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CKIP-1 siRNA影响膝关节骨性关节炎进展的动物实验研究
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作者 戴章生 《齐齐哈尔医学院学报》 2024年第17期1601-1605,共5页
目的 探讨CKIP-1 siRNA对膝关节骨性关节炎进展的影响研究。方法 建立大鼠膝关节骨关节炎模型,选取其中一只分离培养实验大鼠骨髓间充质干细胞,分为空白组、阴性对照组和不同浓度的Ckip-1 siRNA组(10 pmol/ml、20 pmol/ml和50 pmol/ml)... 目的 探讨CKIP-1 siRNA对膝关节骨性关节炎进展的影响研究。方法 建立大鼠膝关节骨关节炎模型,选取其中一只分离培养实验大鼠骨髓间充质干细胞,分为空白组、阴性对照组和不同浓度的Ckip-1 siRNA组(10 pmol/ml、20 pmol/ml和50 pmol/ml)检测不同组的Ckip-1 siRNA表达量,确定最佳的Ckip-1 siRNA组为50 pmol/ml;将大鼠模型分为模型组20只、生理盐水组20只、CKIP-1 siRNA组20只,向生理盐水组注射生理盐水,向CKIP-1 siRNA组注射CKIP-1 siRNA干预的骨髓间充质干细胞,空白组不做处置。检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量,检测其成骨能力变化情况。结果 检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量明显增加(P<0.05),检测其成骨能力增强(P<0.05)。结论 Ckip-1基因对骨髓间充质干细胞的负调控作用。CKIP-1 siRNA干预后骨髓间充质干细胞能够增加实验鼠膝关节处骨再生能力,为膝关节骨性关节炎的治疗提供新的方法,期望能够提出新的靶点。 展开更多
关键词 CKIP-1 sirna 膝关节骨性关节炎 动物实验 机制进展
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融合蛋白anti-EGFR-iRGD修饰的红细胞外囊泡联合siRNA靶向抑制三阴性乳腺癌恶性进程
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作者 韦雪妮 杨忠慧 +2 位作者 黄吉 陈国梅 成昌娟 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第17期3197-3205,共9页
目的:通过红细胞来源的细胞外囊泡(red blood cell-derived extracellular vesicles,RBCEVs)构建靶向递送系统以提高对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性进程的抑制效率。方法:采用脂质插入法将融合蛋白anti-抗人... 目的:通过红细胞来源的细胞外囊泡(red blood cell-derived extracellular vesicles,RBCEVs)构建靶向递送系统以提高对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性进程的抑制效率。方法:采用脂质插入法将融合蛋白anti-抗人表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)-iRGD多肽结合至RBCEVs膜表面以构建生物相容性药物递送系统。通过电穿孔方式使连环蛋白β1(Catenin Beta 1,CTNNB1)-siRNA有效装载至anti-EGFR-iRGD-RBCEVs。进一步验证anti-EGFR-iRGD-si-CTNNB1-RBCEVs对TNBC增殖、迁移的影响及对上皮间充质转化相关蛋白表达的调控。结果:anti-EGFR-iRGD-si-CTNNB1-RBCEVs在120 h内具有较高血清稳定性,并且可有效防止RNA酶对CTNNB1-siRNA的降解。另外,该复合物可显著提高si-CTNNB1对TNBC细胞中CTNNB1基因及β-catenin蛋白的抑制作用并抑制TNBC细胞的增殖、迁移能力,下调Snail、Vimentin、N-cadherin并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:该研究通过构建融合蛋白anti-EGFR-iRGD修饰的RBCEVs联合siRNA靶向抑制TNBC恶性进程,这将为治疗整合素α_(v)β_(3)高表达的TNBC提供更有利治疗方式。 展开更多
关键词 红细胞来源的细胞外囊泡 三阴性乳腺癌 sirna 上皮间充质转化 脂质插入法 连环蛋白β1
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纳米凝胶搭载的siRNA通过靶向抑制施万细胞铁死亡促进周围神经损伤修复
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作者 杨俊 黄欣林 +3 位作者 覃汉俊 谢思远 朱煜华 吴珺 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2024年第4期495-503,共9页
目的:探究周围神经损伤(PNI)后施万细胞的死亡机制,使用纳米凝胶搭载的siRNA靶向抑制施万细胞死亡。方法:下载GEO数据库中PNI的转录组数据,依次进行数据处理、差异分析、GO功能富集分析、铁死亡通路鉴定以及靶基因的筛选。通过蛋白印记... 目的:探究周围神经损伤(PNI)后施万细胞的死亡机制,使用纳米凝胶搭载的siRNA靶向抑制施万细胞死亡。方法:下载GEO数据库中PNI的转录组数据,依次进行数据处理、差异分析、GO功能富集分析、铁死亡通路鉴定以及靶基因的筛选。通过蛋白印记和qPCR实验验证靶基因的差异性。自组装单宁酸(TA)-siRNA纳米凝胶,通过丁达尔效应实验、粒径和电位测量、细胞吞噬实验、细胞骨架染色和CCK-8细胞活力实验鉴定纳米凝胶的物理学和生物学特性。通过划痕实验、免疫荧光染色实验、蛋白印记和qPCR实验验证TA-siRNA纳米凝胶抑制施万细胞铁死亡的有效性。结果:PNI后施万细胞出现明显的铁死亡现象,Bex1是调控施万细胞铁死亡的关键基因。TA-siRNA纳米凝胶具有优良的物理学和生物学特性,能够将siRNA成功地携带到损伤的施万细胞中并沉默靶基因,从而有效地抑制施万细胞损伤后的铁死亡。结论:纳米凝胶搭载的siRNA可以靶向抑制施万细胞铁死亡,为临床治疗PNI提供新的方向。 展开更多
