RECQL4基因在肺癌组织中表达与预后的关系

目的分析RECQL4基因在肺癌中表达,初步功能及其与患者临床参数和预后间的关系。方法采用RT-PCR,RT-qPCR和免疫组化方法,从mRNA和蛋白水平检测RECQL4基因在正常肺、肺癌和癌旁组织中的表达。采用组织芯片免疫染色方法定量分析97例肺癌患者RECQL4蛋白的表达。RECQL4表达组间比较采用t检验,表达与临床参数:性别、年龄、临床分期、淋巴结转移、肿瘤大小和生存预后间关系采用卡方检验和Kaplan-meier分析,并通过更大样本数据库对结果进行验证。采用MTS实验分析REC-QL4基因的初步功能。结果在肺癌中RECQL4基因mRNA和蛋白水平均呈现高表达状态(P <0.01);RECQL4表达与肺癌患者临床分期(P=0.01)和肿瘤大小(P=0.025)显著相关;RECQL4低表达患者预后显著优于高表达患者(P <0.05);而且,RECQL4表达在肺腺癌患者总生存期(P <0.001)中是一个不利因素,而在肺鳞癌中RECQL4表达对患者总生存期没有影响(P=0.24)。初步功能数据发现,RECQL4基因明显促进肿瘤细胞生长和增殖,是一个潜在癌基因。结论 RECQL4是一个明显的候选癌基因和肺腺癌不良预后潜在标志物。

Rothmund-Thomson综合征

报告1例Rothmund-Thomson综合征。患儿男,3岁。先天性皮肤异色及光敏2年余,伴有语言、运动发育迟缓。皮肤科检查:全身皮肤粗糙、干燥,面部、四肢远端及臀部对称性的网状褐色斑,伴有色素减退、毛细血管扩张及萎缩。组织病理示表皮萎缩,界面改变,真皮浅层苔藓样炎性细胞浸润,散在噬色素细胞。基因检测:RecQL4复合杂合突变:c.727G>A,IVS8-1C>T。诊断:Rothmund-Thomson综合征。

Rothmund-Thomson综合征一例基因检测分析

目的:对一例自幼身材矮小、发育迟缓、周身皮肤异色症的患儿进行基因检测,以明确诊断确定病因。方法:收集患儿临床资料,提取患儿及其父母外周血DNA,采用全外显子组测序检测潜在的基因突变,并通过Sanger测序进行验证。结果:该患儿在RECQL4基因上携带两个复合杂合突变:(c.1579dupA)(p.T527fs)和(c.2290 C>T)(p. Q764X),其中,突变c.1579dupA既往未被报道。结论:结合患儿临床表现及全外显子组测序结果,诊断为Rothmund-Thomson综合征,致病基因为RECQL4,且该研究发现新突变c.1579dupA,进一步丰富了疾病基因库。

Rothmund—Thomson综合征一例RECQL4基因的突变分析

目的检测1例Rothmund—Thomson综合征患者及其父母的RECQL4基因突变情况。方法收集1例中国汉族Rothmund—Thomson综合征患儿及其父母的外周血标本，提取其外周血DNA，采用PCR扩增RECQL4基因编码区的全部外显子，DNA测序仪直接测序，明确突变位点，并以同样方法检测30例无关正常人作对照。结果患者RECQL4基因发生2处突变：剪接位点突变IVS11-1G→A和无义突变3401A→T，两突变分别来自其父母。30例正常人对照组不存在此两种突变。结论该患者存在RECQL4基因的剪接位点突变IVS11-1G〉A和无义突变3401A〉T。

