Study of Immunoassay Methods for Recombinant Human Erythropoietin (rhEPO) Using Competitive ELISA

Two different immunoassay methods, competitive indirect enzyme-linked immuno-sorbent assay (CI-ELISA) and amplificative competitive indirect ELISA (ACI-ELISA) using biotin-avidin complex system were studied to detect rhEPO. The linear ranges were 50-20000 ng/mL and 10-50000 ng/mL for CI-ELISA and ACI-ELISA, respectively. The low detection limits of CI-ELISA and ACI-ELISA were 62.8 ng/mL and 8.5 ng/mL, respectively.

薄膜扩散梯度技术与紫外光谱法联合富集、检测rhEPO

以EPO抗体修饰的Fe_(3)O_(4)粉末-聚丙烯酰胺凝胶为结合相,明胶凝胶为扩散层,通过薄膜扩散梯度技术(DGT)与紫外光谱法,对去离子水、人体尿液中的rhEPO进行富集和检测的实验研究。在25℃、常压环境下,DGT中结合相的饱和富集容量为0.0758μg cm^(2),当pH值为5.5~8.0、无机盐浓度为0.3%~1.5%时,rhEPO的检测回收率基本不受影响。对质量浓度为6~15 ng mL的rhEPO水溶液进行检测时,rhEPO检测回收率的平均值为81.9%;对质量浓度为5~20 ng mL的rhEPO人体尿液进行检测时,rhEPO检测回收率的平均值为79.8%。

罗沙司他与重组人促红素分别联合琥珀酸亚铁治疗血液透析患者肾性贫血疗效的比较

目的 对比分析罗沙司他与重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)分别联合琥珀酸亚铁治疗维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者肾性贫血的临床疗效。方法 选择MHD肾性贫血患者120例,按照随机数字表法分为研究组和对照组,每组60例。对照组透析后使用rhEPO联合琥珀酸亚铁治疗,研究组透析后使用罗沙司他联合琥珀酸亚铁治疗。治疗前后,分别检测患者铁代谢水平、贫血指标水平、炎性因子水平及脂代谢水平,比较2组患者的临床疗效,并记录2组患者治疗期间药物不良反应的发生情况。结果治疗后,2组患者的血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、转铁蛋白(transferrin,TRF)、转铁蛋白饱和度(transferrin saturation,TSAT)、血细胞比容(hematocrit,Hct)、红细胞计数(red blood cell count,RBC)及血红白蛋白(hemoglobin,Hb)水平均显著提高,铁调素(hepcidin,Hepc)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、总胆固醇(total cholesterol,TC)及低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平均显著降低,且研究组的效果优于对照组(P<0.05);研究组的治疗总有效率(96.67%,58/60)高于对照组(78.33%,47/60),P<0.05;治疗期间研究组不良反应发生率(3.33%)低于对照组(13.55%),P<0.05。结论 罗沙司他联合琥珀酸亚铁可有效治疗MHD患者的肾性贫血,改善机体铁代谢水平及微炎症,且具有较高的安全性。

RhEPO对脑梗死后缺氧诱导因子-1α作用的研究

目的研究大鼠局灶性脑梗死后,重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,RhEPO)与缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的相关性及神经保护作用。方法大鼠随机分为假手术组、RhEPO干预组(脑缺血后分别于30 min、3 h、6 h、12 h及24 h加入RhEPO 3000 IU.kg-1.d-1腹腔注射,连用3 d)、盐水对照组,利用神经评分、TTC染色及免疫组化观察RhEPO对脑梗死后HIF-1α蛋白表达影响,及神经保护作用。结果缺血后3 d,RhEPO治疗组与盐水组神经评分相比减少显著(P<0.05),以30 min加药组为著。脑梗死相对体积比与神经评分成正相关。镜下可见假手术组HIF-1α蛋白无表达,盐水对照组HIF-1α蛋白阳性率较RhEPO干预组增高,差异显著(P<0.05);30 min及3 h RhEPO治疗组与组内24 h组相比HIF-1α减低明显(P<0.05)。结论 RhEPO可降低脑缺血性梗死后HIF-1α蛋白表达阳性率,且干预越早,HIF-1α表达越低,神经功能恢复作用越明显。