关键词 周围神经损伤 施万细胞 铁死亡 纳米凝胶 sirna 靶向治疗
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创面siRNA敲降HO-1改善小鼠放创复合伤创面愈合的实验研究
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作者 吕晓凡 汪国建 +5 位作者 赵娜 龙爽 王双 冉新泽 王军平 王涛 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1194-1205,共12页
目的检测血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在放创复合伤(radiation-wound combined injury,R-W-CI)创面修复中的表达情况,评价通过siRNA敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。方法将36只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法... 目的检测血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在放创复合伤(radiation-wound combined injury,R-W-CI)创面修复中的表达情况,评价通过siRNA敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。方法将36只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为单纯皮肤创伤组(W组,n=18)和合并全身辐射(6 Gy)损伤的皮肤创伤组(R-W-CI组,n=18),建立单纯皮肤创伤与放创复合伤的小鼠模型。在创面愈合过程中,拍照记录创面愈合情况并通过Image J量化分析残留面积;取材创面组织进行HE染色及病理组织学观察;动态检测外周血象评估造血系统损伤情况。通过创面组织定量PCR及Western blot检测创面HO-1表达水平及变化情况。将26只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为siRNA敲降HO-1组(si-HO-1组,n=13)和siRNA阴性对照组(si-NC组,n=13)。放创复合伤致伤后,si-HO-1组在每个创面涂抹负载si-HO-1(5μmol/L)的F127凝胶60μL,si-NC组创面涂抹等量负载阴性对照si-NC的F127凝胶。通过创面组织Western blot检测HO-1的敲降情况,观察创面面积变化,对伤后第3天样本进行定量PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达变化,组织切片进行Ki67免疫组织化学和HE染色;对第9天创面组织进行HE染色病理评估;综合评价敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。结果与W组相比,创面残留面积的半定量分析表明R-W-CI组愈合在伤后第7、10天显著延迟(P<0.01);第7天的HE病理显示R-W-CI组再上皮化延缓,肉芽组织生长不良;同时R-W-CI组外周血白细胞及其分类计数显示在损伤后早期即显著下降(P<0.05)。检测发现,R-W-CI组创面HO-1蛋白在伤后第3、7天表达略高于W组,但无显著差异(P>0.05),而在第10天显著升高(P<0.05),同时伴有全长与截短形式的分布改变;定量PCR显示R-W-CI组在伤后第7天、10天的创面组织HO-1的表达显著高于W组(P<0.05)。放创复合伤创面siRNA干预实验显示:与si-NC组比较,si-HO-1组能有效敲降创面HO-1蛋白含量(P<0.05),促进伤口收缩(P<0.05),减小创面宽度(P<0.01),上调致伤第3天创面IL-6、TNF-α等炎症因子表达,促进创缘组织细胞增殖,改善肉芽组织生长情况。结论放创复合伤创面修复过程中存在HO-1蛋白的持续高表达,创面siRNA敲降HO-1可以改善R-W-CI组小鼠创面乏炎状态,促进创面愈合。 展开更多
关键词 放创复合伤 创面愈合 炎症反应 血红素加氧酶1 小干扰RNA
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Targeted anti-cancer therapy: Co-delivery of VEGF siRNA and Phenethyl isothiocyanate (PEITC) via cRGD-modified lipid nanoparticles for enhanced anti-angiogenic efficacy 被引量:1
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作者 Bao Li Haoran Niu +10 位作者 Xiaoyun Zhao Xiaoyu Huang Yu Ding Ke Dang Tianzhi Yang Yongfeng Chen Jizhuang Ma Xiaohong Liu Keda Zhang Huichao Xie Pingtian Ding 《Asian Journal of Pharmaceutical Sciences》 SCIE CAS 2024年第2期170-187,共18页
