定量PCR检测联合G试验及GM试验对侵袭性真菌感染早期诊断的价值

目的探讨荧光定量PCR(RTFQ-PCR)检测联合G试验及GM试验对侵袭性真菌感染早期诊断的价值。方法纳入2014年4月—2015年10月我院(宁夏医科大学总医院)ICU、呼吸科及烧伤科等侵袭性真菌感染高发科室中60例IFI高危患者,对60例患者进行血、痰及肺泡灌洗液组织样本真菌培养,并进行血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测(G试验)、半乳甘露聚糖抗原检测(GM试验)以及荧光定量RTFQ-PCR检测,观察3种检测方法及联合检测的准确性、灵敏度及特异性,并进行ROC曲线分析,评价荧光定量RTFQ-PCR对IFI的诊断价值。结果G试验IFI确诊组、临床诊断组、拟诊组及排除组检出阳性率分别为100%、70.37%、75.00%和54.55%;GM试验IFI确诊组、临床诊断组、拟诊组及排除组检出阳性率分别为66.67%、70.37%、62.50%和45.45%;RTFQ-PCR检测IFI确诊组、临床诊断组、拟诊组及排除组检出阳性率分别为100%、81.48%、87.50%和22.73%;G试验敏感度为81.58%,特异性59.09%,阳性预测值77.50%,阴性预测值65.00%,符合度为73.33%;GM试验敏感度为76.32%,特异性68.18%,阳性预测值80.56%,阴性预测值62.50%,符合度为73.33%;RTFQ-PCR检测敏感度为84.21%,特异性77.27%,阳性预测值86.49%,阴性预测值73.91%,符合度为73.91%;RTFQ-PCR+G+GM联合检测敏感度为55.26%,特异性95.45%,阳性预测值95.45%,阴性预测值55.26%,符合度为70.00%。结论G试验、GM试验、RTFQ-PCR检测在IFI诊断中均具有较高的临床应用价值(P均<0.05),但G试验、GM试验在IFI诊断中假阳性率较高,故在单种方式检测中推荐RTFQ-PCR检测,而RTFQ-PCR+G+GM联合检测则能够明显提高IFI临床诊断准确性。

小麦根际土壤中禾谷多黏菌实时荧光定量PCR检测体系的建立及应用

为了研究转基因小麦N12-1对其根际土壤中禾谷多黏菌(Polymyxa graminis)数量的影响,建立了基于实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR)方法检测多黏菌数量的体系,并将该体系用于转基因小麦N12-1及其受体扬麦158不同生长期根际土壤中禾谷多黏菌数量的检测。结果显示,标准曲线的扩增效率为95%,相关系数为0.999,熔解曲线呈现单一峰,符合荧光定量扩增的各项指标;在各个生长期,转基因小麦N12-1与其受体扬麦158根际土壤中的禾谷多黏菌数量没有显著差异。由此推测,转基因小麦N12-1的种植对其根际土壤中禾谷多黏菌的数量没有显著影响。

荧光定量PCR方法及分子标志物在海洋污染监测中的应用进展

荧光定量PCR作为一种核酸定量技术,可在PCR扩增时在体系中加入荧光染料或荧光基团,实时监测荧光信号从而对PCR扩增产物进行实时准确定量,技术灵敏度高,特异性强。通过对荧光定量PCR的原理、分类、优缺点及几种定量分析方法对比进行简述,并对其在国内外海洋环境污染监测中的广泛应用和研究进行了全面综述,从而对荧光定量PCR和分子标志物在海洋监测中的应用前景做进一步的展望。

