan probe were designed, and the specificity of primer was checked with PCR. A calibration curve was constructed with cycle threshold value against visual counted cell number. And the value of the curve was tested with other H.akashiwo samples, which were assayed with both the RFQ-PCR method and visual count under microscope. 展开更多
关键词 Heterosigma akashiwo fluorescent quantitative pcr molecular probe real-time detection
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奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用评估
2
作者 胡秀花 王子华 +5 位作者 黄鹏成 刘园园 毛君杰 王桂琴 马翀 王少林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期61-69,共9页
为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧... 为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测,并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示,检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致,均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等;检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高,均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等;药物敏感性试验结果显示,检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高;奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述,该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率,可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持,从而降低抗菌药物的使用量,以减少牧场经济损失。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(pcr-荧光探针法) 细菌分离培养 16S rRNA基因扩增子测序 药物敏感性试验
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猪链球菌9型荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:12
3
作者 拜廷阳 杨增岐 +3 位作者 吴志明 普志平 赵明军 闫若潜 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第1期7-12,共6页
【目的】建立猪链球菌9型(SS9)的快速诊断和定量分析方法。【方法】根据GenBank已登录的SS9cps9H基因保守部分序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了SS9的TaqMan荧光定量PCR检测方法(Taq-Man FQ-PCR),并进行了敏感性、特异性和重复... 【目的】建立猪链球菌9型(SS9)的快速诊断和定量分析方法。【方法】根据GenBank已登录的SS9cps9H基因保守部分序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了SS9的TaqMan荧光定量PCR检测方法(Taq-Man FQ-PCR),并进行了敏感性、特异性和重复性试验;利用所建立的检测方法对河南省11例疑似猪链球菌临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了对比。【结果】成功建立了SS9的FQ-PCR检测方法和定量标准曲线,FQ-PCR方法的检测灵敏度可达1.0拷贝/μL,特异性高且重复性良好;利用该方法对11份临床疑似猪链球菌感染组织病料进行的应用检测表明,其中有3份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%。【结论】成功建立的SS9 FQ-PCR诊断方法,可用于临床SS9型病菌感染的快速诊断及样品中细菌含量的定量分析。 展开更多
关键词 猪链球菌9型 荧光定量pcr TaqMan荧光探针 检测方法
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新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:5
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作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期571-576,共6页