Anti-tumor angiogenesis therapy, targeting the suppression of blood vessel growth in tumors, presents a potent approach in the battle against cancer. Traditional therapies have primarily concentrated on single-target ... Anti-tumor angiogenesis therapy, targeting the suppression of blood vessel growth in tumors, presents a potent approach in the battle against cancer. Traditional therapies have primarily concentrated on single-target techniques, with a specific emphasis on targeting the vascular endothelial growth factor, but have not reached ideal therapeutic efficacy. In response to this issue, our study introduced a novel nanoparticle system known as CS-siRNA/PEITC&L-cRGD NPs. These chitosan-based nanoparticles have been recognized for their excellent biocompatibility and ability to deliver genes. To enhance their targeted delivery capability, they were combined with a cyclic RGD peptide (cRGD). Targeted co-delivery of gene and chemotherapeutic agents was achieved through the use of a negatively charged lipid shell and cRGD, which possesses high affinity for integrin αvβ3 overexpressed in tumor cells and neovasculature. In this multifaceted approach, co-delivery of VEGF siRNA and phenethyl isothiocyanate (PEITC) was employed to target both tumor vascular endothelial cells and tumor cells simultaneously. The co-delivery of VEGF siRNA and PEITC could achieve precise silencing of VEGF, inhibit the accumulation of HIF-1α under hypoxic conditions, and induce apoptosis in tumor cells. In summary, we have successfully developed a nanoparticle delivery platform that utilizes a dual mechanism of action of anti-tumor angiogenesis and pro-tumor apoptosis, which provides a robust and potent strategy for the delivery of anti-cancer therapeutics. 展开更多
关键词 ANTI-ANGIOGENESIS Tumor apoptosis Nanoparticles VEGF sirna Hypoxia inducible factor(HIF)-1 protein Phenethyl isothi ocyanate(PEITC)
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靶向端粒酶逆转录酶基因siRNA抑制兔早期后发性白内障的实验研究
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作者 张翔翔 何娜 +1 位作者 何佳玲 吕志刚 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2024年第1期60-66,共7页
目的观察靶向端粒酶逆转录酶(TERT)基因小干扰RNA(siRNA)对兔眼白内障术后早期晶状体后囊膜混浊的抑制作用。方法选取20只新西兰大白兔(40眼)纳入研究,采用自身对照法,分为2组:右眼为靶向TERT基因siRNA重组腺病毒TERT-siRNA-Adv组(实验... 目的观察靶向端粒酶逆转录酶(TERT)基因小干扰RNA(siRNA)对兔眼白内障术后早期晶状体后囊膜混浊的抑制作用。方法选取20只新西兰大白兔(40眼)纳入研究,采用自身对照法,分为2组:右眼为靶向TERT基因siRNA重组腺病毒TERT-siRNA-Adv组(实验组),左眼为阴性对照重组腺病毒Adv组(对照组),每组20眼;均实施超声乳化晶状体吸除术,术后前房内分别注入0.1 mL滴度为10^(9) PFU/mL的TERT-siRNA-Adv和阴性对照腺病毒;术后第1天、1周、2周、4周观察眼压、角膜水肿、前房闪辉及后发性白内障(PCO)分级情况,术后4周对术眼各组织行病理学检查及采用Western印迹法检测后囊膜细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。结果实验组后囊膜混浊较对照组明显减轻(P<0.05);术后早期存在轻度眼压升高以及眼前节炎症反应(角膜水肿、前房闪辉),但于术后1周恢复,2组间差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,实验组后囊膜细胞内α-SMA相对表达量明显下降(P<0.05);组织病理学结果显示,实验组后囊膜下少量成纤维细胞增殖,对照组后囊膜下多层成纤维细胞增殖,囊膜结构紊乱;2组角膜、虹膜各层组织细胞排列整齐,结构完整,无明显炎性细胞浸润。结论靶向TERT基因siRNA可有效抑制晶状体上皮细胞增殖以及兔早期PCO的发生,且对眼前段各组织无明显毒性作用。 展开更多
