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Antiviral Activity of Recombinant Cyanovirin-N against HSV-1 被引量:3
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作者 Hong YU Zong-tao LIU +1 位作者 Rui LV Wen-qing ZHANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第6期432-439,共8页
In this study,a standard strain of HSV-1 (strain SM44) was used to investigate the antiviral activity of the recombinant Cyanovirin-N (CV-N) against Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) in vitro and in vivo.Cytopathic ... In this study,a standard strain of HSV-1 (strain SM44) was used to investigate the antiviral activity of the recombinant Cyanovirin-N (CV-N) against Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) in vitro and in vivo.Cytopathic effect (CPE) and MTT assays were used to evaluate the effect of CV-N on HSV-1 in Vero cells.The number of copies of HSV-DNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR).The results showed that CV-N had a low cytotoxicity on Vero cells with a CC50 of 359.03±0.56 μg/mL,and that it could not directly inactivate HSV-1 infectivity.CV-N not only reduced the CPE of HSV-1 when added before or after viral infection,with a 50% inhibitory concentration (IC50) with 2.26 and 30.16μg/mL respectively,but it also decreased the copies of HSV-1 DNA in infected host cells.The encephalitis model for HSV-1 infection was conducted in Kunming mice,and treated with three dosages of CV-N (0.5,5 & 10 mg/kg) which was administered intraperitoneally at 2h,3d,5d,7d post infection.The duration for the appearance of symptoms of encephalitis and the survival days were recorded and brain tissue samples were obtained for pathological examination (HE staining).Compared with the untreated control group,in the 5mg/kg CV-N and 10mg/kg CV-N treated groups,the mice suffered light symptoms and the number of survival days were more than 9d and 14d respectively.HE staining also showed that in 5mg/kg CV-N and 10mg/kg CV-N treated groups,the brain cells did not show visible changes,except for a slight inflammation.Our results demonstrated that CV-N has pronounced antiviral activity against HSV-1 both in vitro and in vivo,and it would be a promising new candidate for anti-HSV therapeutics. 展开更多
关键词 recombinant cyanovirin-N Herpes simplex virus type 1(HSV-1 Antiviral activity Real-time FQ-PCR ENCEPHALITIS
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Efficacy of recombinant human osteoprotegerin combined with tinidazole in the treatment of periodontitis mice and its correlation with serum RANKL and MCP-1 levels 被引量:1
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作者 Yi Chen An-Chun Mo +1 位作者 Yong-Lin Xie Yan-Ling Shao 《Journal of Hainan Medical University》 2018年第22期1-4,共4页