荧光定量RT-PCR检测新疆维、汉人群变应性鼻炎中IL-2及IL-4 mRNA的表达水平

目的检测新疆维、汉人群变应性鼻炎(AR)患者外周血CD4+T淋巴细胞中IL-2及IL-4 mRNA的表达水平,比较2种基因在该疾病中的作用。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术检测80例变应性鼻炎患者和80例正常对照者IL-2及IL-4mRNA的表达水平,其中鼻炎患者和对照者中维族、汉族各40例。结果选择管家基因GAPDH进行校正,IL-2 mRNA表达水平在AR组为(8.66±1.92)coples/μl,维族和汉族分别为(8.52±2.15)和(8.81±1.79)coples/μl,AR对照组为(11.28±1.78)coples/μl,其中维族和汉族分别为(10.31±1.92)和(12.27±0.93)coples/μl。IL-4 mRNA的表达水平经管家基因GAPDH校正后在AR组为(10.90±2.54)coples/μl,其中维族和汉族分别为(10.42±2.95)和(11.41±2.13)coples/μl,AR对照组为(3.07±1.18)coples/μl,维族和汉族分别为(2.81±1.46)和(3.46±0.61)coples/μl。AR组IL-2 mRNA的基因表达水平与健康对照者之间有差异(P<0.05),维吾尔族和汉族之间无明显差异(P>0.05)。AR组IL-4 mRNA的基因表达水平高于健康对照者(P<0.05),在维族汉族之间差异不大(P>0.05)。结论 IL-2 mRNA基因表达水平在AR组和健康对照者之间有显著差异(P<0.05),IL-4 mRNA的基因表达水平高于健康对照者。IL-2和IL-4基因在变应性鼻炎的发病过程中作用显著,IL-2和IL-4基因在维吾尔族和汉族AR患者之间无明显差异(P>0.05)。

荧光定量PCR方法鉴别牛、羊奶粉

建立了应用荧光定量PCR技术鉴别牛、羊奶粉的方法。本方法无需进行奶粉的DNA提取,奶粉经核酸释放剂处理后可直接进行荧光定量PCR检测,并且该方法可对奶粉中牛、羊源性成分进行鉴别。

应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测BMSCs诱导大鼠肝星状细胞中DR5 mRNA表达

目的应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠肝星状细胞(HSCs)的死亡受体5(DR5)mRNA表达的影响,探讨BMSCs诱导HSCs凋亡及其机制。方法采用贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠BMSCs,传至第4代使用;大鼠原代HSCs细胞及肝纤维原细胞系冻融后传代使用。应用6孔塑料培养板,建立上下双层细胞共培养体系,常规培养。实验分为3组:(1)实验组:BMSCs与HSCs共培养;(2)空白对照组:HSCs单独培养;(3)阴性对照组:大鼠肝纤维原细胞与HSCs共培养。以上培养体系动态观察24、48、72h,应用流式细胞仪检测HSCs细胞凋亡率,采用SYBR Green I荧光实时定量RT-PCR法检测,以β-actin基因作为内参,计算各组DR5mRNA的相对表达量。结果在共培养组中,BMSCs促进了HSCs凋亡,与其他两组比较差异有显著统计学意义(P<0.01),空白对照组与阴性对照组比较无统计学意义(P>0.05)。实验组BMSCs能明显上调HSCs中DR5mRNA的表达,与空白对照组和阴性对照组比较差异有显著统计学意义(P<0.01);空白对照组与阴性对照组DR5mRNA的表达比较无统计学意义(P>0.05)。结论利用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测BMSCs诱导大鼠肝星状细胞中DR5mRNA表达,为进一步研究BMSCs通过死亡受体途径调控HSCs凋亡以及为BMSCs用于治疗肝纤维化的机制研究提供了理论基础。

定量RT-PCR检测结肠癌患者门静脉血CK20 mRNA的表达

目的检测结肠癌患者门静脉血中细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达水平,并探讨其临床价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测31例病理学确诊的结肠癌患者门静脉血和20例健康对照者外周血CK20mRNA的表达水平。结果结肠癌患者中CK20mRNA阳性率为25.81%,而对照组阳性率为5%,两者相比差异有统计学意义(P<0.025)。随着临床分期的具体化,患者门静脉血中CK20mRNA表达率随之提高,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义(P>0.05)。DukesLC期与D期患者中>10拷贝/ml者高于A期与B期患者。结论术中检测结肠癌患者门静脉血CK20mRNA表达水平,对判断肝脏微转移有一定的提示意义。