关键词 后囊膜混浊 端粒酶逆转录酶 sirna 角膜水肿 前房闪辉 晶状体上皮细胞
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靶向核转录因子-κB的siRNA和甲氨蝶呤纳米脂质体对类风湿关节炎大鼠骨破坏的影响
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作者 段卫峰 张景伟 +1 位作者 卢岩岩 杜志军 《风湿病与关节炎》 2024年第9期1-6,共6页
目的:探讨靶向核转录因子-κB(NF-κB)的siRNA和甲氨蝶呤(MTX)复合纳米脂质体对胶原诱导类风湿关节炎模型大鼠骨破坏的影响。方法:将48只健康SD大鼠随机分为空白对照组10只和造模组38只。造模成功的30只大鼠随机分为模型对照组、MTX组、... 目的:探讨靶向核转录因子-κB(NF-κB)的siRNA和甲氨蝶呤(MTX)复合纳米脂质体对胶原诱导类风湿关节炎模型大鼠骨破坏的影响。方法:将48只健康SD大鼠随机分为空白对照组10只和造模组38只。造模成功的30只大鼠随机分为模型对照组、MTX组、MTX复合纳米脂质体组(si-MTX组),每组10只。测量各组大鼠治疗前后体质量、脏器指数、足趾肿胀度、血清中炎性因子水平,以及滑膜组织中相关基因和蛋白的表达水平。结果:MTX和复合纳米脂质体均可显著降低胶原诱导性关节炎大鼠胸腺指数、脾指数、足跖肿胀度,降低血清中炎症因子水平,调节滑膜组织中相关基因和蛋白的表达(P<0.05),且si-MTX组作用更强(P<0.05)。结论:复合纳米脂质体发挥作用的机制可能是阻断了NF-κB通路,减少促炎因子释放,抑制骨吸收,保护关节软骨,且靶向性、安全性更高。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 sirna 核转录因子-ΚB 甲氨蝶呤 纳米 脂质体 骨破坏
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靶向抗HSV-1的siRNA研究进展
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作者 周磊 吕雯雯 +2 位作者 段永忠 钱雯 程继帅 《昆明医科大学学报》 CAS 2024年第9期1-8,共8页
单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一种能够在各类人群中携带和传播并能引起包括口唇疱疹、荚膜炎、角膜炎和病毒性脑炎等疾病的重要病原体。虽然已有多种类型的HSV-1疫苗处于研发的不同阶段,但仍没有商业化的疫苗... 单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一种能够在各类人群中携带和传播并能引起包括口唇疱疹、荚膜炎、角膜炎和病毒性脑炎等疾病的重要病原体。虽然已有多种类型的HSV-1疫苗处于研发的不同阶段,但仍没有商业化的疫苗上市销售。临床上使用的特异性抗HSV-1药物如阿昔洛韦、伐昔洛韦和喷昔洛韦等也面临严重的抗药性威胁,开发新的特异性抗HSV-1药物是当前所面临的主要任务之一。siRNA是一种长度为20~25核苷酸的双链RNA,通过在转录后水平上沉默基因表达发挥干扰作用。siRNA作为一种新的、有潜力的抗病毒药物备受关注,发展也较为迅速。综述近年来siRNA在抗HSV-1方面的研究进展,包括靶向HSV-1关键基因和HSV-1互作的宿主细胞基因的siRNA设计、递送和靶向策略。 展开更多
关键词 小干扰RNA 单纯疱疹病毒1型 靶向调控
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番茄中Ty-1抗性机制研究中siRNA含量的测定
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作者 黄毅 《种子科技》 2024年第20期8-10,共3页
Ty-1抗性基因是一种被广泛应用于预防番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的基因。该基因已被克隆,并被证明代表了一类新型的R基因,其编码一种为RNA依赖的RNA聚合酶(RDR),这种酶与已知在RNAi信号扩增中起作用的RDR1、RDR2和RDR6有所不同。近期研究... Ty-1抗性基因是一种被广泛应用于预防番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的基因。该基因已被克隆,并被证明代表了一类新型的R基因,其编码一种为RNA依赖的RNA聚合酶(RDR),这种酶与已知在RNAi信号扩增中起作用的RDR1、RDR2和RDR6有所不同。近期研究表明,Ty-1通过增强转录基因沉默(TGS)来获得抗性,并且还能防御与之相关的双组分番茄严重皱缩双生病毒(ToSRV)。在带有Ty-1基因的番茄植株中,利用病毒诱导的基因沉默(TRV2-180和TRV2-190)技术,证明Ty-1抗性基因还能够保护植物免受单组分、叶蝉传播的甜菜曲顶病毒(BCTV)的感染。虽然已知的siRNA是DNA甲基化(RdDM)和诱导TGS所必需的因素,但是在本次实验中未能成功证明Ty-1番茄植物中24-nt大小siRNA的相对富集情况。 展开更多
关键词 番茄 Ty-1抗性机制 sirna
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新型siRNA药物:Inclisiran在降脂治疗中的研究进展 被引量:5
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作者 侯立强 孙燕 +2 位作者 任雷 邢俊香 陈萍 《中国医药导刊》 2023年第2期140-145,共6页