为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异... 为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检验,并与普通RT-PCR进行比较。结果显示,扩增标准曲线相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单特异峰。该方法对经典鸭呼肠孤病毒、H9N2禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、A型鸭肝炎病毒、鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒及番鸭细小病毒均未检测到信号,对NDRV的最小检出量为10拷贝·μL^-1。组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。此外,利用该方法对239份疑似新型呼肠孤病毒病样品进行检测,常规RT-PCR检测时有75份为阳性,一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法检测时有100份为阳性,而且常规RT-PCR检测出的阳性样品用一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测时均为阳性,符合率为100%。该检测方法的建立为NDRV早期快速检测及定量分析提供新的方法。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 MGB探针 荧光定量RT-pcr 检测方法
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一种基于CP530R序列非洲猪瘟病毒TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:12
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作者 王建华 董志珍 +7 位作者 赵丹 王玉玲 肖妍 张俊哲 陈小金 王乃福 陈本龙 赵祥平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期22-26,共5页
为了建立一种快速、敏感和特异地检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验根据ASFV CP530R基因序列设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测ASFV的TaqMan—MGB探针实时荧光PCR方法,并对... 为了建立一种快速、敏感和特异地检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验根据ASFV CP530R基因序列设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测ASFV的TaqMan—MGB探针实时荧光PCR方法,并对该方法进行了特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验评价。结果表明:该方法仅对ASFV发生特异性扩增反应,不与伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪流感病毒(SIV)发生交叉反应,具有良好的特异性。用该方法检测质粒标准对照(PCR2.1-ASFV—CP530R)的线性范围为6.1×10^2-6.1×10^9copies/μL,标准曲线方程为Y=-3.449x+38.10,相关系数(R^2)为0.999,最低可检测到61个拷贝的质粒标准对照分子;对5个不同浓度(6.1×10^3-6.1×10^7copies/μL)的质粒标准对照进行双份样品的4次重复检测,每个浓度质粒标准对照的D值变异系数均小于2.0%,具有良好的重现性;用该方法对126份进口猪的血液样品和38份猪肉样品进行ASFV检测,结果均为阴性。说明本方法可用于活猪临床样品和生猪样品中ASFV的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CP530R序列 TAQMAN-MGB探针 实时荧光pcr 方法 建立
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鸭瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:4
6
作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 程龙飞 施少华 傅光华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第6期722-728,共7页
根据鸭瘟病毒(DEV) gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10~1~1.0×10~6拷贝·μL^(-1)时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线... 根据鸭瘟病毒(DEV) gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10~1~1.0×10~6拷贝·μL^(-1)时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999;敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL^(-1);特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%~1.14%和0.69%~2.40%.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71%(12/14)、71.43%(10/14)和57.14%(8/14);且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100%.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查. 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 GE基因 TAQMAN探针 实时荧光定量pcr方法
