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MuRF2、PPAR γ1和Ub重组质粒的构建及鉴定
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作者 范玉成 徐方晶 +2 位作者 王锐 何军 景丽 《宁夏医科大学学报》 2023年第3期275-281,共7页
目的 构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ亚型1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma isoform 1,PPAR γ1)、泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(ubiquitin ligase muscle ring finger protein 2,MuRF2)和泛素(ubiquitin,Ub)的重... 目的 构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ亚型1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma isoform 1,PPAR γ1)、泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(ubiquitin ligase muscle ring finger protein 2,MuRF2)和泛素(ubiquitin,Ub)的重组质粒并进行鉴定。方法 根据MuRF2、PPAR γ1和Ub的cDNA序列及GV146和GV417载体质粒上的多克隆位点设计目的基因克隆引物。XhoI/EcoRI内切酶分别双酶切PPAR γ1目的DNA与GV146载体;NheI/BamHI内切酶分别双酶切MuRF2和Ub目的 DNA与GV417载体。用连接酶连接双酶切后的目的 DNA和载体,导入大肠杆菌经筛选获得重组质粒。PCR鉴定重组克隆后进行DNA测序。转染HEK 293T细胞后,于荧光显微镜下观察转染效率;免疫共沉淀实验后用Western blot检测蛋白的表达及蛋白质相互作用。结果 以合成的PPAR γ1、Ub、MuRF2的引物分别对PPAR γ1、Ub和MuRF2的菌落进行PCR扩增,产物大小分别为943、451和1 154 bp,与预期结果一致。测序结果与目的基因序列进行比对分析,证实成功构建出PPAR γ1、Ub和MuRF2的重组质粒。在HEK 293T细胞中共转染His-MuRF2、HA-Ub、PPAR γ1重组质粒,荧光显微镜观察结果提示重组质粒成功转染。免疫共沉淀试验后用Western blot检测可见PPAR γ1、MuRF2和Ub蛋白的有效表达,且验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。结论成功构建PPAR γ1、MuRF2和Ub的重组质粒,且三种质粒在HEK 293T细胞中有效表达,验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体γ亚型1 泛素连接酶肌肉环指状蛋白2 泛素 重组质粒 泛素化修饰
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QUANTITATIVE ANALYSIS OF IL-2 AND IMMUNOMODULATING EFFECT OF IL-2 ON NK ACTIVITY OF HEPATITIS B PATIENTS
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作者 徐卷鹃 王耆煌 +1 位作者 王萌 陆志檬 《Medical Bulletin of Shanghai Jiaotong University》 CAS 1991年第1期77-83,共7页
Using<sup>125</sup>I-UDR labelled K562 cells as target cells, we assay the natural killer cell (NK) activity in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from 36 cases of various types of viral hepati... Using<sup>125</sup>I-UDR labelled K562 cells as target cells, we assay the natural killer cell (NK) activity in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from 36 cases of various types of viral hepatitis B (HB), together with 33 healthy adults as controls. At same time the NK activity was detected when PBMCs were pretreated with recombinant IL-2 (rIL-2) in 19 patients with various types of HB and 14 normal controls. We also determined the IL-2 activity produced by PBMCs in 26 HB patients and 14 normal controls. The following results were obtained: (1) The NK activity was markedly elevated in early acute hepatitis B (AH) (P【0.01); significantly decreased in chronic active hepatitis (CAH), chronic persistent hepatitis (CPH) and fulminant hepatitis (FH) (P【0.01), while that of convalescents with AH was within normal range 35.85±12.52%. (2) The early rise of NK activity in acute infection and the decline in convalescence and also the parallel change in SGPT level in 3 AH cases were observed. (3) The amount of IL-2 produced by PBMCs in HB patients was lower than that of normal controls (P【0.01 ). (4)There was no correlation between the change of IL-2 activity and NK activity in HB patients (r=0.15; P】O.05). (5) The NK activity of most normal subjects were enhanced when the PBMCs were pretreated with rIL-2 but the latter was still within the normal ranges. These results suggest that the mechanism of the effect of IL-2 in modulating the NK activity of HB patients is very complicated. IL-2 not only directly enhances the low NK activity of HB patients, but also depresses the high NK activity. This immunomodulating effect may be influenced by serum inhibitory facts as well as the amount and the combining ability of IL-2 receptor or on NK cell surface. 展开更多
关键词 recombinANT IL-2 (rIL-2) IMMUNOMODULATION HEPATITIS B NK activity
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重组人血小板型磷脂酶A_2在杀菌过程中与抗菌药的相互作用 被引量:6
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作者 李艳 梁宁生 +3 位作者 苏启表 陆益 杨帆 蒙子卿 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期413-416,共4页
目的 研究重组人血小板型磷脂酶 A2 (PL A2 )在杀菌过程中与常用抗菌药间相互作用关系 ,为临床用药提供依据 ,并探讨其杀菌机制。方法 将重组人血小板型 PL A2 和抗菌药分别单独以及联合作用于金黄色葡萄球菌 ,通过测定细菌菌落数来... 目的 研究重组人血小板型磷脂酶 A2 (PL A2 )在杀菌过程中与常用抗菌药间相互作用关系 ,为临床用药提供依据 ,并探讨其杀菌机制。方法 将重组人血小板型 PL A2 和抗菌药分别单独以及联合作用于金黄色葡萄球菌 ,通过测定细菌菌落数来评价杀菌效果。结果 青霉素、头孢拉定、磷霉素、万古霉素增强血小板型 PL A2 杀菌活性 ;红霉素减弱血小板型 PL A2 杀菌活性 ;氧氟沙星对血小板型 PL A2 杀菌作用无影响。结论 血小板型 PL A2与破坏细胞壁的杀菌类药物有协同作用 ,与抑菌类药物合用受到拮抗 ;细菌细胞壁的结构及其生长状态是影响血小板型 PL A2 展开更多
关键词 重组人血小板型磷脂酶A2 抗菌药 杀菌活性 相互作用
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重组鸡β-防御素2蛋白的表达与生物学活性鉴定 被引量:2
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作者 马得莹 张婷婷 +5 位作者 徐杨 高梦莹 王秋玲 徐倩倩 韩宗玺 刘胜旺 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期56-60,108,共6页
为探讨鸡β-防御素2(Av BD2)的生物学特性,研究将Av BD2基因克隆到原核表达载体p Pro EX HTa的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD2,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,用IPTG对其菌液进行诱导表达。Tri... 为探讨鸡β-防御素2(Av BD2)的生物学特性,研究将Av BD2基因克隆到原核表达载体p Pro EX HTa的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD2,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,用IPTG对其菌液进行诱导表达。Tricine-SDS-PAGE电泳结果表明,His-Av BD2重组蛋白分子质量约12 ku,与预期一致。将该重组蛋白纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗肠炎沙门氏菌、四联球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌等抑菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响及其溶血活性。结果显示,Av BD2重组蛋白对所测定的4株细菌有显著抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性。该重组蛋白溶血活性极低。 展开更多
关键词 AvBD2 重组蛋白 抗菌活性
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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究 被引量:4
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作者 杨晓璐 闫若潜 +4 位作者 李勤楠 赵雪丽 谢彩华 刘梅芬 张书阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3153-3159,共7页
为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应... 为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素-2 重组融合蛋白 体外活性
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重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性 被引量:2
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作者 田海山 唐禄 +3 位作者 王晓杰 王艳芳 官丽莉 李校堃 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1150-1156,共7页