在心血管疾病的危险因素中,脂质代谢失调是最常见和最危险的因素之一,因而降脂治疗在减少心血管疾病发病率和死亡率方面具有重要意义。Inclisiran是一种以前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)为靶点的新型小干扰RNA(siRNA)药物。Inclisiran... 在心血管疾病的危险因素中,脂质代谢失调是最常见和最危险的因素之一,因而降脂治疗在减少心血管疾病发病率和死亡率方面具有重要意义。Inclisiran是一种以前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)为靶点的新型小干扰RNA(siRNA)药物。Inclisiran复合物能特异性结合PCSK9的信使RNA,阻断PCSK9蛋白质的合成,促进低密度脂蛋白受体的再循环,增加血液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的再摄取和降解,从而降低LDL-C水平。Inclisiran是一种高效、长效、不良反应少的新型降脂药物,每年两次给药可使血中LDL-C水平下降50%以上,为降脂治疗带来了新的选择。通过查阅近年来国内外相关文献,本文对Inclisiran的化学结构、药理作用机制、在降脂方面的药物临床试验及安全性研究等方面的研究进行综述。 展开更多
关键词 Inclisiran 降脂治疗 小干扰RNA 前蛋白转化酶枯草溶菌素9 低密度脂蛋白胆固醇
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葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea胞内miRNA及siRNA的鉴定与分析 被引量:1
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作者 章鹏程 俞沁如 +4 位作者 刘瑶瑶 王寒怡 胡奕然 赖童飞 周婷 《杭州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2023年第2期158-166,共9页
通过ITS-rDNA检测和形态学典型特征观察确定葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的遗传背景,并对其胞内小RNA测序.新预测10个miRNAs和298个siRNAs,并分析了预测的miRNAs和siRNAs的序列信息、结构、长度分布、碱基偏好性、表达情况,为在... 通过ITS-rDNA检测和形态学典型特征观察确定葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的遗传背景,并对其胞内小RNA测序.新预测10个miRNAs和298个siRNAs,并分析了预测的miRNAs和siRNAs的序列信息、结构、长度分布、碱基偏好性、表达情况,为在分子水平了解葡萄座腔菌发育和致病机制提供了理论基础. 展开更多
关键词 葡萄座腔菌 内转录间隔区 微小RNA 小干扰RNA
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PH敏感型阿霉素/CTLA-4 siRNA纳米载体抑制肾细胞癌的生长
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作者 拜合提亚·阿扎提 李前进 +1 位作者 刘强 王玉杰 《西部医学》 2023年第1期46-51,共6页
目的探索PH敏感型阿霉素/CTLA-4 siRNA纳米载体是否可以激活抗肿瘤免疫并抑制肾透明细胞癌的生长。方法化学合成PH敏感型阿霉素/CTLA-4 siRNA纳米载体(P-LDs),电镜观测其形态,差示扫描量热法测定粒径;流式细胞术检测脾淋巴细胞对P-LDs... 目的探索PH敏感型阿霉素/CTLA-4 siRNA纳米载体是否可以激活抗肿瘤免疫并抑制肾透明细胞癌的生长。方法化学合成PH敏感型阿霉素/CTLA-4 siRNA纳米载体(P-LDs),电镜观测其形态,差示扫描量热法测定粒径;流式细胞术检测脾淋巴细胞对P-LDs的摄取;Western blot检测脾淋巴细胞CTLA-4的表达;活体成像观测P-LDs的体内分布及肿瘤的大小;免疫组化法检测肿瘤组织中CTLA-4、IFN-γ及Ki67的水平。结果P-LDs呈均一球形,粒径为60 nm左右;在较低PH条件下,P-LDs可以高效介导siRNA转染脾淋巴细胞(P<0.0001),降低CTLA-4的表达(P<0.001);P-LDs在体内可以有效介导siRNA转染肿瘤细胞(P<0.01),抑制肿瘤生长;P-LDs治疗后的肿瘤组织中CTLA-4表达量明显降低(P<0.0001),IFN-γ的含量显著升高(P<0.0001),增殖标记Ki67的含量显著降低(P<0.001)。结论PH敏感型纳米载体P-LDs可以将阿霉素和si-CTLA-4高效富集于肿瘤组织,增强局部抗肿瘤免疫反应的发生,抑制肿瘤生长。 展开更多
关键词 肾细胞癌 纳米载体 阿霉素 CTLA-4 sirna
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采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA
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作者 张志彬 张健 +3 位作者 贺明 高倍瑶 贾琪 张立春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期1-5,共5页
为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融... 为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。 展开更多
关键词 小干扰RNA(sirna) 口蹄疫(FMD) 绿色荧光蛋白(GFP) 多血清型 3C基因
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siRNA干扰对人软骨细胞Skp2表达的影响