尼罗罗非鱼MyD88基因荧光定量PCR检测方法的建立

为了准确分析尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)在天然免疫反应中的作用,根据MyD88EST序列(GenBank登录号:GR679416.1)和β-actin基因序列(GenBank登录号:AB037865.1),分别在保守区域设计并合成引物。实验利用5倍系列稀释的尼罗光罗非实鱼时肝定脏量cPDCNRA检样测品方构法建。标应准用曲2线-ΔΔ并Ct分进析行方融法解初曲步线检分测析了,建尼立罗尼罗罗非罗鱼非肝鱼脏M、脾yD脏88、的血S液Y和BR肌G肉re等en不Ⅰ荧同组织中的MyD88相对表达量。扩增结果表明,MyD88和β-actin基因标准曲线CT值检测范围分别为24～35和19～30,扩增效率分别为100%和96.7%,相关系数分别为0.998和0.995;熔解曲线分析显示产物均形组织成肝单脏一、特脾异脏峰和,血Tm液值中分高别丰为度78表.5达℃和。77.5℃。定量分析结果显示。

竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用

【目的】筛选平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense侵染条件下筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis幼虫稳定表达的内参基因,为该竹林金针虫相关基因的表达研究奠定基础。【方法】基于筛胸梳爪叩甲幼虫的转录组数据,利用实时荧光定量PCR扩增特异性引物,分析相关性和扩增效率;利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评估筛选出6个候选内参基因(β-actin、GAPDH、α-tubulin、RPL13α、RPS3、RPS27a),并验证其表达稳定性。【结果】GeNorm分析结果显示:PRS27a和RPS3的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPL13α、β-actin和GAPDH;最适合的内参基因数目为2。NormFinder分析结果显示:RPL13α的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPS3、RPS27a、β-actin和GAPDH。BestKeeper分析结果显示:β-actin和GAPDH的P>0.5,不适合作为本试验条件下的内参基因。不同软件分析得出的候选内参排序存在一定差异。综合分析和表达稳定性验证表明PRS27a或RPS3是最佳内参基因,6个目的基因的表达水平变化趋势均基本一致。【结论】PRS27a和RPS3是研究平沙绿僵菌侵染的竹林金针虫相关基因表达的最佳内参基因。

黄花大苞姜花药发育qRT-PCR内参基因筛选

qRT-PCR技术具有定量准确、灵敏度高、重复性好等特点,被广泛用于基因表达分析。内参基因的稳定性对于准确分析实验结果非常重要。该研究以黄花大苞姜(Caulokaempferia coenobialis)花粉母细胞时期(PMC)、四分体时期(TET)、成熟花粉时期(MP)的花药组织为材料,基于3个阶段花药转录组表达谱数据以及常用传统内参基因,筛选出Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)、Malate dehydrogenase(MDH)、α-tubulin3(TUA3)、β-tubulin7(TUB7)和Actin6(ACT6)作为候选内参基因,进行qRT-PCR分析;并运用BestKeeper、geNorm和Normfinder软件综合分析5个候选内参基因在黄花大苞姜花药发育过程中的表达稳定性。结果表明:MDH和TUB7的表达最稳定,ACT6的稳定性最差;分别以MDH和TUB7作为内参,分析GBE1在黄花大苞姜花药发育中的表达模式,并与该基因在花药转录组中的表达模式做相关系数分析,3种表达模式结果一致,进一步验证了MDH和TUB7的表达稳定性。这说明MDH和TUB7适合作为qRTPCR分析黄花大苞姜花药发育过程中相关基因表达模式的内参基因。该研究结果为黄花大苞姜花药发育分子机制相关研究奠定了基础,也为姜科花药发育相关内参基因的选择提供了参考。

酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)基因表达的影响

【目的】探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的调节作用,为在分子水平上揭示益生菌对防御素的调控机理提供一定的理论基础及依据。【方法】首先将新鲜的绵羊瘤胃组织用PBS和抗生素处理后进行瘤胃上皮细胞原代培养,当原代细胞数量长到细胞培养瓶的85%以上时,将细胞传于12孔板用于细胞刺激试验。同时将活化并纯化后的酿酒酵母菌25℃、180 r/min有氧培养48 h后,进行5次平行平板计数试验,根据平板计数的数据处理方法,得到浓度为5.2×108CFU·m L-1的酿酒酵母菌液,再通过倍比稀释把所得菌液依次稀释成浓度为5.2×107、5.2×106、5.2×105、5.2×104CFU·m L-1的菌液,用以上不同浓度(5.2×104—5.2×108CFU·m L-1)的酿酒酵母菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞分别进行不同时间(2、4、8、12、24 h)的刺激,并设置对照组用DMEM/F12培养基代替酿酒酵母菌。然后提取总RNA,逆转录为c DNA后,利用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤胃上皮细胞中SBD-1表达差异。最后用SAS 9.2软件对数据进行相关差异性分析。【结果】荧光定量PCR结果表明,在各时间组内SBD-1 m RNA的表达量随着菌液浓度的增加均呈先升高后降低的趋势,当菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1时表达量达到最大,并与对照组和其他浓度组相比差异极显著(P<0.01)。当菌液浓度一定时,SBD-1 m RNA的表达量先是随着刺激时间的延长而呈上升趋势,刺激时间为12 h时SBD-1 m RNA表达量达到峰值,之后呈下降趋势。因此,当浓度为5.2×107CFU·m L-1的菌液刺激瘤胃上皮细胞12 h后,SBD-1基因的表达量达到最高,且与此浓度下其他时间组的表达量相比差异极显著(P<0.01)。ELISA检测结果显示,SBD-1蛋白表达趋势与SBD-1 m RNA检测结果基本一致。不同浓度的菌液分别刺激绵羊瘤胃上皮细胞2、4、8、12、24 h后均能提高共培养上清中SBD-1蛋白的表达,且与对照组相比存在极显著差异(P<0.01)。在菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1刺激瘤胃上皮细胞12 h后SBD-1蛋白分泌水平达到最高,与此浓度下各时间组相比差异极显著(P<0.01)。【结论】酿酒酵母菌能够提高绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1刺激瘤胃上皮细胞12 h后,SBD-1的表达量达到最高。

棉铃虫齿唇姬蜂嗅觉受体基因CchlOrco的克隆及组织表达谱分析

【目的】昆虫的嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)一般以气味分子特异的ORs与共受体(co-Receptor,Orco)通过形成异质二聚体在嗅觉感受中发挥关键作用,其中Orco由于具有序列的保守性而受到广泛的重视。本研究旨在克隆棉铃虫齿唇姬蜂Campoletis chlorideae的Orco基因,并对其组织表达谱进行分析。【方法】利用RT-PCR技术和转录组分析技术克隆棉铃虫齿唇姬蜂的Orco基因,并对其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;利用Realtime PCR技术对该基因在该蜂成虫不同组织中的表达量进行分析。【结果】获得了棉铃虫齿唇姬蜂Orco的全长c DNA序列,命名为Cchl Orco(Gen Bank登录号:KP255444)。序列分析表明,该基因开放阅读框全长1 437 bp,编码478个氨基酸,预测该氨基酸序列具有7个跨膜区。Cchl Orco主要在成虫触角中表达,且在雄蜂触角中的表达量最高,是雌蜂触角中表达量的8.0倍,而在其他组织中表达量极低。【结论】本研究克隆了棉铃虫齿唇姬蜂Cchl Orco序列全长,明确了其在成虫不同组织中的表达水平,为进一步研究该基因及其他嗅觉受体基因功能奠定了基础。