不同剂量rhEPO治疗131例癌症贫血的临床疗效评价

目的:对不同剂量的重组人红细胞生成素(rhEPO)治疗癌症贫血的临床疗效进行评价。方法:将符合条件的131例癌症贫血患者随机分入6个研究组,分别为5个rhEPO组(rhEPO剂量各为50U/kg、100U/kg、150U/kg、200U/kg、400U/kg)和1个对照组,共观察8周,每2周进行1次rhEPO的疗效观察和指标检测。结果:①患者Hb值和Hct值在应用rhEPO后呈明显上升趋势,4周～6周后与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。其中50U/kg组在治疗6周后显效,其它剂量组均为4周显效。②rhEPO50U/kg组的有效率低于其它各rhEPO组(P<0.05或P<0.01),其治疗后4周和8周的有效率分别为9.1%(P>0.05)和27.3%(P<0.05);其它各rhEPO组(100U/kg～400U/kg)之间的有效率无统计学差异(P>0.05),其治疗后4周和8周的有效率分别为28.6%～36.8%(P<0.05或P<0.01)和57.1%～68.4%(P<0.01)。各rhEPO组的不良反应发生率和输血需求率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在一定的剂量范围内(50U/kg～400U/kg,每周3次),rhEPO治疗癌症贫血以及预防化疗性贫血具有一定的疗效和相对的安全性。②不同剂量rhEPO治疗癌症贫血的疗效不同。rhEPO50U/kg组的疗效低于其它各剂量组,而在100U/kg～400U/kg的剂量范围内,rhEPO的疗效无统计学差异。

rhEPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用。方法 57只7天龄新生鼠随机分为假手术对照(正常对照组)、缺氧缺血性脑损伤动物模型组(HIBD模型)、rhEPO治疗组。在建立HIBD模型后,rhEPO治疗组立即一次性腹腔注射3 000IU/kg剂量的rhEPO;HIBD模型组注射等量生理盐水;于处置后24h电镜观察脑组织病理形态学变化,流式细胞计检测脑受损局部神经元细胞凋亡情况,实验7天进行短期感觉运动反射评价。结果与正常对照组相比,HIBD模型组光镜下左侧大脑病理损伤明显;HIBD模型组神经细胞凋亡与正常对照组相比增加(28.30±4.80 vs 47.14±6.97,P<0.05),存活细胞减少(72.42±7.93 vs 48.33±8.39,P<0.05);rhEPO治疗组细胞凋亡与HIBD模型组相比减轻(47.14±6.97 vs 36.88±9.43,P<0.05),存活细胞增多(48.33±8.39 vs 60.06±8.32,P<0.05);HIBD模型组悬吊测试、翻正反射、悬崖逃避反射、趋地反射这四项反射与正常对照组相比成绩均较差,提示神经功能受损;rhEPO治疗组翻正反射及悬崖逃避反射时间与HIBD模型组相比缩短,(4.59±0.11 vs 2.84±0.13,10.84±1.26 vs 8.49±1.03,均P<0.05),以上差异均有统计学意义。结论外源性给予rhEPO能够减轻HIBD大鼠脑组织病理损伤,稳定细胞结构,抑制细胞凋亡,改善短期行为学评价,从而发挥其神经保护作用。

丁酸钠对CHO-EPO工程细胞株rhEPO表达量的影响

以稳定整合有ｐＥＤＥＰＯ的ＣＨＯＥＰＯ工程细胞株为研究对象，在无血清条件下，系统观察了０５、１０、２５和５０ｍｍｏｌ／Ｌ４个浓度的丁酸钠作用于该细胞株的情况，结果表明：丁酸钠对ＣＨＯＥＰＯ工程细胞的生长有明显的抑制作用；影响ＣＨＯＥＰＯ工程细胞ＥＰＯ表达，浓度１０ｍｍｏｌ／Ｌ可提高ＥＰＯ表达量２５倍左右，并可持续较长的一段时间；延缓ＣＨＯＥＰＯ工程细胞在无血清培养时的细胞脱落；

重组人红细胞生成素(rhEPO)在乳腺癌患者化疗所致贫血的防治效果观察

目的分析重组人红细胞生成素(rhEPO)乳腺癌化疗所致贫血的防治效果。方法选取本院2016年6月～2018年5月收治的80例乳腺癌患者为研究对象,将其划分为观察组与对照组。观察组40例患者开展重组人红细胞生成素(rhEPO)治疗,对照组患者采取口服生血宁片,观察其防治效果。结果两组患者两组患者Hb、HCT、RBC治疗前后对比,两组患者疗周期天数与输血次数对比,观察组均优于对照组。各项指标对比,组间数据具备显著差异,P<0.05。结论就乳腺癌患者贫血症状,采取重组人红细胞生成素(rhEPO)治疗手段,在应用一段时间后,可切实改善患者贫血症状,降低输血概率,促使患者临床指标好转,减少患者不良反应的发生,以此缓解患者贫血症状。