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作者 袁长深 李彦宏 +4 位作者 刘晋邑 廖书宁 梅其杰 徐文飞 段戡 《海南医学院学报》 2023年第13期983-987,996,共6页
目的:研究表达载体介导的siRNA对Skp2在人软骨细胞中表达的抑制效果。方法:利用在线siRNA设计工具设计3条Skp2序列siRNA-59、siRNA-318、siRNA-504作为靶位点,采用基因重组技术体外成功构建Skp2 siRNA表达载体,检测重组质粒转染对Skp2 m... 目的:研究表达载体介导的siRNA对Skp2在人软骨细胞中表达的抑制效果。方法:利用在线siRNA设计工具设计3条Skp2序列siRNA-59、siRNA-318、siRNA-504作为靶位点,采用基因重组技术体外成功构建Skp2 siRNA表达载体,检测重组质粒转染对Skp2 mRNA表达的影响,并采用DNA电泳对其结果进行验证。结果:测序表明Skp2干扰序列正确,siRNA-59、siRNA-318、siRNA-504转染组的Skp2 mRNA表达明显低于空载组和NC组(P<0.05),Skp2 mRNA在siRNA-59、siRNA-318、siRNA-504中的抑制率分别为60%、41%、64%,且以siRNA-504转染组抑制率最高。结论:成功构建Skp2干扰真核表达载体,siRNA重组体能有效抑制人软骨细胞Skp2 mRNA表达,可为骨关节炎治疗提供有力证据。 展开更多
关键词 S期激酶相关蛋白2 骨关节炎 小干扰RNA 基因表达
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包被siRNA的叶酸改性聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯纳米材料的制备及其表征 被引量:1
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作者 朱嫚嫚 程勇 +4 位作者 饶鹏 张贵阳 刘昊 肖雷 刘加涛 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第11期1865-1871,共7页
目的构建可以稳定负载并有效释放siRNA的叶酸改性聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(FA-TPGS)纳米材料并观测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞毒性和剪切型X-框结合蛋白1(XBP1s)表达水平的影响。方法将FA-TPGS与罗丹明B(RhB)标记的XBP1 siRNA按... 目的构建可以稳定负载并有效释放siRNA的叶酸改性聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(FA-TPGS)纳米材料并观测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞毒性和剪切型X-框结合蛋白1(XBP1s)表达水平的影响。方法将FA-TPGS与罗丹明B(RhB)标记的XBP1 siRNA按照5∶1比例混合均匀得到包被XBP1 siRNA的纳米复合物(FT@XBP1)。通过透射电镜、动态光散射、紫外可见光谱和荧光光谱分析对FT@XBP1表征,同时计算XBP1 siRNA从FT@XBP1纳米载体中释放的药量。应用扫描电镜(SEM)、CCK-8以及流式细胞术检测FT@XBP1的细胞毒性,并应用Western blot法检测FT@XBP1对小鼠巨噬细胞RAW264.7中XBP1s的抑制作用。结果FA-TPGS与siRNA具有良好的结合作用,其中FT@XBP1的平均粒径为(200±20)nm。相对释放结果提示,酸性环境(pH 5.0)有利于siRNA从FT@XBP1中释放。CCK-8和凋亡实验均显示,FT@XBP1对RAW264.7细胞的增殖和凋亡影响较小,且FT@XBP1处理可显著抑制RAW264.7中XBP1s蛋白的表达(P<0.001)。结论叶酸修饰的TPGS纳米载体可有效包载XBP1 siRNA,抑制巨噬细胞XBP1s表达且细胞相容性良好。 展开更多
关键词 叶酸 聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯 sirna 巨噬细胞 X-框结合蛋白1
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白头翁皂苷B4和PD-L1 siRNA共递送cRGD修饰靶向脂质体的制备及体外细胞摄取研究 被引量:1
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作者 万安平 张婧 +4 位作者 周雄 冯育林 刘骏 何瑶 李翔 《中国药房》 CAS 北大核心 2023年第1期18-22,共5页
目的制备白头翁皂苷B4(AB4)和程序性死亡配体1(PD-L1)小干扰RNA(siP)共递送环精氨酰甘氨酸天冬氨酸序列(cRGD)修饰靶向脂质体(AB4/siP-c-L),并考察其体外细胞摄取行为。方法采用乙醇注入法制备cRGD修饰的AB4靶向脂质体(AB4-c-L),将AB4-... 目的制备白头翁皂苷B4(AB4)和程序性死亡配体1(PD-L1)小干扰RNA(siP)共递送环精氨酰甘氨酸天冬氨酸序列(cRGD)修饰靶向脂质体(AB4/siP-c-L),并考察其体外细胞摄取行为。方法采用乙醇注入法制备cRGD修饰的AB4靶向脂质体(AB4-c-L),将AB4-c-L与20 nmol/L的siP等体积混合,通过静电吸附得到AB4/siP-c-L。分别采用激光散射粒径测定仪、透射电子显微镜、超滤离心法、透析法、琼脂糖凝胶电泳法考察AB4/siP-c-L的粒径、Zeta电位、形态、包封率、药物含量、体外释放行为、血清稳定性。分别采用流式细胞术和共聚焦激光扫描技术评价小鼠Lewis肺癌细胞LLC对AB4/siP-c-L的摄取及其在细胞内的分布情况。结果AB4/siP-c-L的平均粒径为(187.4±3.1)nm,Zeta电位为(33.5±1.4)mV,形态呈类球形,AB4的包封率和含量分别为(95.2±0.4)%、(1.0±0.2)mg/mL;AB4/siP-c-L可较好地包裹siP,并具有较好的血清稳定性、pH敏感性以及缓释特性。LLC细胞对AB4/siP-c-L的摄取率显著高于游离药物,并能实现细胞质内富集。结论AB4/siP-c-L可有效实现AB4与基因药物siP共载,且对LLC细胞具有一定的体外靶向性。 展开更多