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实时荧光PCR探针法和DNA测序法应用于CYP2C9和VKORC1基因检测的对比研究 被引量:2
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作者 黄振勇 龙东娣 +5 位作者 毛振敏 肖诚胤 陈素敏 陈清群 蔡凯 李介华 《中国医学创新》 CAS 2018年第24期123-127,共5页
目的:比较实时荧光PCR探针法和DNA测序法检测细胞色素氧化酶P450(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性的一致性,建立适用于临床推广的华法林基因多态性检测的方法。方法:本研究随机收集清远市人民医院20例就诊患... 目的:比较实时荧光PCR探针法和DNA测序法检测细胞色素氧化酶P450(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性的一致性,建立适用于临床推广的华法林基因多态性检测的方法。方法:本研究随机收集清远市人民医院20例就诊患者的全血标本,应用实时荧光PCR探针法和DNA测序法检测其CYP2C9和VKORC1基因的多态性,结果运用Excel软件统计并进行比较分析。结果:两种方法对CYP2C9和VKORC1基因多态性的检测结果一致,且实时荧光PCR探针法比DNA测序法更简易、经济、快捷。结论:与DNA测序法相比,应用实时荧光PCR探针法检测CYP2C9和VKORC1基因的突变具有较高的临床应用价值,比较适用于临床检测。 展开更多
关键词 实时荧光pcr探针法 DNA测序法 CYP2C9 VKORC1
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PCR-荧光探针法在沙眼衣原体泌尿生殖道感染判愈中的应用 被引量:2
8
作者 尤聪 刘全中 +1 位作者 叶小英 曾招林 《中国医学创新》 CAS 2018年第31期46-49,共4页
目的:评估不同判愈标准下罗红霉素治疗沙眼衣原体(C.t)泌尿生殖道感染患者治愈率的差别。方法:回顾性分析2013年1月-2017年12月在赣南医学院第一附属医院门诊确诊为C.t生殖道感染354例患者的临床资料,所有患者采用罗红霉素治疗C.t感染... 目的:评估不同判愈标准下罗红霉素治疗沙眼衣原体(C.t)泌尿生殖道感染患者治愈率的差别。方法:回顾性分析2013年1月-2017年12月在赣南医学院第一附属医院门诊确诊为C.t生殖道感染354例患者的临床资料,所有患者采用罗红霉素治疗C.t感染并完成2次随访。临床判愈标准为临床症状消失,病原学判愈标准为PCR检测临床标本C.t DNA阴性,比较不同判愈标准的患者治愈情况。结果:根据临床判愈标准,354例患者中治愈283例,治愈率为79.94%;而第1、2次PCR-荧光探针法检测的治愈率分别为73.45%和72.32%。临床判愈标准的治愈率均明显高于第1、2次PCR-荧光探针法判愈标准,差异均有统计学意义(X^2=4.37、6.07,P=0.04、0.01);但两次PCR-荧光探针法判愈标准的治愈率比较,差异无统计学意义(X^2=0.18,P=0.67)。结论:PCR-荧光探针法可作为C.t泌尿生殖道感染治疗后随访较为客观的病原学判愈方法,推荐采用罗红霉素治疗患者疗程结束后1个月复查1次。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 泌尿生殖道感染 pcr-荧光探针法 罗红霉素 治愈率
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PCR荧光探针法在Y染色体微缺失检测中的应用 被引量:3
9
作者 陈晴晴 李少英 +2 位作者 冼嘉嘉 王燕超 黎青 《分子诊断与治疗杂志》 2018年第4期257-261,277,共6页
目的比较无精子症因子(azoospermia factor,AZF)PCR荧光探针法与多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测法的结果吻合度。方法收集2016年6月至2017年6月来我院就诊的208例男性不育患者外周血。根据WHO 2010年第5版精液分析操作指南将20... 目的比较无精子症因子(azoospermia factor,AZF)PCR荧光探针法与多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测法的结果吻合度。方法收集2016年6月至2017年6月来我院就诊的208例男性不育患者外周血。根据WHO 2010年第5版精液分析操作指南将208例患者分为正常精子症组、无精子症组和少精子症组。用PCR荧光探针法对208例男性不育患者检测Y染色体无精子症因子,然后采用多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测208例不育患者Y染色体无精子症因子。结果在208例不育男性患者中,正常精子症组有100例,无精子症组47例,少精子症组61例。PCR荧光探针法检测Y染色体无精子症因子,少精子症组1例AZFc区(SY254/SY255)缺失,无精子症组1例AZFabc区缺失,正常精子症组未发现基因缺失类型。多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测法结果与PCR荧光探针法检测结果一致。结论 2种方法检测的患者无精子症因子基因的结果吻合度一致。与多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测法相比,PCR荧光探针法一次上样可以做48个样本,节省了时间与成本,结果自动保存,可以作为Y染色体微缺失检测的推荐方法。 展开更多
关键词 无精子症因子 pcr荧光探针法 Y染色体微缺失 基因分析
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食源性动物组织中CSFV和PRRSV双重双色荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 魏文康 吕殿红 +5 位作者 温肖会 罗胜军 黄忠 周秀蓉 贾春玲 袁洁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期620-624,共5页