Objective: To investigate the effect of recombinant human osteoprotegerin combined with tinidazole on mice with periodontitis and the effect on serum RANKL and MCP-1 levels. Methods: 80 SPF-cleaned mice were randomly ... Objective: To investigate the effect of recombinant human osteoprotegerin combined with tinidazole on mice with periodontitis and the effect on serum RANKL and MCP-1 levels. Methods: 80 SPF-cleaned mice were randomly divided into 4 groups, 20 each, model group, tinidazole group and recombinant human osteoprotegerin group were modeled by Kimura et al., and tinidazole group received tinidazole. After intragastric administration, the recombinant human osteoprotegerin group was injected with recombinant human osteoprotegerin in the periodontal pocket according to the tinidazole group. The periodontal changes of the four groups of mice were observed and recorded, and the gingival rating was performed. Epithelial tissue morphology was observed by hematoxylin-eosin (HE) staining. Serum levels of IL-4, IL-6, RANKL and MCP-1 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results:After the intervention, the model group developed severe inflammatory reactions, including redness, hemorrhage, and deep periodontal pockets. The teeth were significantly loosened. The mice in the tinidazole group and the recombinant human osteoprotegerin group recovered substantially, and the gingival rating of the recombinant human osteoprotegerin group was better than that. The tinidazole group and the model group (P<0.05). The results of HE staining showed that the model group had edema, vasodilation and a large amount of inflammatory infiltration. The epithelial structure of the mice in the tinidazole group and the recombinant human osteoprotegerin group was intact and arranged closely and orderly. After intervention, the IL-4 in the tinidazole group and the recombinant human osteoprotegerin group was significantly higher than the model group and IL-6 was significantly lower than the model group (P<0.05), and the recombinant human osteoprotegerin group IL-4 was significantly higher after the intervention. IL-6 was significantly lower in the tinidazole group than in the tinidazole group (P<0.05). After the intervention, the tinidazole group and the recombinant human osteoprotegerin group were significantly reduced, and the recombinant human osteoprotegerin group RAKNL and MCP-1 were significantly lower than the model group (P>0.05). Conclusion: Recombinant human osteoprotegerin combined with tinidazole has a better therapeutic effect on gums and teeth in mice with periodontitis, and can lower the levels of RAKNL and MCP-1 in serum, inhibit bone resorption and protect teeth. 展开更多
关键词 PERIODONTITIS TINIDAZOLE recombinANT HUMAN OSTEOPROTEGERIN Receptor activator of Nuclear Factor-κB Ligand MONOCYTE chemotactic protein-1
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血清sLOX-1、ESM-1对急性缺血性脑卒中患者rt-PA静脉溶栓后发生出血转化的预测价值 被引量:3
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作者 赵浩 王敏博 张子豪 《检验医学与临床》 2024年第3期333-337,共5页