关键词 白头翁皂苷B4 程序性死亡配体1 小干扰RNA 脂质体 细胞摄取
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ATP7B siRNA纳米载体提高胃癌细胞顺铂敏感性的作用
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作者 赵鸿鹰 江荣科 +2 位作者 李艳芳 朱梅 王雪 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2023年第7期765-770,共6页
目的研究ATP7B siRNA纳米载体对胃癌细胞顺铂敏感性的影响和机制。方法将胃癌细胞GES-1分成对照组、单纯纳米组、si-NC组、si-ATP7B组、si-ATP7B纳米组、DDP组、si-ATP7B纳米+DDP组、si-ATP7B纳米+Vector+DDP组、si-ATP7B纳米+DDR1+DDP... 目的研究ATP7B siRNA纳米载体对胃癌细胞顺铂敏感性的影响和机制。方法将胃癌细胞GES-1分成对照组、单纯纳米组、si-NC组、si-ATP7B组、si-ATP7B纳米组、DDP组、si-ATP7B纳米+DDP组、si-ATP7B纳米+Vector+DDP组、si-ATP7B纳米+DDR1+DDP组、Vector组、DDR1组,Western blotting检测Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、Vimentin、ATP7B、DDR1蛋白表达,CCK-8实验检测增殖,流式细胞术检测凋亡,Transwell小室检测迁移和侵袭。结果与对照组、si-NC组比较,si-ATP7B组胃癌细胞中ATP7B、DDR1蛋白表达量降低,细胞存活率降低,凋亡率升高,Bax、E-cadherin蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭数目减少,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达减少(P<0.05);与对照组、单纯纳米组、si-ATP7B组比较,si-ATP7B纳米组胃癌细胞中ATP7B、DDR1蛋白表达量降低,细胞存活率降低,凋亡率升高,Bax、E-cadherin蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭数目减少,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05);与si-ATP7B纳米组、DDP组比较,si-ATP7B纳米+DDP组胃癌细胞存活率降低,凋亡率升高,Bax、E-cadherin蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭数目减少,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达减少(P<0.05);与si-ATP7B纳米+Vector+DDP组比较,si-ATP7B纳米+DDR1+DDP组胃癌细胞存活率升高,凋亡率降低,Bax、E-cadherin蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,细胞迁移、侵袭数目增多,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05)。结论ATP7B siRNA纳米载体通过下调DDR1表达提高胃癌细胞顺铂敏感性,促进胃癌细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。 展开更多
关键词 ATP7B sirna 纳米载体 胃癌 顺铂敏感性 凋亡 迁移
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靶向猪睾丸支持细胞PPP1CC基因siRNA的筛选与研究
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作者 张燕迪 顾涛涛 +2 位作者 方桂杰 任红艳 毕延震 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期236-240,共5页
本实验在验证PPP1CC基因在猪睾丸支持细胞ST内源性表达的基础上,针对PPP1CC mRNA靶序列设计并化学合成3段不同的siRNA序列,脂质体瞬时转染ST细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对ST细胞中PPP1CC的干扰效率。结果显示,转染... 本实验在验证PPP1CC基因在猪睾丸支持细胞ST内源性表达的基础上,针对PPP1CC mRNA靶序列设计并化学合成3段不同的siRNA序列,脂质体瞬时转染ST细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对ST细胞中PPP1CC的干扰效率。结果显示,转染24 h后,各实验组中PPP1CC mRNA表达量均显著低于阴性对照组,其中siRNA-1效果最佳。siRNA-1转染72 h后,PPP1CC蛋白表达量显著下降。本实验成功筛选出PPP1CC基因的有效干扰序列,为后续研究提供实验依据。 展开更多
关键词 PPP1CC sirna 基因表达
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siRNA沉默钙蛋白酶1对人脑胶质瘤细胞LN229增殖及侵袭的影响 被引量:2