rhEPO对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨rhEPO对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及其处理时间。方法:健康Wistar大鼠36只,随机分为对照组A、缺血前30 min预处理组B和缺血后5 min后处理组C 3组,每组12只。A组只给予夹闭肝蒂,B、C组均于皮下注射rhEPO 1 000 U/kg,三组均夹闭肝蒂45 min后恢复再灌注2 h,取血清及肝组织行AST、ALT、TNF-α、IL-1β检测及HE染色、NF-κβ的活化程度及计算肝组织凋亡指数(AI)。结果:与A组比较,B、C组肝细胞索排列较好,细胞坏死程度不明显。AST、ALT和TNF-α、IL-1β及NF-κB活化程度、AI在A组和B、C组之间均有显著差异(P<0.05),B和C组之间(除IL-1β外)也具有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEPO对缺血再灌注损伤的肝脏具有保护作用且预处理较后处理效果好。

重组人红细胞生成素大剂量冲击维持疗法治疗30例肿瘤相关贫血的临床报告

背景与目的:贫血是癌症患者常见的并发症,重组人红细胞生成素(recombinanthumanerythropoietin,rhEPO)的应用能改善癌症贫血患者的症状,但其最佳使用方法仍在探讨之中。为探索rhEPO在肿瘤相关贫血患者中的最佳用药方案,本研究在同期接受化疗的癌症贫血患者中进行了rhEPO冲击维持疗法的临床应用研究。方法:采用开放性非随机的临床研究方法,选取2004年5月至2005年2月30例同期接受化疗且伴随贫血的恶性肿瘤患者,第1周采用rhEPO120000U冲击用药(40000U皮下d1,3,5),然后rhEPO每周40000U皮下维持用药,共3周(d8,15,22);比较治疗前及治疗开始后每2周的血红蛋白(Hb)水平和红细胞压积(Hct)值。结果:入组患者给予rhEPO后Hb水平呈持续上升趋势,在治疗后第2周及第4周Hb比基础值(79.56g/L)上升≥20g/L的患者分别占27.59%和61.90%;第2周(n=29)及第4周(n=21)Hb的平均值分别为90.26g/L和96.81g/L,与治疗前相比差异均具有显著性(P<0.05);第2周及第4周Hct的平均值分别为27.01%和30.17%,与治疗前(24.29%)相比也有所提高(P=0.062,P=0.001)。所有患者均耐受良好。结论:在恶性肿瘤贫血患者中使用rhEPO大剂量冲击维持疗法,可有效快速提高患者的血红蛋白水平,改善患者的贫血状况,该疗法耐受性较好,值得进一步扩大临床研究。

重组人促红素联合蔗糖铁用于妇科围手术期红细胞动员的疗效观察

目的观察重组人促红素(rhEPO)联合蔗糖铁用于妇科围手术期红细胞动员的效果。方法选取2012年5-12月我科收治的中度贫血患者156例,随机分为对照组与观察组,每组78例。对照组按照患者血红蛋白(Hb)情况,给予口服铁剂、饮食补充。观察组于手术前一日开始给予rhEPO 20 000 IU皮下注射,同时静脉补充蔗糖铁100 mg,每周2次。手术日开始,给予rhEPO 10 000 IU/支,每日皮下注射,连续7 d。分别于注射后1、3、5、7 d观察两组患者的Hb的变化情况。结果手术后,观察组患者的Hb未受手术影响;对照组患者的Hb与手术前比较,均有不同程度下降;治疗组患者的Hb值明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 rhEPO联合蔗糖铁应用于妇科围手术期红细胞动员效果满意,既能缓解目前血液紧张的状态,又可以避免异体输血的隐患。

基因重组人红细胞生成素治疗29例非肾性贫血

目的：探讨基因重组人红细胞生成素（ｒｈＥｐｏ）对非肾性贫血的治疗作用。方法：用ｒｈＥｐｏ对２９例非肾性贫血进行治疗，其中包括再生障碍性贫血（ＡＡ）６例，骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）１２例，多发性骨髓瘤（ＭＭ）５例，非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）６例，疗程３个月，观察其疗效及毒副作用。结果：１８例治疗后Ｈｂ有不同程度上升，总有效率为６２．０％。各组有效率分别为：ＡＡ组６６．６％（４／６）；ＭＤＳ组５８．３％（７／１２），其中难治性贫血（ＲＡ）为８５．７％（６／７），转变中的原始细胞增多型（ＲＡＥＢｔ）２例均无效；ＭＭ组８０．０％（４／５）；ＮＨＬ组５０．０％（３／６）。结论：ｒｈＥｐｏ可使非肾性贫血获得不同程度改善，ＭＤＳ组中ＲＡ及ＭＭ患者疗效较显著。ｒｈＥｐｏ不良反应小，使用安全。