目的探讨血清可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)对急性缺血性脑卒中(AIS)患者重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗后发生出血转化(HT)的预测价值。方法选择2020年1月至2022年6月... 目的探讨血清可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)对急性缺血性脑卒中(AIS)患者重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗后发生出血转化(HT)的预测价值。方法选择2020年1月至2022年6月在宝鸡市人民医院接受rt-PA静脉溶栓治疗的AIS患者320例为研究对象,根据治疗后头颅CT复查结果分为HT组和非HT组,采用酶联免疫吸附试验检测两组患者的血清sLOX-1、ESM-1水平,并进行比较;采多因素Logistic回归分析rt-PA静脉溶栓后发生HT的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sLOX-1、ESM-1对rt-PA静脉溶栓后发生HT的预测价值。结果治疗36 h后,47例患者发生HT(HT组),HT发生率为14.69%(47/320),剩余273例未发生HT患者为非HT组。HT组年龄、合并高血压患者占比、入院时NIHSS评分、治疗前血清sLOX-1和ESM-1水平高于非HT组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,入院时NIHSS评分>13.04分、血清sLOX-1>0.92 ng/mL、血清ESM-1>1.24μg/mL是AIS患者静脉溶栓后发生HT的独立危险因素(P<0.05)。治疗前血清sLOX-1、ESM-1单独及联合检测预测rt-PA静脉溶栓后发生HT的曲线下面积(AUC)分别为0.797、0.775和0.840。结论血清sLOX-1、ESM-1是AIS患者rt-PA静脉溶栓后发生HT的影响因素,二者联合检测对其具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 内皮细胞特异性分子-1 急性缺血性脑卒中 重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓 出血转化 预测价值
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SIRT6过表达激活AMPK/Nrf2/HO-1通路抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡
4
作者 卢振华 沈静 +2 位作者 黄文军 孙伟 马勇翔 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2024年第8期663-668,676,共7页
[目的]探讨沉默调节蛋白6(SIRT6)过表达抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡是否涉及腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(AMPK/Nrf2/HO-1)信号通路的激活。[方法]将实验分为4组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+SIRT6组... [目的]探讨沉默调节蛋白6(SIRT6)过表达抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡是否涉及腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(AMPK/Nrf2/HO-1)信号通路的激活。[方法]将实验分为4组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+SIRT6组和AngⅡ+空载体(EV)组,通过RT-PCR检测SIRT6的mRNA水平,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测SIRT6、心肌细胞凋亡相关蛋白(Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2)、DNA损伤相关蛋白(γ-H2AX、p-ATM)及AMPK/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白(p-AMPK、Nrf2、HO-1)的表达水平,DCFH-DA染色法测定活性氧(ROS)含量,比较各组间上述指标的变化情况。[结果]与对照组相比,AngⅡ组SIRT6的mRNA、蛋白表达水平及细胞活性明显降低,细胞凋亡率增高,Bax、cleaved Caspase-3表达升高,Bcl-2表达降低,γ-H2AX、p-ATM蛋白表达升高,p-AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达降低,ROS活性增高(均P<0.01)。与AngⅡ+EV组相比,AngⅡ+SIRT6组SIRT6水平及细胞活性增高,细胞凋亡及Bax、cleaved Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高,γ-H2AX、p-ATM蛋白表达降低,p-AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达升高,ROS的活性降低(均P<0.01)。[结论]SIRT6过表达抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡与AMPK/Nrf2/HO-1信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 沉默调节蛋白6 腺苷酸环化蛋白激酶/核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1 氧化应激 DNA损伤 细胞凋亡
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利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-1的研究 被引量:10
5
作者 段宇 汪承亚 +3 位作者 赵红 陈家伟 张志芳 John S Sussenbach 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2001年第6期274-277,共4页
目的利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法将 15kD人IGF 1(hIGF 1)前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBak PAK8中 ,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞... 目的利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法将 15kD人IGF 1(hIGF 1)前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBak PAK8中 ,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF 1。以Bm NPV/IGF 1感染 5龄家蚕幼虫 ,分别在感染后 2 4、48、72、96、10 8、12 0h提取家蚕血淋巴液 ,以ELISA法测定不同时象家蚕血中IGF 1浓度 ,采用Western blot分析鉴定IGF 1免疫学活性 ,MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果ELISA测定显示 ,BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫后 ,72h起蚕血中IGF 1浓度随感染时间延长而逐渐增高 (19.0 9~ 2 3.36 μg/ml) ,12 0hIGF 1含量达到最高值 (2 3 .36 μg/ml) ,Western blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7.5kD成熟hIGF 1,并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应 ,其促细胞增殖能力明显优于来源于E .coli的IGF 1标准品。结论具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 基因表达 重组家蚕核型多角体病毒 生物学活性