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作者 唐树军 胡峻华 +2 位作者 施登超 宁威海 吴科 《解剖学研究》 CAS 2023年第6期518-522,共5页
目的 探讨siRNA沉默钙蛋白酶1(CAPN1)对人脑胶质瘤细胞LN229增殖及侵袭的影响。方法 取人脑胶质瘤细胞LN229于37℃水浴中解冻后制备单细胞悬液,接种于细胞培养板中,融合度至90%左右,将siRNA系列、CAPN1 siRNA序列分别转染细胞,分为实验... 目的 探讨siRNA沉默钙蛋白酶1(CAPN1)对人脑胶质瘤细胞LN229增殖及侵袭的影响。方法 取人脑胶质瘤细胞LN229于37℃水浴中解冻后制备单细胞悬液,接种于细胞培养板中,融合度至90%左右,将siRNA系列、CAPN1 siRNA序列分别转染细胞,分为实验组(CAPN1 siRNA)与siRNA组,以未转染的细胞作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定LN229细胞中CAPN1 mRNA表达;采用MTT法测定LN229细胞增殖情况;采用Transwell小室测定LN229细胞侵袭及迁移情况;采用Western blot测定LN229细胞Bax、Bcl-2和CAPN1蛋白表达。结果 与对照组和siRNA组比较,实验组CAPN1 mRNA表达明显降低(P<0.05);与对照组和siRNA组比较,实验组LN229细胞增殖率明显降低(P<0.05);与对照组和siRNA组比较,实验组LN229细胞侵袭率明显降低(P<0.05);与对照组和siRNA组比较,实验组LN229细胞迁移数目明显降低(P<0.05);与对照组和siRNA组比较,实验组LN229细胞Bax蛋白表达灰度值明显升高,而Bcl-2和CAPN1蛋白表达灰度值明显降低(P<0.05)。而对照组和siRNA组CAPN1 mRNA表达、LN229细胞增殖率、LN229细胞侵袭率、LN229细胞迁移数目、Bax、Bcl-2和CAPN1蛋白表达灰度值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA沉默CAPN1可抑制人脑胶质瘤细胞LN229增殖,抑制脑胶质瘤细胞侵袭和迁移,上调Bax表达及下调Bcl-2和CAPN1蛋白表达。 展开更多
关键词 钙蛋白酶1 人脑胶质瘤 sirna 增殖 侵袭 LN229细胞
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一链双靶siRNA对皮肤鳞状细胞癌NET-1和Survivin基因表达及增殖和凋亡的影响研究
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作者 季周婧 张丽丽 张捷 《交通医学》 2023年第1期14-19,23,共7页
目的:探讨一链双靶siRNA对人皮肤鳞癌细胞株(A431)NET-1和Survivin基因的抑制作用以及对细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建siRNA NET-1、siRNA Survivin以及同时靶向NET-1和Survivin基因的一链双靶siRNA。采用免疫共沉淀法检测NET-1和Sur... 目的:探讨一链双靶siRNA对人皮肤鳞癌细胞株(A431)NET-1和Survivin基因的抑制作用以及对细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建siRNA NET-1、siRNA Survivin以及同时靶向NET-1和Survivin基因的一链双靶siRNA。采用免疫共沉淀法检测NET-1和Survivin蛋白在A431人皮肤鳞癌细胞中的相互作用。将A431细胞分为siRNA-NET-1组、siRNA-Survivin组、siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NC组和control组,分别进行细胞转染。qRT-PCR和Western Blot法分别检测细胞内NET-1、Survivin mRNA和蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NET-1、Survivin蛋白在细胞内的表达及定位。CCK-8法和流式细胞仪分别检测细胞增殖与凋亡情况。结果:免疫共沉淀法证实NET-1和Survivin蛋白有相互作用。qRT-PCR和Western Blot结果显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞中NET-1和Survivin mRNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组及control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法检测显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞增殖水平低于siRNA-NC组和control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞凋亡率高于siRNA-NC组和control组,siRNA-NET-1&Survivin组高于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组NET-1和Survivin蛋白表达阳性细胞百分率低于control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:NET-1和Survivin蛋白存在相互作用,靶向NET-1和Survivin的一链双靶siRNA能同时下调A431细胞NET-1和Survivin基因表达,并能抑制A431细胞增殖,促进细胞凋亡,一链双靶siRNA作用效果优于单靶siRNA。 展开更多
关键词 NET-1 SURVIVIN 一链双靶sirna A431 RNA干扰 皮肤鳞状细胞癌
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