重组人类红细胞生成素纠正心脏直视手术后贫血的可行性研究

目的：了解手术失血对病人自体促红细胞生成素的影响，通过动物实验证实生理条件下应用基因重组人类促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）的作用及对血液粘稠度的影响，将重组人类促红细胞生成素应用于心脏手术后早期纠正贫血，促进病人迅速恢复。方法：术前无贫血、术中中等量失血、术后未输血择期外科手术病人１０例（ＥＰＯ组），测定其术前、术后１、２、４、６、８天ＥＰＯ及Ｈｃｔ变化。健康家兔６只，用ｒｈＥＰＯ ３００ＩＵ·ｋｇ－１·ｗ－１共２周，监测给药前、给药后３、６、１２、１３、２１天Ｈｂ、Ｈｃｔ、ＲＢＣ变化及监测血清ＡＬＴ、血清Ｋ＋、血浆粘度和全血粘度变化。心脏手术后贫血（Ｈｂ＜１００ｇ／Ｌ）病人６例（给药组），应用ｒｈＥＰＯ ３００ＩＵ·ｋｇ－１·ｗ－１连续两周，观察给药前后Ｈｂ、Ｈｃｔ变化。结果：ＥＰＯ组术后血清ＥＰＯ立即上升，术后第１～２天达到高峰后下降，但与术前比较仍呈显著性升高。Ｈｃｔ术后下降，至术后８天无明显上升。家兔用药后第１２天Ｈｂ、Ｈｃｔ、ＲＢＣ明显升高，血清ＡＬＴ、血清Ｋ＋无显著改变，血浆粘度和全血粘度无明显升高。术后给药组患者Ｈｂ、Ｈｃｔ升高，给药后第１４天Ｈｂ升高与术前无显著性差异，而Ｈｃｔ增加与给药前比较有?

重组人促红细胞生成素鼻腔给药对大鼠慢性脑缺血的保护作用

目的:观察重组人促红细胞生成素(rhE-PO)鼻腔给药对大鼠慢性缺血性脑损伤的保护作用。方法:以大脑中动脉栓塞诱导大鼠局灶性脑缺血,手术当日术前30 min和术后2 h各给药一次,第2天起隔天一次,持续到术后14 d。缺血后1、3、7、14、21、283、5 d进行神经症状评分和斜板试验,缺血后35 d计算脑梗死体积和缺血周边区神经元密度。结果:rhEPO鼻腔给药(24、48 U)、依达拉奉和rhEPO腹腔给药(5000 U/kg)能改善缺血后神经症状评分,提高斜板角度,降低脑梗死体积,增加缺血侧周边区存活神经元密度。结论:rhEPO鼻腔给药对大鼠慢性缺血性脑损伤具有保护作用,其有效剂量范围较腹腔给药低。

促红细胞生成素冲击方法治疗化疗相关贫血的临床研究

目的比较重组人促红细胞生成素(rhEPO)冲击剂量治疗法与常规剂量治疗法治疗肿瘤化疗相关贫血的疗效。方法根据NCCN《癌症及其治疗相关贫血治疗指南》〔1〕,选择64例恶性肿瘤联合化疗后贫血患者(Hb<11g/L),所有病例均经病理或细胞学检查确诊。分组rhEPO冲击治疗组28例(冲击组)和rhEPO常规治疗组(36例)。冲击组rhEPO20000u,1次/d,连用2d,10000u,1次/d,连用6d,即在8d内共用100000u。随后同常规组。常规组40000u/周,皮下注射(SC)。812周。分别于治疗后第2、4、6、8周评定疗效。结果冲击组和常规组基础Hb水平分别为(90±10)g/L和(93±9)g/L;治疗后2周Hb增涨分别为(18.8±7.9)g/L和(9.2±6.3)g/L;治疗后4周Hb增加分别为(32.7±7.8)g/L和(19.2±7.8)g/L;治疗后6周rhEPOHb增加(38.7±8.8)g/L和(27.2±7.4)g/L,治疗后8周rhEPOHb增加分别为(41.0±8.9)g/L和(29.3±9.9)g/L。冲击剂量组和常规剂量组相比差异有统计学意义(P<0.01)。rhEPO冲击剂量治疗组总有效率为84.4%;常规剂量治疗组总有效率为77.8%,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论rhEPO冲击治疗方法能快速纠正联合方案化疗所致贫血,能为顺利完成化疗提供有力的保障;而且安全能够耐受。

