重组海蛇碱性磷脂酶A_2的抗肿瘤活性与相对酶活性的关系

背景与目的:蛇毒磷脂酶A2(snakevenomphospholipaseA2,SVPLA2)是一类分子量为14ku左右的蛋白家族,除了酶活性,该蛋白还具有多种药理活性。迄今,陆地蛇PLA2的结构与功能关系特别是其酶活性与药理活性的关系已被广泛研究,但对海蛇PLA2的研究则较少。本文旨在研究重组平颏海蛇碱性磷脂酶A2(recombinantseasnakebasicphospholipaseA2,rSSBPLA2)及其突变体(rN48和rK49)体内外抗肿瘤作用,并探讨酶活性相关位点对抑瘤作用的影响。方法:对酶活性相关位点48、49位氨基酸进行His→Asn和Asp→Lys的定点突变,用MTT法检测rSSBPLA2及其突变体rN48和rK49对人原髓白血病细胞HL-60、人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH、人胃癌细胞MGC-803和人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;用小鼠S180移植瘤和艾氏腹水癌(EAC)模型对rSSBPLA2进行抗肿瘤作用观察;并检测突变体对小鼠移植瘤的抗瘤活性。结果:与rSSBPLA2相比较,突变体rN48和rK49的相对酶活力分别为0和5%。rSSBPLA2对HL-60细胞、SK-N-SH细胞和MGC-803细胞的IC50值分别为(45.28±0.09)μg/ml、(57.07±0.12)μg/ml和(69.34±0.35)μg/ml,对HepG2细胞生长没有抑制作用;而rN48和rK49对以上细胞均无抑制作用。rSSBPLA2对小鼠S180移植瘤具有明显的抑制作用,按2mg/kg(qd×10)、2mg/kg(q2d×5)、4mg/kg(qd×1)、4mg/kg(q5d×2)实验给药,其抑瘤率分别为50.8%、43.2%、38.2%、55.5%;rSSBPLA2按4mg/kg(q5d×2)剂量给药时,对EAC抑瘤率为33.5%,与对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。而突变体rN48和rK49分别按4mg/kg(q2d×5)和7mg/kg(qd×10)方案进行实验,无明显抗肿瘤作用。结论:rSSBPLA2的抑瘤活性可能与其酶活性密切相关。