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一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建 被引量:8
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作者 郭爱华 刘志锋 +3 位作者 孙学刚 李海玉 邓鹏 姜勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期545-548,共4页
目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、... 目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、DNA测序鉴定正确的pET14b-His-TAT-EGFP质粒转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定正确,再经蛋白透析、过滤处理。将His-TAT-EGFP融合蛋白加入ECV304细胞中,用荧光显微镜观察。结果重组质粒pET14b-His-TAT融合表达载体和pET14b-His-TAT-EGFP重组载体经酶切、DNA测序鉴定证实构建成功。表达纯化出了高纯度His-TAT-EGFP融合蛋白并具有较高细胞内转导活性。结论成功改建pET14b-His-TAT-Flag重组载体,正确构建pET14b-His-TAT-EGFP载体,His-TAT-EGFP融合蛋白高效表达,并具有明确的细胞内转导活性。 展开更多
关键词 HIV-1反式激活因子 蛋白质转导结构域 融合蛋白 细胞内转导
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拟南芥Alpha-dioxygenase1的原核表达、纯化及活性的检测 被引量:3
7
作者 张小梅 韩念法 +3 位作者 张美祥 李广录 范三红 郭蔼光 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期9-12,共4页
从经水杨酸处理的拟南芥开花期植株中获得cDNA,扩增得到Alpha-dioxygenase 1(DOX1)基因,进行原核表达、纯化和生物活性检测。利用原核表达载体pMAL-c4x在T7 Express CompetentE.coli和BL21(DE3)-RIPL codon+菌株中表达DOX1,经Amylose Re... 从经水杨酸处理的拟南芥开花期植株中获得cDNA,扩增得到Alpha-dioxygenase 1(DOX1)基因,进行原核表达、纯化和生物活性检测。利用原核表达载体pMAL-c4x在T7 Express CompetentE.coli和BL21(DE3)-RIPL codon+菌株中表达DOX1,经Amylose Resin亲和层析柱纯化。SDS-PAGE结果表明,重组融合蛋白在BL21(DE3)-RIPL codon+中的表达通过灰度值比较分析以可溶性为主,表达率约3.7%,纯化的DOX1纯度可达45%。愈创木酚法表明,可溶性重组蛋白不具有过氧化物酶活性;2,4-DNP法测试表明可溶性重组蛋白具有脂肪酸双加氧酶活性。 展开更多
关键词 Alpha—dioxygenase 1 重组表达 2 4-DNP 亲和纯化 活性
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人重组骨形成蛋白-1对牙髓细胞生物学效应的研究 被引量:4
8
作者 苏勤 何国华 +2 位作者 孙叶芳 陆怀秀 王胜朝 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期300-302,I016,共4页
通过细胞培养技术、噻唑盐比色测定(MTT)、酶动力学方法和放射免疫技术,了解人重组骨形成蛋白-1(rhOP-1)对体外培养的人牙髓细胞增殖、碱性磷酸酶活性及骨钙素表达的影响。结果表明,rhOP-1可促进牙髓细胞增殖,... 通过细胞培养技术、噻唑盐比色测定(MTT)、酶动力学方法和放射免疫技术,了解人重组骨形成蛋白-1(rhOP-1)对体外培养的人牙髓细胞增殖、碱性磷酸酶活性及骨钙素表达的影响。结果表明,rhOP-1可促进牙髓细胞增殖,提高牙髓碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达,在本实验剂量范围内呈浓度依赖关系,具有诱导牙髓细胞向成骨方向转化的趋势。 展开更多
关键词 rhOP-1 牙髓细胞 碱性磷酸酶 骨钙素 细胞增殖
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重组人胰岛素样生长因子-1纯化及其鉴定的研究 被引量:3
9
作者 段宇 赵红 +1 位作者 汪承亚 陈家伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期557-560,共4页
目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除... 目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除杂质,采用亲和层析法纯化rhIGF鄄1。以ELISA法测定纯化产物中rhIGF鄄1含量,用SDS鄄PAGE和Western鄄blot分析鉴定rhIGF鄄1纯度及免疫学活性,4-甲基偶氮唑蓝(tetrazoliumsalt,MTT)法观察其对MCF鄄7细胞增殖的影响。结果:纯化后rhIGF鄄1纯度约为40%,Westernblot分析发现,主要纯化产物相对分子质量为7.5ku的成熟hIGF鄄1,所含非目的产物与hIGF鄄1无免疫交叉反应。细胞活性刺激实验显示,rhIGF鄄1纯品对MCF鄄7细胞有较好的刺激活性,促增殖能力优于来源于大肠杆菌的rhIGF鄄1产品。结论:蚕血淋巴中的rhIGF鄄1经亲和层析后初步得到纯化,并显示良好的免疫学活性和生物学活性。 展开更多
关键词 重组人胰岛素样生长因子—1 家蚕幼虫 亲和层析 纯化产物 活性
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重组PAI-1在大肠杆菌中的高效表达 被引量:2
10
作者 隋广超 孙红 胡美浩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期250-254,共5页
纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)在天然状态下含量很低。为了进行PAI-1的结构与功能的研究,构建了表达重组PAI-1的质粒pBV220/PAI-1,并在大肠杆菌中得到了高效表达。最高表达量为菌体总蛋白量的49%以上。经Western blotting检测,得到... 纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)在天然状态下含量很低。为了进行PAI-1的结构与功能的研究,构建了表达重组PAI-1的质粒pBV220/PAI-1,并在大肠杆菌中得到了高效表达。最高表达量为菌体总蛋白量的49%以上。经Western blotting检测,得到了分子量为43.0kDa的反应条带。对形成包涵体的表达产物进行变、复性处理及Sephadex G-75的初步纯化,得到了潜伏态的重组PAI-1。用纤维蛋白平板法和显色底物法,测定出经4mol/L盐酸胍激活后的重组PAI-1对尿型纤溶酶原激活物(u-PA)有明显的抑制活性。而且,激活后的重组PAI-1经过37℃处理,会逐渐转变为潜伏态。 展开更多
关键词 重组PAI-1 大肠杆菌 高效表达 基因工程
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重组人成骨蛋白-1的纯化及其生物学活性研究 被引量:1
11
作者 王国栋 王世立 +4 位作者 韩金祥 孙杰 车婧 赵甜娜 李俊玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第14期1-3,共3页
目的 获得高纯度的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性。方法 表达rhOP-1工程菌经发酵后,裂菌、提取包涵体,层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性。采用改良MTT法检测rhOP-1对NIH3T3细胞增殖和对... 目的 获得高纯度的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性。方法 表达rhOP-1工程菌经发酵后,裂菌、提取包涵体,层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性。采用改良MTT法检测rhOP-1对NIH3T3细胞增殖和对硝基苯酚法(PNPP)检测rhOP-1对细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,同时在体内通过小鼠肌袋埋植实验测定rhOP-1活性。结果 经纯化的rhOP-1纯度可达98%。体外rhOP-1浓度在0.06~6μg/ml可明显促进细胞生长和ALP活性;体内rhOP-1埋植剂植入小鼠肌间隙2周后,可明显提高体内钙含量,且成骨趋势明显。结论 原核表达的rhOP-1具有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白-1 纯化 细胞增殖 碱性磷酸酶 生物学活性
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大肠杆菌表达的重组人PAI-1的纯化 被引量:2
12
作者 贺平 何诚 +2 位作者 张华 宋后燕 朱运松 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第6期729-734,共6页
纯化了工程细菌表达的可溶态和包含体形式的rhPAI-1,纯度均达98%,其rhPAI-1蛋白质得率分别为15%和19%,比活性分别为33500IU/mg和277000IU/mg。N端氨基酸序列分析显示,rhPAI-1... 纯化了工程细菌表达的可溶态和包含体形式的rhPAI-1,纯度均达98%,其rhPAI-1蛋白质得率分别为15%和19%,比活性分别为33500IU/mg和277000IU/mg。N端氨基酸序列分析显示,rhPAI-1N端15个氨基酸与天然PAI-1完全一致;包含体复性研究表明,包含体的复性与复性蛋白的浓度及复性液中助溶剂的浓度密切相关。纯化的rhPAI-1为分析PAI-1结构与功能及探讨其临床应用提供了材料。 展开更多
关键词 药物 I型 纤溶酶原激活物 抑制剂 重组 提纯
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TLR-4介导的鹅β-防御素1抗肠炎沙门菌感染的信号传导机制初探 被引量:1
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作者 张名岳 张可心 +5 位作者 辛胜男 韩宗玺 邵昱昊 刘晓丽 刘胜旺 马得莹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1938-1948,共11页
为研究鹅β-防御素1(AvBD1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理,利用RT-PCR方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅AvBD1基因片段,并将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-g... 为研究鹅β-防御素1(AvBD1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理,利用RT-PCR方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅AvBD1基因片段,并将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鹅AvBD1蛋白在原核高效表达(相对分子质量约31ku)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性。结果显示,鹅AvBD1基因cDNA片段大小为198bp,编码65个氨基酸残基。经相似性分析发现鹅AvBD1氨基酸序列与鸵鸟AvBD1氨基酸序列相似性最高,为77.1%,而且重组鹅AvBD1蛋白具有广谱的抗菌活性,对12种细菌(包括革兰阳性菌和革兰阴性菌)均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD1蛋白的抗菌活性,且该重组蛋白的溶血活性极低。试验表明,肠炎沙门菌确实会诱导鹅AvBD1基因在鹅骨髓组织中的表达,说明鹅AvBD1起到了抗肠炎沙门菌感染的作用,而这种作用有可能与TLR4介导的信号转导有关。 展开更多
关键词 鹅β-防御素1 重组蛋白 抗菌活性 TOLL样受体4 诱导表达
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人胰岛素样生长因子1的真核细胞表达及其鉴定 被引量:1
14
作者 徐志伟 娄亚欣 +2 位作者 李莹 邓鸿业 邓玉兰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期1-4,共4页
