RPA检测技术在禽源病原检测中的研究进展

重组酶聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification, RPA)是一种近年来研究者关注较多的新型恒温核酸扩增技术,该方法操作便捷、扩增速度快、特异性强及灵敏度高,无需借助精密仪器,且在恒温环境下(25~45℃)即可完成核酸检测,极有可能取代传统PCR检测技术。RPA检测技术迄今发展十余年,已广泛应用于细菌、病毒、真菌、寄生虫及耐药基因检测等领域,被认为是当前最有潜力的快速分子诊断工具,具有较为广泛的应用前景。笔者就RPA检测、技术优势、常见检测方式及其在禽源病原检测方面的研究进展进行概述,旨在为临床禽源病原新型检测技术的研究提供一定理论参考。

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用分析

目的采用统计学方法评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)在临床淋球菌检测中的应用。方法以淋球菌培养法为标准对照,采用实时荧光核酸恒温扩增技术同时对150例疑似患者的生殖道拭子标本和尿液标本进行检测,对结果进行统计学分析比较,并用PCR法进行验证。结果使用SAT检测的生殖道拭子和尿液阳性检出均为110例,培养法阳性检出为108例,其中培养法检出阴性的2例通过PCR验证为阳性。两种取样方式的SAT检测法和培养法三者阳性率差异均无统计学意义(P>0.05);以培养法为金标准,SAT检测拭子的敏感度为100.0%,特异度为95.2%;SAT检测尿液标本的敏感度为100.0%,特异度为95.2%。结论采用实时荧光核酸恒温扩增技术对生殖道拭子和尿道标本的检测效果与培养法相比,阳性率高,敏感度较高,且尿道标本收集方法比较简便,患者依从性好,可代替拭子道取样方法,此方法可在临床推广应用。

比较实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和液体培养法在解脲脲原体(UU)检测中的诊断价值

目的:研究在解脲脲原体(UU)检测中实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和液体培养法的诊断价值。方法:收集141例2018年6月~2019年6月间前来某院就诊的疑似解脲脲原体感染的患者为研究对象,所有患者均采集2份拭子样本,其中1份拭子样本进行SAT检测,1分拭子样本进行液体培养,比较两种检测结果。结果:SAT法检测阳性率低于液体培养法(P<0.05);SAT法检测灵敏度高于液体培养法(P<0.05),特异度高于液体培养法(P<0.05)。结论:解脲脲原体(UU)检测中SAT法比液体培养法灵敏度和特异度高,而且低污染、时间短、样本采集方便、反应稳定,检测结果更加准确。

实时荧光核酸恒温扩增技术和尿液快速检测法对孕前优生健康检查人群中淋球菌检测的应用比较

目的:比较实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和尿液快速检测法在淋球菌检测中的诊断价值,以选择更为准确、快速、实用的临床检测方法。方法:采集某站孕前优生健康检查人群200例,每例分别进行快速法和SAT法检测,每例另取1份分泌物拭子标本做分离培养金标准对照用。结果:快速法阳性率为28%,SAT法阳性率为22%,其中疑似标本快速法与SAT法阳性率分别为44%、39%,无症状标本快速法与SAT阳性率分别为12%、5%。尿液快速法的敏感性和特异性分别为100%、90%,SAT法的敏感性和特异性分别为100%、97.5%。结论:尿液快速法与SAT法的敏感性均较好,SAT法的特异性高于尿液快速法。尿液快速法简单、灵敏,可作为基层单位大批量体检标本的初筛方法,SAT技术精准、特异,针对可疑标本配合使用可以帮助临床综合诊断,提高淋球菌检测的准确率。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测无创样本沙眼衣原体的性能

目的评估实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测无创样本沙眼衣原体的性能。方法以罗氏Cobas®4800CT/NG作为参照试剂,收集广西壮族自治区皮肤病研究所性病门诊就诊的男性患者尿液样本(248份)及女性患者阴道拭子样本(224份),评估SAT法检测沙眼衣原体的临床性能。结果最终有470份样本纳入统计。罗氏PCR检出阳性60例(12.8%),男性阳性数33例,女性27例;SAT检出沙眼衣原体阳性41例(8.7%),男性阳性数19例,女性22例。SAT试剂应用男性尿液检测的灵敏度为57.58%,特异性为99.06%;女性阴道拭子检测的灵敏度为81.48%,特异性100.00%。结论SAT试剂可以应用于无创样本,但是其应用尿液检测沙眼衣原体上还需要对尿液的核酸提取方法进一步的优化,提高其检测的灵敏性。

实时荧光核酸恒温扩增检测技术、胶体金法、酶联免疫法在检测儿童肺炎支原体感染中的应用比较

目的比较实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)、胶体金法、酶联免疫法3种不同检测方法在儿童肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia,Mp)感染中的应用。方法用实时荧光核酸恒温扩增检测技术、胶体金法和酶联免疫法3种检测方法检测300例肺炎患儿发病期及痊愈期的Mp感染状况,并进行相关统计分析。结果实时荧光核酸恒温扩增检测技术、胶体金法和酶联免疫法3种检测方法发病期阳性率分别为29.9%、16.63%、20.07%,3者比较差异有统计学意义(P<0.05)。痊愈期实时荧光核酸恒温扩增检测技术、胶体金法及酶联免疫法阳性率分别为1.9%、26.3%、21.9%,3者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SAT-MP是感染初期发现肺炎支原体的有效和有价值的诊断工具。胶体金法和酶联免疫法在支原体肺炎痊愈期检测阳性率较高,各种方法之间是一种互相补充的关系。

实时荧光核酸恒温扩增结合血清生化指标在肺结核诊断中的应用价值

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测(SAT)结合血清性激素结合蛋白(SHBG)、血清淀粉样蛋白4(SAA4)、NK细胞检测在诊断肺结核中的价值。方法选择2018年4月—2020年1月间的肺结核患者72例作为肺结核组,同期治疗的非肺结核患者57例为对照组。肺结核均经结核分枝杆菌培养确诊,测定SAT,用酶联免疫吸附试验检测SHBG、SAA4,用FASCalibur流式细胞仪测外周血NK细胞;根据ROC曲线分析不同指标诊断效能。结果 72例肺结核患者中有70例经SAT诊断,与临床诊断符合率为97.22%;肺结核组SHBG、SAA4水平分别为(153.98±32.57)mmol/L、(98.23±6.81)ng/mL,均高于对照组[(61.36±4.34)mmol/L、(42.98±4.16)ng/mL](P <0.05);NK细胞水平(11.51±2.14)%低于对照组(16.79±3.12)%(P <0.05);ROC曲线结果表明,SAT联合SHBG、SAA4及NK细胞在肺结核诊断中的灵敏度高于单一SAT、SHBG、SAA4及NK细胞检测(P <0.05);特异度低于单一检测(P <0.05)。结论血清SAT、SHBG、SAA4及NK细胞在肺结核患者中表达异常,联合检测能获得较高的诊断效能。