重组人促红细胞生成素对冠状动脉搭桥手术患者的脑保护作用

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对冠状动脉搭桥手术患者的脑保护作用。方法将冠状动脉搭桥患者随机分组,实验组术前应用rhEPO,通过患者术后临床表现、精神量表评分以及血清脑特异性蛋白(S100B蛋白)浓度测定,研究rhEPO的脑保护作用。结果实验组与对照组相比,术后认知障碍发生率低,精神量表评分高,S100B蛋白浓度无明显升高。结论冠状动脉搭桥患者术前预防性应用rhEPO可以减轻某些因素导致的脑损伤。

细胞因子的临床应用进展——下篇:集落刺激因子、红细胞生成素和干扰素

本文综合报道了重组集落刺激因子、红细胞生成素、干扰素及其临床应用的最新进展。 重组集落刺激因子、红细胞生成素和干扰素已在包括中国的一些国家上市,其新的治疗适应证正在临床试验中。

重组人红细胞生成素大规模制备中反相色谱的条件优化

目的优化重组人红细胞生成素(rhEPO)大规模制备纯化中主要影响回收率的反相色谱的条件,提高回收率。方法采用反相纯化作为三步法纯化的第一步,利用R1型反相填料采用不同分步洗脱条件进行洗脱。结果优化后经第一步反相色谱所得rhEPO蛋白纯度达70%,再通过阴离子交换和凝胶过滤色谱纯化,rhEPO终产物的纯度可达100%,体内比活达1.91×105IU/mg,rhEPO蛋白的回收率提高了1.2倍。结论优化的反相纯化条件(30%乙醇-1.5 mol/L尿素,60%乙醇-3.0 mol/L尿素)能更有效的从培养上清中大量纯化出rhEPO,回收率高。获得的产品纯度高,体内外活性好。适合大规模纯化。

重组人促红素对家兔心肺复苏后早期心脏功能影响的实验研究

目的通过观察心肺复苏后家兔血流动力学和心肌细胞凋亡的改变，探讨重组人促红素（rhEPO）对复苏后心功能的影响及可能机制。方法采用休外致颤法建立家兔心肺复苏模型，18只家兔随机分为3组：手术对照组（A组）：仅麻醉、手术、气管插管，但不致颤；肾上腺素组（B组）：复苏时使用标准剂量肾上腺素（30μg／kg）；肾上腺素＋rhEPO组（C组）：在B组基础上，自主循环恢复（ROSC）后给予rhEPO（5000IU／kg）。动态记录室颤前，ROSC即刻、15min、30min、60min和120min的左室舒张末压（LVEDP）、左室内压上升和下降最大速率（peak±dp／dt），实验后处死家兔，观察各组心肌凋亡及凋亡诱导因子（AIF）表达，同时观察心肌趟微结构。结果①与A组比较，B、C两组复苏成功后LVEDP明显增高（P〈0．05或P〈0．01），复苏后60min，两组LVEDP呈下降趋势，C组虽较B组明碌，但直到120min时差异有显著性（P=0．003）；②与A组比较，B、C曲组复苏成功后peak±dp／dt均呈下降趋势（P〈0．05或P〈0．01），但复苏后60min，C组出现回升，且持续副120min时，差异显著（P=0．009）；③电镜观察显示B、C两组均见心肌细胞肿胀，线粒体及肌丝等超微结构损伤，尤以B组显著。结论rhEPO可改善复苏后心功能障碍，对复苏后心脏有保护作用，其机制可能与降低AIF表达，抑制细胞捌亡有关。

重组人促红细胞生成素纯化工艺的优化

采用堆积床生物反应器 ,用无血清培养基培养分泌重组人促红细胞生成素 ( rh EPO)的工程细胞株ZK970 3.所收集的上清 ,采用阴离子交换层析 -反相层析 -分子筛层析三步纯化工艺路线 ,分别用 Q-SepharoseXL-C4 -S-2 0 0 (方法 )和 DEAE Sepharose FF-Source-S-2 0 0 (方法 )纯化 3批产品 ,所得 EPO纯度达 98%以上 ,体外比活性大于 1 .3× 1 0 5 IU /mg.方法 、方法 纯化过程的 EPO体外活性回收率分别为 2 3.56%和2 8.57% .本纯化方法 工艺纯化日程短 ,分离效果好 ,EPO体内、体外活性回收率较高 ,更适合于大规模生产重组人促红细胞生成素 .