目的构建人胰岛素样生长因子 1(IGF- 1)的真核细胞表达质粒。方法用 PCR方法从人的肝细胞 c DNA文库中克隆出 IGF- 1c DNA,然后定向插入真核细胞表达载体 pc DNA3中 ,并用脂质体方法转染 COS7细胞。用 EL ISA法和人胚肺纤维母细胞以及 N... 目的构建人胰岛素样生长因子 1(IGF- 1)的真核细胞表达质粒。方法用 PCR方法从人的肝细胞 c DNA文库中克隆出 IGF- 1c DNA,然后定向插入真核细胞表达载体 pc DNA3中 ,并用脂质体方法转染 COS7细胞。用 EL ISA法和人胚肺纤维母细胞以及 NIH3T3纤维细胞增殖法分别测定转染细胞上清液中 IGF- 1的含量和生物活性。结果重组的真核细胞表达质粒 pc DNA 3- IGF- 1所含的 IGF- 1c DNA序列和插入方向均正确 ,其转染的 COS7细胞分泌较高浓度的 IGF- 1,并且具有明显促进纤维细胞增殖的能力。结论本实验所构建的重组真核细胞表达质粒 pc DNA3- IGF- 1能够高效表达有活性的 IGF- 1,对进一步研究 IGF- 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子1 基因重组 真核细胞表达 活性鉴定
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重组人干扰素λ1的表达、纯化及生物活性研究 被引量:1
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作者 张钫 郑丽舒 +4 位作者 袁武梅 王翔 薛鹏浩 麻粉莲 张骞 《生物技术通讯》 CAS 2010年第3期310-314,共5页
目的:利用大肠杆菌系统表达重组人Ⅲ型干扰素λ1(rhIFN-λ1),并进行纯化,以比较其与重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)生物学活性的差异。方法:密码子优化的rhIFN-λ1基因与pET-44a载体连接构建原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表... 目的:利用大肠杆菌系统表达重组人Ⅲ型干扰素λ1(rhIFN-λ1),并进行纯化,以比较其与重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)生物学活性的差异。方法:密码子优化的rhIFN-λ1基因与pET-44a载体连接构建原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物经系列层析纯化;采用细胞病变抑制法比较纯化的rhIFN-λ1与rhIFN-α2b、市售rhIFN-λ1的抗病毒活性;采用MTS法比较这些干扰素的抗肿瘤细胞增殖活性。结果:基因优化后的rhIFN-λ1在大肠杆菌中得以高效表达,用所建立的纯化工艺可制备得到纯度达95.7%的rhIFN-λ1;rhIFN-λ1的抗病毒比活性为3.2×105 U/mg,比市售rhIFN-λ1的比活性(1.1×105 U/mg)略高,抗肿瘤细胞增殖活性为rhIFN-α2b的1.7倍。结论:获得的rhIFN-λ1具有剂量依赖的抗病毒活性和抗增殖活性,其抗病毒活性比市售rhIFN-λ1略高,抗细胞增殖活性高于rhIFN-α2b,提示rhIFN-λ1有较大的应用前景。 展开更多
关键词 重组人干扰素λ1 表达 纯化 抗病毒活性 抗增殖活性
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重组人RAMP-1基因腺病毒载体的构建及鉴定 被引量:5
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作者 石蓓 宋付凯 +3 位作者 赵然尊 刘志江 龙仙萍 盛瑾 《遵义医学院学报》 2010年第4期330-332,共3页
目的构建携带人受体活性修饰蛋白-1(RAMP1)基因的腺病毒表达载体,为进一步深入研究RAMP1的功能奠定基础。方法通过基因工程技术将RAMP1基因克隆到穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中;I-Ceu I+I-Sce I双酶切穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1,将... 目的构建携带人受体活性修饰蛋白-1(RAMP1)基因的腺病毒表达载体,为进一步深入研究RAMP1的功能奠定基础。方法通过基因工程技术将RAMP1基因克隆到穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中;I-Ceu I+I-Sce I双酶切穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1,将回收的GFP-CMV-RAMP1片段,亚克隆至腺病毒骨架载体pAdxsi得到重组腺病毒质粒;重组腺病毒质粒酶切线性化后应用脂质体法转染293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-RAMP1并进行PCR鉴定及滴度测定。结果构建的重组穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1双酶切后,得到0.8kb(RAMP1)和5.1kb(pShuttle-GFP-CMV)两个片段;重组腺病毒质粒pAdxsi-GFP-CMV-RAMP1用XhoI酶切得到7个片段,而作为对照的空腺病毒质粒只得到6个片段;重组腺病毒Ad-RAMP1 PCR鉴定可见阳性扩增条带;病毒滴度检测达4.5×1011PFU/ml。结论成功构建了携带人RAMP1基因的重组腺病毒载体,为进一步研究RAMP1的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 EGFP RAMP1 腺病毒表达载体 基因重组
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重组人生长激素对THP1单核细胞中活化蛋白1转录因子的影响 被引量:1
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作者 王艳华 张国俊 +1 位作者 仝玉珠 宋向凤 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第5期337-339,共3页
目的研究重组人生长激素(rhGH)对THP1单核细胞中活化蛋白1(AP-1)转录因子的影响。方法应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ER... 目的研究重组人生长激素(rhGH)对THP1单核细胞中活化蛋白1(AP-1)转录因子的影响。方法应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ERK(p-ERK)的表达。结果与空白对照组比较,LPS组和rhGH组AP-1的转录活性升高(P<0.01);rhGH+脂多糖(LPS)组AP-1的转录活性较LPS组有明显下降(P<0.01)。同时,rhGH和LPS的预处理对ERK无显著影响,但均能促进p-ERK蛋白的表达,rhGH的预处理则能减弱LPS刺激p-ERK蛋白表达。结论 rhGH可通过双向调节ERK的磷酸化而影响THP-1单核细胞中AP-1的转录活性。 展开更多