茶树小分子量热激蛋白基因CsHSP17.2的克隆与表达分析

[目的]进一步了解茶树小分子量热激蛋白基因Cs HSP17.2在逆境胁迫条件下的分子生物学功能。[方法]利用RT-PCR技术从茶树‘迎霜’中克隆得到Cs HSP17.2基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码蛋白,通过Real-time PCR分析其表达模式。[结果]该基因开放阅读框长度为453 bp,编码150个氨基酸,蛋白质相对分子质量为17.2×103,理论等电点5.56;无信号肽位点,属于非分泌型蛋白;被定位于细胞质中。系统发育树分析表明,茶树Cs HSP17.2与水稻(Gen Bank登录号:P27777)和花生(ABC41131)的进化关系较近,属于小分子量热激蛋白基因家族第Ⅰ亚族。qRT-PCR分析发现,茶树Cs HSP17.2属于组成型基因;高温(38℃)处理1 h能显著提高Cs HSP17.2 mRNA的相对表达量(P<0.05);干旱(100 g·L-1PEG 6000)、高盐(200 mmol·L-1Na Cl)和外源脱落酸(200 mg·L-1ABA)处理条件下,该基因的转录水平均出现不同程度的上调。[结论]克隆得到茶树‘迎霜’小分子量热激蛋白基因Cs HSP17.2,其在花中表达量最高,且响应高温、干旱、高盐和外源脱落酸胁迫。

雌孕激素序贯性干预治疗对雷公藤多苷卵巢功能损害的保护作用

雷公藤多苷（tripteryium wilfordii polyglycosidium,TWP）是植物雷公藤的根提取物,广泛应用于肾小球疾病、风湿性疾病、肿瘤及移植等[1]。长期应用会产生肝功能受损和白细胞减少等不良反应,对性腺的损伤尤为突出,可引起月经紊乱,甚至卵巢早衰[1]。如何在充分发挥TWP疗效的同时,最大限度地降低其副作用是临床亟待解决的问题。

自发性高血压大鼠NHE-1基因表达与左心室肥厚的相关性

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)NHE-1基因表达与左心室肥厚的相关性。方法:对SHR和同源血压正常大鼠(WKY)进行平均血压、左室重量(LVW)和体重(BW)的测定,同时采用实时定量荧光检测两组大鼠心肌组织中NHE-1mRNA的拷贝数。结果:SHR组与WKY组相比,SHR组的LVW、LVW/BW明显高于WKY组(r左室重=0.700,r左室重体重之比/=0.617,P<0.01),大鼠的平均血压与LVW量、LVW/BW呈正相关(P<0.01);SHR组的心肌组织NHE-1mRNA的表达增高(P<0.01)。结论:SHR的心肌组织NHE-1mRNA的表达增高,提示NHE-1可能参与心肌肥厚的发生、发展过程。

毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP2和PtCP4原核表达及蛋白纯化

【目的】对毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因Pt CP_2和Pt CP4进行原核表达及重组蛋白纯化,为进一步研究该基因的酶学特征和生理功能打下基础。【方法】从毛果杨中克隆两个半胱氨酸蛋白酶基因Pt CP_2和Pt CP4,构建其原核表达载体p ET-30a-Pt CP_2及p ET-30a-Pt CP4,并在转入大肠杆菌后在体外诱导表达重组蛋白,采用包涵体洗涤法对目的蛋白进行纯化。【结果】Pt CP_2基因CDS序列全长1107 bp,编码368个氨基酸;Pt CP4基因CDS序列全长1104 bp,编码367个氨基酸。Pt CP_2和Pt CP4基因编码的蛋白均属于RD19A-like类型木瓜蛋白酶。Pt CP_2和Pt CP4基因在毛果杨根、茎、叶中均有表达,其中Pt CP_2在叶中表达量最高,Pt CP4在根中表达量最高。通过包涵体洗涤法在体外得到了高表达量、单一的重组蛋白Pt CP_2和Pt CP4,切除信号肽后蛋白酶大小分别为38.151和38.069 k D。【结论】原核表达获得的纯化重组蛋白Pt CP_2和Pt CP4可用于进一步研究毛果杨半胱氨酸蛋白酶的酶学特征和生理功能。