为建立同时检检测食源性动物组织中猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病病毒(PRRSV)的双色荧光定量RT-PCR方法。本研究根据SCFV和PRRSV基因序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应的体系和扩增条件,建立了能够检测食源... 为建立同时检检测食源性动物组织中猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病病毒(PRRSV)的双色荧光定量RT-PCR方法。本研究根据SCFV和PRRSV基因序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应的体系和扩增条件,建立了能够检测食源性动物组织中SCFV和PRRSV的双重双色荧光定量PCR的方法。其检测下限为1×102拷贝/μL,而且与其他一些猪病病毒无交叉反应,具有良好的特异性。该方法重复性和稳定性试验表明其组内和组间的变异系数最高分别为4.2和4.5。对比试验表明,该方法对CSFV和PRRSV检验的敏感性为常规RT-PCR方法的200倍;该方法的建立为食源性动物组织中CSFV和PRRSV提供了有效手段,该方法特异性和敏感性较好,能够应用于临床检测。 展开更多
关键词 食源性动物组织 猪瘟病毒 猪蓝耳病病毒 双重双色荧光定量pcr
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Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
11
作者 贾广乐 王晓楠 +1 位作者 廖娟红 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期69-72,共4页
根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性... 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒;标准曲线相关系数为0.995,扩增效率为103%;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏菌(Brucella.spp)及牛血液的核酸样本特异性检测结果均为阴性。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好,对Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 Q热 贝纳柯克斯体 荧光定量pcr TaqMan探针法
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液体培养法与荧光探针PCR检测阴道分泌物中解脲脲原体的应用价值
12
作者 王敏 万晓龙 《系统医学》 2022年第24期99-102,共4页
目的评价荧光探针聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法与液体培养基培养法检测阴道分泌物中解脲脲原体(ureaplasma urealyticum,UU)的临床应用价值。方法选取江苏省东台市人民医院检验科2019年1月—2021年12月收治的138例... 目的评价荧光探针聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法与液体培养基培养法检测阴道分泌物中解脲脲原体(ureaplasma urealyticum,UU)的临床应用价值。方法选取江苏省东台市人民医院检验科2019年1月—2021年12月收治的138例疑似泌尿生殖道感染者,分别采用荧光探针PCR法和液体培养法检测阴道分泌物,以Amsel临床诊断标准为金标准,比较两种方法的解脲脲原体检出率,并比较联合方式和单一方式检测疾病的诊断效能,对比两种方式报告获取时间。结果液体培养基培养法对UU的检出率为76.09%,高于荧光探针PCR法的57.25%,差异有统计学意义(P=0.031);两种方式联合对疾病的诊断灵敏度、特异度和准确率高于单一检测方式,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光探针PCR法报告获取时间明显短于液体培养基培养法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论建议临床联合使用两种方法同时检测,更有利于解脲脲原体感染的诊断和治疗。 展开更多
关键词 荧光探针pcr 液体培养法 解脲脲原体 诊断效能
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鹅副粘病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
13
作者 张桐源 林颖 +3 位作者 耿庆华 龙朕 林书铭 赵玉军 《现代畜牧兽医》 2011年第5期63-65,共3页
根据GenBank所载鹅副粘病毒(GPMV)的F基因保守区序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增F基因片段,克隆、测序后,采取Taqman探针法建立了检测鹅副粘病毒的荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法特异性强,敏感性高,可以用于鹅副粘病毒的... 根据GenBank所载鹅副粘病毒(GPMV)的F基因保守区序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增F基因片段,克隆、测序后,采取Taqman探针法建立了检测鹅副粘病毒的荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法特异性强,敏感性高,可以用于鹅副粘病毒的检测。 展开更多