siRNA沉默肺癌细胞中RECQL4基因表达诱导癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默RECQL4基因对人肺癌A549细胞凋亡的影响及分子机制。方法采用qRT-PCR检测人支气管上皮HBE细胞及不同肺癌细胞A549、NCI-H1975和NCI-H1299细胞中RECQL4基因的表达情况。将RECQL4两条特异性siRNA分别转染至A549细胞中(分别记为si-RECQL4-1组和si-RECQL4-2组),转染无功能siRNA的A549细胞为阴性对照(NC组),未转染的A549细胞为空白对照(Blank组)。转染48 h后以qRT-PCR检测各组A549细胞中RECQL4 mRNA表达量,免疫印迹检测RECQL4、Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平。AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况。DCFH-DA探针技术检测细胞中活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果与HBE细胞相比,A549、NCI-H1975和NCI-H1299细胞中RECQL4的表达量明显升高(P<0.05),A549细胞中RECQL4的表达量明显高于NCI-H1975和NCI-H1299细胞(P<0.05)。转染两种RECQL4 siRNA均能明显抑制A549细胞中RECQL4 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),其中si-RECQL4-1组沉默效果更好。与Blank组相比,si-RECQL4-1组A549细胞中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达及ROS和MDA含量明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平和GSH含量明显降低(P<0.05)。结论siRNA沉默肺癌A549细胞中RECQL4基因表达能够诱导细胞凋亡,其作用机制与调控凋亡相关蛋白表达及氧化应激有关。

一例Rothmund-Thomson综合征患儿的RECQL4基因变异分析

目的探讨1例Rothmund-Thomson综合征(Rothmund-Thomson syndrome,RTS)患儿的临床表现和基因变异,明确其可能的致病原因。方法采集患儿及其父母、妹妹的外周血,对患儿进行全外显子组测序进行基因变异分析,并用Sanger测序方法对变异基因的家系分布进行验证。结果基因检测结果显示患儿RECQL4基因存在c.1048_1049delAG(p.Arg350fs*21)和c.2886-1G>A复合杂合变异,其中c.2886-1G>A为未见报道的新变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南,c.1048_1049delAG判定为致病性变异(PVS1+PM3_Strong+PM2),c.2886-1G>A考虑为可能致病性变异(PVS1+PM2)。结论RECQL4基因变异可能为这例RTS患儿的致病原因,本研究结果丰富了RECQL4基因变异谱。

1例母源性单亲二倍体所致Rothmund-Thomson综合征

目的对1例诊断母源性单亲二倍体所致Rothmund-Thomson综合征2型(RTS2)患儿进行临床资料总结及遗传学分析,加强临床医师对该病的认识。方法采集患儿及其父母外周血样本,行全外显子组测序并Sanger测序验证,对患儿行染色体微阵列(CMA)检测染色体片段拷贝数变异。结果患儿基因检测结果显示RECQL4基因c.1704+2T>C纯合变异,为新报道位点,Sanger验证患儿母亲存在该位点变异,患儿父亲为野生型;进一步完善CMA分析显示arr[GRCh37](8)x2hmz,患儿8号染色体为母源性二倍体,结合患儿临床表现,最终诊断母源性单亲二倍体Rothmund-Thomson综合征2型。结论本文报道1例全外显子组测序联合CMA检测诊断母源性单亲二倍体RTS2型的患儿。一过性免疫低下可能是RTS患者生命早期的临床表现,需要引起临床医师关注。

Rothmund-Thomson综合征一家系基因突变检测

目的对Rothmund-Thomson综合征一家系患者及其家族成员进行基因突变检测。方法收集中国汉族Rothmund-Thomson综合征一家系姐弟2例患者及家族成员临床资料,同时采集其外周血和100例无亲缘关系的健康对照的外周血标本,提取DNA,采用PCR扩增RECQL4基因编码区的全部外显子,应用二代皮肤靶向测序包检测患儿的基因突变,Sanger测序验证。结果 2例患者的RECQL4基因存在2个杂合突变:剪接位点突变c.2886-1G>A和插入突变c.1013_1014insC,两突变分别来自患者父亲和母亲。100例健康对照及患儿兄长均未发现这两种突变。结论 RECQL4基因的剪接位点突变c.2886-1G>A和插入突变c.1013_1014insC可能为引起该家系患者临床表型的病因。