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凝血因子Ⅶ基因表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达
被引量:
6
1
作者
吕茂民
王娜
+2 位作者
王栋
于群
章金刚
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期44-47,共4页
凝血因子Ⅶ是凝血块形成的起始关键分子之一,它对外源性凝血途径的启动具有重要的作用。为表达具有促凝活性的重组人凝血因子Ⅶ,通过PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子ⅦcDNA,并将其定向克隆入真核表达载体pIRESneo中,构建重组表...
凝血因子Ⅶ是凝血块形成的起始关键分子之一,它对外源性凝血途径的启动具有重要的作用。为表达具有促凝活性的重组人凝血因子Ⅶ,通过PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子ⅦcDNA,并将其定向克隆入真核表达载体pIRESneo中,构建重组表达载体pIRES-FⅦ,测序正确后用脂质体介导的方法转染BHK-21细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释等方法获得克隆细胞株,收集无皿清培养上清,进行SDS-PAGE、Western blot和活性鉴定。结果成功构建了重组表达载体pIRES-FⅦ,实现了其在BHK-21细胞中的表达,且表达产物具有促凝活性。重组人凝血因子Ⅶ在哺乳动物细胞中的成功表达,为整体止血剂的研究奠定了基础。
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关键词
重组人凝血因子Ⅶ
表达载体
BHK细胞
基因表达
止血剂
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职称材料
题名
凝血因子Ⅶ基因表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达
被引量:
6
1
作者
吕茂民
王娜
王栋
于群
章金刚
机构
军事医学科学院野战输血研究所
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期44-47,共4页
基金
军事医学科学院创新基金资助项目
文摘
凝血因子Ⅶ是凝血块形成的起始关键分子之一,它对外源性凝血途径的启动具有重要的作用。为表达具有促凝活性的重组人凝血因子Ⅶ,通过PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子ⅦcDNA,并将其定向克隆入真核表达载体pIRESneo中,构建重组表达载体pIRES-FⅦ,测序正确后用脂质体介导的方法转染BHK-21细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释等方法获得克隆细胞株,收集无皿清培养上清,进行SDS-PAGE、Western blot和活性鉴定。结果成功构建了重组表达载体pIRES-FⅦ,实现了其在BHK-21细胞中的表达,且表达产物具有促凝活性。重组人凝血因子Ⅶ在哺乳动物细胞中的成功表达,为整体止血剂的研究奠定了基础。
关键词
重组人凝血因子Ⅶ
表达载体
BHK细胞
基因表达
止血剂
Keywords
recombinant
human
coagulant
factor
vvvvvvvvvvvvvvvvvii
(
rhf
7777777777777777777777
)
bhk-
21
cell
line
expression
分类号
R973.1 [医药卫生—药品]
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
凝血因子Ⅶ基因表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达
吕茂民
王娜
王栋
于群
章金刚
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
6
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