联合检测血清FGF-21、RBP4、SF水平在2型糖尿病评估中的价值研究

目的探究并分析联合检测血清人成纤维细胞生长因21 (FGF-21)、重组人视黄醇结合蛋白-4(recombinant human retinol binding protein-4,RBP4)、血清铁蛋白(serum ferritin,SF)水平在2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)评估中的价值。方法选取2016年6月至2017年6月我院收治的2型糖尿病患者48例,作为T2DM组;同时选取34例糖耐量异常(impaired glucose tolerance,IGT)患者,作为IGT组,另选取我院进行体检的健康志愿者30例,作为对照组。观察并记录各组受试者FGF-21、RBP4、SF水平,比较其在不同组之间的表达情况。分析并比较单独FGF-21、RBP4、SF以及联合FGF-21、RBP4、SF检测对2型糖尿病的评估效果。采用ROC曲线分析各方法的评估效率。结果 T2DM组血清FGF-21、RBP4、SF水平显著高于IGT组和健康人群(P <0.05),而IGT组患者FGF-21、RBP4、SF水平显著高于健康人群(P<0. 05);用单独的FGF-21、RBP4、SF检测进行评估,特异性差异具有统计学意义(P <0.05),其中,RBP4评估的特异性显著高于FGF-21、SF的评估特异性(P<0.05);对于平行联合检测,FGF-21+RBP4+SF评估的灵敏度、阴性预测值均显著高于FGF-21+SF、RBP4+SF(P<0.05);对于系列联合检测,FGF-21+RBP4+SF评估的特异性显著高于FGF-21+SF(P<0.05);采用FGF-21+RBP4+SF评估时,系列联合检测的灵敏度显著低于平行联合检测(P <0.05),特异性显著高于平行联合检测(P<0.05);FGF-21+SF、RBP4+SF及FGF-21+RBP4+SF评估T2DM,平行联合检测ROC曲线下面积分别为0.761、0.763和0.915,系列联合检测ROC曲线下面积为0.750、0.721和0.904,FGF-21+RBP4+SF评估的ROC曲线下面积显著高于FGF-21+SF、RBP4+SF(P<0.05),具有统计学意义。结论 FGF-21+RBP4+SF联合检测评估效率显著高于各单项检查,能有效提高糖尿病评估灵敏度、特异性及准确率,值得临床推广。

不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子21蛋白纯度的影响

目的：研究重组人成纤维细胞生长因子21（rhFGF21）在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液和反复冻融因素对rhFGF21稳定性的影响,进一步完善纯化rhFGF21的工艺。方法：rhFGF21在不同温度（-20℃、4℃和25℃）、不同pH值缓冲液（醋酸-醋酸钠缓冲液pH 4.0和pH 5.0、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH 5.0和pH 6.0、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液pH 6.0、pH 6.5和pH 7.0,TrisHCl缓冲液pH 7.5和pH 8.0）中及反复冻融条件下分别保存,采用高效液相色谱法（HPLC）检测rhFGF21纯度,同时观察外观性状。结果：于-20℃和4℃分别保存时,rhFGF21的各项性质在观察期内均无明显变化;25℃时,rhFGF21存放14d纯度由0d时（100.00±0.00）%下降至（15.20±0.14）%（P〈0.01）;在pH 4.0和pH 5.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 5.0和pH 6.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 6.5和pH 8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中,溶液澄清透明;rhFGF21原液反复冻融后其纯度变化差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：rhFGF21在低温和pH 6.5－8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中溶液较稳定,反复冻融处理对rhFGF21稳定性也有明显影响。

重组人成纤维细胞生长因子-21对2型糖尿病模型大鼠LXRα及GLUT1 mRNA表达的调节作用

目的研究重组人成纤维细胞生长因子-21(rhFGF-21)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠LXRα及GLUT1mRNA表达的调节作用。方法将T2DM大鼠模型随机分组,每日皮下注射rhFGF-21,8周后,测定大鼠空腹FBG、FA、TG、TC、HDL-C、LDL-C含量,采用RT-PCR方法检测LXRα及GLUT1 mRNA的表达水平。结果(1)rhFGF-21能稳定降低T2DM模型大鼠血糖。(2)rhFGF-21用药组大鼠较T2DM模型组大鼠LXRα和GLUT1 mRNA表达量显著增加。(3)大、中剂量rhFGF-21能显著降低T2DM模型大鼠血清FA、TG、TC、LDL-C含量,同时显著升高血清HDL-C含量。结论rhFGF-21能上调T2DM模型大鼠LXRα、GLUT1 mRNA表达,增加基础水平的葡萄糖转运,从而降低血糖,改善脂质代谢紊乱。

重组人成纤维细胞生长因子-21的表达及纯化工艺的优化

目的优化重组人成纤维细胞生长因子-21(SUMO-rhFGF-21)融合表达工程菌的表达条件及目的蛋白纯化工艺。方法对工程菌的诱导温度、时间及诱导剂浓度进行优化,并进行罐发酵,对菌体裂解液进行离子交换层析、Ni离子亲和层析及分子筛层析等。纯化产物经SDS-PAGE和HPLC鉴定纯度。结果在诱导温度为37℃,诱导时间为4h,IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高,达20.5%;罐发酵收菌量可达66g/L,目的蛋白的表达量达20.2%;纯化后的rhFGF-21纯度达96%以上。结论优化了rhFGF-21的表达条件及纯化工艺,为rhFGF-21用于新药开发奠定了基础。

注射用重组人成纤维细胞生长因子-21食蟹猴急性毒性试验研究

目的观察食蟹猴单次sc注射用重组人成纤维细胞生长因子-21(RH-FGF-21)的急性毒性反应。方法 8只健康食蟹猴,随机分成RH-FGF-21组和对照组,RH-FGF-21组6只,对照组2只,均雌雄各半,分别单次sc最大给药浓度和最大给药体积的供试品RH-FGF-21(9.0 mg/kg)和最大体积的对照品灭菌注射用水(1.0 m L/kg),给药后连续观察21 d。在给药前适应期和给药后观察期内进行动物的一般观察(外观、行为、饮食、反应能力、分泌物和排泄物等)、死亡情况、体质量变化、肛温、进食量、眼科和心电图检查、血液学和血液生化学检测、尿液观察和分析;观察期结束安乐死全部存活动物,进行组织病理学检查。结果动物体质量、肛温、进食量、心电图检查和眼科检查与同期对照组比较均未见明显异常;血液学检测、血液生化检测、尿液观察和分析结果、组织病理学检查也未见由药物引起的异常变化。结论在本试验条件下未发现由药物引起的急性毒性症状,9.0 mg/kg可认为是食蟹猴单次sc RH-FGF-21的最大给药量。