乳清粉对断奶实验兔肠道微生物区系和益生菌的影响

目的利用分子生物学技术研究饲粮中添加乳清粉对断奶早期实验兔肠道微生物区系和益生菌的影响。方法采用单因子实验设计,选择40日龄断奶实验兔,随机分为4组(每组12只),分别饲以乳清粉添加水平为0%、2%、5%和10%的饲粮。饲喂30 d后,每组随机取8只兔,麻醉处死,取盲肠内容物提取细菌总DNA,首先利用PCR-DGGE技术分析兔盲肠微生物区系多样性,进而应用实时荧光定量PCR(SYBR Green I)法定量检测盲肠细菌中双歧杆菌和乳酸杆菌含量。结果 (1)实验兔盲肠细菌DGGE各分析参数随乳清粉添加量的提高逐渐上升,添加不同水平乳清粉均可显著增加DGGE条带数(P<0.05,P<0.01)。2%和5%乳清粉添加水平组的DGGE条带数和香农指数均极显著(P<0.01)高于未添加组,但以上2项指标在乳清粉各添加水平间差异无显著性(P>0.05)。DGGE均匀度指数在各实验组间均无差异显著性(P>0.05)。(2)饲粮中添加乳清粉可提高实验兔盲肠内容物中乳酸杆菌和双歧杆菌数量,其中各乳清粉处理组(2%,5%和10%)的乳酸杆菌数量均显著高于0%添加组(P<0.05),10%乳清粉添加组的双歧杆菌数量显著高于未添加组(P<0.05),但与其他2个乳清粉添加组无差异显著性(P>0.05)。结论 (1)饲粮中添加乳清粉可显著提高实验兔盲肠细菌菌群的多样性。(2)在实验兔饲粮中添加乳清粉可有效增加肠道益生菌数量。

牲畜粪便沼气发酵过程中微生物丰度变化分析

微生物在沼气发酵过程中起着重要的作用,采用实时荧光定量(quantitative real-time PCR,q PCR)技术检测了牲畜粪便沼气发酵过程中微生物的丰度变化。结果表明:夏季沼液样品中16S rRNA基因丰度从7.88×108copies/m L到6.35×1010copies/m L,平均为1.78×1010copies/m L,冬季沼液样品中16S rRNA基因丰度从4.04×108copies/m L到7.28×1010copies/m L,平均为1.89×1010copies/m L,而且新鲜猪粪、新鲜水牛粪及其混合物在发酵过程中其微生物丰度演变规律与其产气情况相一致。说明微生物在牲畜粪便沼气发酵过程决定着沼气发酵的产量和质量。

调心安神针法对室性心律失常模型兔心肌血管紧张素Ⅱ受体的影响

目的:研究调心安神针法对于室性心律失常模型兔心肌组织血管紧张素Ⅱ受体(AGTR1、AGTR2)的影响。方法:采用兔耳缘静脉注射氯化钡的方法制作室性心律失常模型。40只新西兰兔随机分为对照组、模型组、针刺组、药物组,针刺组施以调心安神针刺法,药物组给予心律平灌胃。实验完毕后取兔左心室,荧光定量PCR技术检测心肌组织AGTR1、AGTR2的m RNA表达水平。结果:对照组AGTR1及AGTR2的m RNA表达最高,其次为药物组,针刺组AGRT1的m RNA表达与模型组基本一致,而AGTR2的m RNA表达较模型组有增高的趋势。结论 :调节心肌组织AGTR2的表达可能是该针法治疗心律失常的靶点之一。

实时逆转录荧光定量聚合酶链反应检测外周血GPC3mRNA在原发性肝癌患者中的表达及意义

目的探讨实时逆转录荧光定量聚合酶链反应(RealtimeQRT-PCR)检检测外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 mRNA(GPC3 mRNA)在原发性肝癌(HCC)患者中的表达意义。方法采用Realtime QRT-PCR技术分别检测37例HCC、21例转移性肝癌、22例肝硬化患者和35例体检健康志愿者外周血中GPC3 mRNA的水平。结果 HCC患者外周血GPC3mRNA的阳性率为91.8%(34/37),表达水平为(1.5±0.9)×106copies/ml;转移性肝癌外周血GPC3 mRNA的阳性率为4.7%(1/21),表达水平为5.2×103copies/ml;肝硬化患者GPC3 mRNA的阳性率为4.5%(1/22),表达水平为2.6×103 copies/ml;体检健康志愿者外周血GPC3 mRNA无阳性表达。HCC患者手术前后血液中GPC3 mRNA的阳性率差异无统计学意义(P<0.05),但两者表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Realtime QRT-PCR检测外周血GPC3 mRNA是诊断早期HCC血微转移可行的实验方法。