关键词 重组人生长激素 THP1单核细胞 活化蛋白1 细胞外信号调控激酶
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地高辛标记的血小板T细胞活化抗原1cRNA探针的制备与鉴定 被引量:1
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作者 陈丽华 欧阳为明 +1 位作者 朱勇 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第2期113-115,共3页
目的制备用地高辛 (digoxigenin ,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针。方法构建重组质粒 pGEM 3ZF( +) PTA1 ,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后 ,用EcoRI消化得到线性DNA片段 ... 目的制备用地高辛 (digoxigenin ,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针。方法构建重组质粒 pGEM 3ZF( +) PTA1 ,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后 ,用EcoRI消化得到线性DNA片段 ,再用SP6RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链cRNA探针。结果经斑点杂交证实 ,该探针敏感性高、特异性强。结论地高辛标记PTA1cRNA探针的制备 ,为进一步研究PTA1mR NA在组织、细胞的表达和分布提供了有效的工具。 展开更多
关键词 血小板T细胞活化抗原1 地高辛标记 CRNA探针
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血清MCP-1、CyPA水平与急性脑梗死患者rt-PA静脉溶栓治疗预后的相关性 被引量:1
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作者 刘卫芳 宋宏伟 常秀红 《河南医学研究》 CAS 2021年第28期5292-5295,共4页
目的分析血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、亲环素A(CyPA)水平与急性脑梗死患者(ACI)重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗预后的关系。方法前瞻性选取2019年1月至2020年7月濮阳市人民医院收治的符合溶栓治疗适应证的74例ACI患者... 目的分析血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、亲环素A(CyPA)水平与急性脑梗死患者(ACI)重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗预后的关系。方法前瞻性选取2019年1月至2020年7月濮阳市人民医院收治的符合溶栓治疗适应证的74例ACI患者,均接受rt-PA静脉溶栓治疗。测定入院时血清MCP-1、CyPA水平。出院后随访3个月,采用改良Rankin量表(mRS)评估患者预后情况,并将其分为预后良好组(46例)和预后不良组(28例),比较两组一般资料、实验室指标,并重点分析血清MCP-1、CyPA水平与ACI患者rt-PA静脉溶栓治疗预后的关系。结果74例患者均接受3个月随访,28例患者预后不良,占37.84%。预后不良组入院时血清MCP-1、CyPA水平高于预后良好组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,入院时血清MCP-1、CyPA过表达与ACI患者rt-PA静脉溶栓治疗预后不良有关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,ACI患者入院时血清MCP-1、CyPA水平单独及联合预测rt-PA静脉溶栓治疗预后不良风险的AUC均>0.70,有一定预测价值,且以联合预测价值最佳,AUC>0.80。结论血清MCP-1、CyPA水平与ACI患者rt-PA静脉溶栓治疗预后有关。 展开更多
关键词 急性脑梗死 静脉溶栓 重组组织型纤溶酶原激活剂 单核细胞趋化蛋白1 亲环素A 预后
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冻干重组人三突变型HIF-1α腺病毒生物学效应考察
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作者 陶宇 王月刚 +3 位作者 魏旋 刘城 陈冬冬 吴平生 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期469-472,共4页
目的研究冻干对重组人三突变型HIF-1α腺病毒(Ad-HIF-1α-564/402/803)生物学效应的影响。方法将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率,... 目的研究冻干对重组人三突变型HIF-1α腺病毒(Ad-HIF-1α-564/402/803)生物学效应的影响。方法将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率,在适宜的条件下制成冻干剂。采用MTS试剂盒观察冻干前后Ad-HIF-1α-564/402/803对hMVECs增殖的影响。分别在冻干前、冻干后1 d、6月、12月四个时间点提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定重组人三突变型HIF-1α腺病毒基因;并在4个时间点以Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs,提取蛋白进行western blot检测HIF-1α蛋白的表达。结果 X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定。冻干前后重组人三突变型HIF-1α腺病毒对hMVECs增殖影响无显著差异(P>0.05)。经PCR及基因测序鉴定,在四个时间点,腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或突变,HIF-1α蛋白表达无差异(P>0.05)。结论冻干能够长期保持重组人三突变型HIF-1α腺病毒的高生物活性。 展开更多
关键词 HIF-1Α 重组腺病毒 冷冻干燥 生物学活性
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