关键词 鹅副粘病毒 Taqman探针法 荧光RT—pcr
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小鹅瘟病毒荧光PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 龙朕 林颖 +3 位作者 张桐源 盛明巍 耿庆华 赵玉军 《现代畜牧兽医》 2010年第5期51-54,共4页
依据GenBank小鹅瘟病毒(GPV)的NS基因保守区设计一对特异性引物,利用PCR扩增NS区片段,克隆、测序,采取Taqman探针法,构建小鹅瘟病毒的荧光PCR检测方法。结果表明,该方法检测GPV具有很高的特异性和敏感性,可以用于小鹅瘟病毒的检测。
关键词 小鹅瘟病毒 Taqman探针法 荧光pcr
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PCR-荧光探针法检测MTHFR C677T基因多态性及其与复发性流产的相关性 被引量:4
15
作者 白微 唐少华 《数理医药学杂志》 2019年第6期868-870,共3页
目的:探讨温州地区复发性流产与5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T多态性的相关性。方法:回顾性分析2015年6月~2016年6月某院中医妇科保胎住院患者188例,根据自然流产病史分为对照组和RSA组。无自然流产史及无其他不良妊娠史且生... 目的:探讨温州地区复发性流产与5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T多态性的相关性。方法:回顾性分析2015年6月~2016年6月某院中医妇科保胎住院患者188例,根据自然流产病史分为对照组和RSA组。无自然流产史及无其他不良妊娠史且生育过健孩为对照组,连续自然流产2次及以上为RSA组,利用PCR-荧光探针法检测MTHFRC677T基因型,分析该方法的性能,比较RSA组和对照组基因型、等位基因的分布频率,分析MTHFR677T与RSA的关系。结果:MTHFRC677T三种基因型及等位基因在对照组中的分布频率分别为CC(41.4%)、CT(46.5%)、TT(12.1%)和C(65.7%)、T(32.3%);在RSA组中的分布频率分别为CC(37.5%)、CT(38.9%)、TT(23.6%)和C(56.9%)、T(43.1%),两组中的分布差异无统计学意义。结论:尚不能认为温州地区MTHFRC677T基因多态性与复发性流产具有相关性。 展开更多
关键词 复发性流产 5 10-亚甲基四氢叶酸还原酶 pcr-荧光探针法
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胶体金法和PCR-荧光探针法联合检测手足口病患儿肠道病毒71型 被引量:2
16
作者 冯强 《中国医药指南》 2012年第27期443-444,共2页
目的探讨胶体金法检测EV71型病毒IgM抗体和检测EV71型病毒核酸的临床应用。方法胶体金法和PCR-荧光探针法联合检测EV71型病毒并对结果进行比较。结果胶体金法检测EV71型病毒IgM抗体和PCR-荧光探针法检测EV71型病毒核酸相比无显著差异(P&... 目的探讨胶体金法检测EV71型病毒IgM抗体和检测EV71型病毒核酸的临床应用。方法胶体金法和PCR-荧光探针法联合检测EV71型病毒并对结果进行比较。结果胶体金法检测EV71型病毒IgM抗体和PCR-荧光探针法检测EV71型病毒核酸相比无显著差异(P>0.05)。结论胶体金法和PCR-荧光探针法联合检测EV71型病毒既能保证快速检测,又能提高准确性。 展开更多
关键词 胶体金法 pcr-荧光探针法 肠道病毒71型
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PCR-荧光探针法检测庆阳地区丙型肝炎病毒基因型 被引量:6
17
作者 侯娟娟 张志峰 +4 位作者 张吉平 席维岳 郑红军 赵海燕 李娟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1527-1530,共4页
目的:应用PCR-荧光探针法分析庆阳地区丙型肝炎患者基因型,并对PCR-荧光探针法的各种性能进行评价。方法:收集庆阳地区289例各种丙型肝炎患者的临床资料和外周静脉血,采用PCR-荧光探针法检测其基因型,并和PCR-反向点杂交法、测序法进行... 目的:应用PCR-荧光探针法分析庆阳地区丙型肝炎患者基因型,并对PCR-荧光探针法的各种性能进行评价。方法:收集庆阳地区289例各种丙型肝炎患者的临床资料和外周静脉血,采用PCR-荧光探针法检测其基因型,并和PCR-反向点杂交法、测序法进行比较。结果:289份HCV RNA阳性血清标本中,PCR-荧光探针法基因型及亚型检出率为99.3%(287/289),其中1b型139例(48.1%),2a型136例(47.1%),3a型7例(2.4%),3b型5例(1.7%),未分出型2例(0.7%)。PCR-荧光探针法的特异度和准确度为100%,重复性良好,并与PCR-反向点杂交法、巢式PCR测序法分型结果均一致,三种方法的一致率为98.2%(56/57),差异无统计学意义(P>0.05)。1b基因型患者ALT、AST、PLT和HCVRNA(lg)水平均高于2a基因型患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:庆阳地区HCV基因型呈现多基因型分布特点,主要为1b型和2a型,且2a型和1b型的比例相当,呈现出2a型比例升高,1b型下降的趋势;PCR-荧光探针法HCV基因分型敏感度和特异度高,方法简单,适合临床实验中应用。 展开更多
关键词 pcr-荧光探针法 庆阳 丙肝 基因型
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猫传染性腹膜炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 杨妮 韩佃刚 +6 位作者 杨云庆 叶玲玲 李静 周思佳 宿放 艾军 信吉阁 《中国动物检疫》 CAS 2022年第10期127-131,共5页
为快速、灵敏、准确检测猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV),以FIPV N基因为靶序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,建立了一种FIPV实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了... 为快速、灵敏、准确检测猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV),以FIPV N基因为靶序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,建立了一种FIPV实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了试验。结果表明:该方法灵敏度高,最低检测限为3.4 copies/μL;特异性强,与狂犬病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒、犬流感病毒、犬瘟热病毒等均无交叉反应;重复性好,批内变异系数为0.99%~4.13%,批间变异系数为1.29%~4.64%。以上结果说明,本试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法特异、敏感、重复性好,适用于FIPV的快速检测。 展开更多
关键词 猫传染性腹膜炎病毒 N基因 TAQMAN探针 荧光定量pcr 检测方法
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PCR荧光探针法联合DNA微阵列芯片法检测在肺结核诊断和治疗中的应用 被引量:3
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作者 王晓红 《中国当代医药》 CAS 2021年第32期173-175,179,共4页
目的探讨PCR荧光探针法联合DNA微阵列芯片法检测在肺结核诊断和治疗中的应用效果。方法选取2020年1月至10月上饶市第二人民医院收治的128例肺结核患者为观察组,另外选取同期40例非肺结核患者为对照组,留取两组对象晨痰,采用痰涂片抗酸... 目的探讨PCR荧光探针法联合DNA微阵列芯片法检测在肺结核诊断和治疗中的应用效果。方法选取2020年1月至10月上饶市第二人民医院收治的128例肺结核患者为观察组,另外选取同期40例非肺结核患者为对照组,留取两组对象晨痰,采用痰涂片抗酸染色、血清结核抗体及PCR荧光探针法进行结核分枝杆菌检测,再采用DNA微阵列芯片法将PCR荧光探针法检出结核分枝杆菌的痰液进行结核耐药性检测,比较三种方法的诊断效能,统计DNA微阵列芯片法检测利福平和异烟肼耐药性结果。结果PCR荧光探针法诊断肺结核的灵敏度、特异度、阳性预测值、准确度高于痰涂片抗酸染色、血清结核抗体检测,差异有统计学意义(P<0.05);应用DNA微阵列芯片法检出利福平敏感45例,耐药11例;异烟肼敏感44例,耐药12例;双重耐药5例。结论PCR荧光探针法联合DNA微阵列芯片法既能提高结核分枝杆菌的阳性率,也能快速检测结核分枝杆菌的耐药性,检测速度快,48 h即可获得诊断及耐药结果,可以协助早期诊断,制定有效的治疗方案,对改善肺结核患者预后具有重要意义。 展开更多
关键词 pcr荧光探针法 DNA微阵列芯片 肺结核 耐药性 诊断
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PCR-荧光探针法检测婴幼儿和儿童人鼻病毒的初步评估 被引量:1
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作者 甘正飞 欧顺婧 +4 位作者 邓国珍 黄晓雪 罗弘志 郑杨 查何 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第9期1033-1036,共4页
目的通过PCR-荧光探针法和Sanger测序法检测呼吸道感染婴幼儿和儿童人鼻病毒(HRV)的感染情况,以评估PCR-荧光探针法的病毒检测能力,并分析HRV载量对患儿临床指标的影响。方法收集2019年5—7月在遵义医科大学第三附属医院住院收治的具有... 目的通过PCR-荧光探针法和Sanger测序法检测呼吸道感染婴幼儿和儿童人鼻病毒(HRV)的感染情况,以评估PCR-荧光探针法的病毒检测能力,并分析HRV载量对患儿临床指标的影响。方法收集2019年5—7月在遵义医科大学第三附属医院住院收治的具有呼吸道感染症状的175例患儿的鼻咽拭子标本,采用PCR-荧光探针法和Sanger测序法检测HRV感染情况并分析HRV载量对婴幼儿和儿童临床指标的影响。结果PCR-荧光探针法检出阳性标本51份(51/175,29.14%),阴性标本124份(124/175,70.86%)。Sanger测序法检出阳性标本48份(48/175,27.43%),阴性标本127份(127/175,72.57%)。与Sanger测序法相比,PCR-荧光探针法检测HRV的灵敏度和特异度分别为100.00%和97.64%,阳性预测值和阴性预测值分别为94.12%和100.00%,一致率为95.80%。两种方法对HRV的检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高载量病毒组和低载量病毒组住院天数、入院前最高体温、发热天数、白细胞计数、淋巴细胞百分比及降钙素原比较,差异均无统计学意义(P>0.05),超敏C反应蛋白比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PCR-荧光探针法检测HRV灵敏度高、特异度高、检测周期短、费用较低且操作简便快捷,可在临床检测HRV中广泛推广。此外,高载量HRV的婴幼儿和儿童的超敏C反应蛋白水平较低载量HRV的婴幼儿和儿童更高。 展开更多
关键词 人鼻病毒 pcr-荧光探针法 Sanger测序法 临床特征
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