从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过I... 从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白占菌体总蛋白的30.0%以上;经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的rhKGF-2纯度高于99.0%.建立了利用转受体FGFR2-Ⅲb的BaF3细胞株进行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法,活性测定结果呈典型的S型曲线,并在一定范围内具有剂量依赖性. 展开更多
关键词 重组角质细胞生长因子-2(rhKGF.2) 高密度培养 柱层析 转受体FGFR2-Ⅲb BaF3细胞株 生物活性
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利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-2(hIGF-2) 被引量:1
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作者 段宇 汪承亚 +3 位作者 赵红 张志芳 陈家伟 John S Sussenbach 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期156-160,共5页
目的 :研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 -2 (rh IGF-2 )。方法 :将 14 k Dh IGF -2前体 c DNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (Bm NPV )转移载体 p Bak PAK8中 ,经与野生型病毒 DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重... 目的 :研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 -2 (rh IGF-2 )。方法 :将 14 k Dh IGF -2前体 c DNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (Bm NPV )转移载体 p Bak PAK8中 ,经与野生型病毒 DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重组的方式获得重组病毒 Bm NPV/ IGF-2。以 Bm NPV/ IGF-2感染 5龄家蚕幼虫 ,分别在感染后 2 4,48,72 ,96,10 8,12 0 h提取家蚕血淋巴液 ,以 ELISA法测定不同时象家蚕血中 IGF-2浓度 ,采用 Western-blot分析鉴定 IGF -2免疫学活性 ,MTT法观察其对 NIH3 T3细胞增殖的影响。结果 :ELISA测定显示 ,Bm NPV/ IGF-2感染家蚕幼虫 96h后 IGF-2表达率最高 ,每毫升血淋巴中约含 IGF-2 14 μg,Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7.0 k D成熟 h IGF-2 ,并对 NIH3 T3细胞具有良好促增殖效应 ,其促细胞生长能力明显优于来源于 E.coli的 IGF-2标准品。结论 :本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rh 展开更多
关键词 人胰岛素样在子-2 家蚕 核型多角体病毒 基因表达 免疫学活性 生物学活性
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重组人骨形态发生蛋白2缓释体对铬磨损颗粒诱导的溶骨效应的影响 被引量:2
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作者 李干 李奇 +2 位作者 林荔军 段鑫 张西旗 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期391-395,共5页
目的建立大鼠植骨气囊模型,观察在不同浓度重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)缓释体干预下气囊内组织的破骨细胞分化因子(RANKL)、骨破坏素(OPG)表达情况。方法在大鼠背部注入空气形成气囊,取同源大鼠的颅骨植入气囊内。将已制成的植骨气... 目的建立大鼠植骨气囊模型,观察在不同浓度重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)缓释体干预下气囊内组织的破骨细胞分化因子(RANKL)、骨破坏素(OPG)表达情况。方法在大鼠背部注入空气形成气囊,取同源大鼠的颅骨植入气囊内。将已制成的植骨气囊模型大鼠分成5组:空白组、铬颗粒组、50μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组、100μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组和200μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组。各组分别用药处理,2周后取出囊腔内组织进行RANKL、OPG的Wester-blot、Rt-PCR检测,并对囊腔内骨片行TRAP染色,用计算机图像分析技术测定骨片破骨细胞染色面积,进行药效评价。结果 RANKL、OPG在各组囊腔组织中均有表达。骨片破骨细胞染色面积、RANKL、OPG的Wester-blot和RT-PCR结果及RANKL/OPG值,在铬颗粒组中明显高于其他4组(P<0.05);在3个rhBMP-2缓释体干预组内,随着rhBMP-2缓释体浓度增高呈递减趋势,组间差异均有统计学意义(P<0.05);在空白组和200μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组间未见明显差异(P>0.05)。结论大鼠植骨气囊模型成功的模拟了人工关节无菌性松动的生物学和组织学特征。铬颗粒可以引起RANKL/OPG值升高,促进溶骨;rhBMP-2缓释体通过降低RANKL/OPG值,从而促进成骨、抑制骨吸收效益。 展开更多
关键词 大鼠植骨气囊模型 铬颗粒 rhBMP-2缓释体 RANKL OPG RANKL/OPG
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低浓度肝素对重组人血小板型磷脂酶A_2杀菌活性的抑制 被引量:2
9
作者 梁宁生 李艳 +2 位作者 陆益 杨帆 蒙子卿 《广西医科大学学报》 CAS 2004年第1期15-17,共3页
目的 :研究肝素对重组人血小板型磷脂酶 A2 (PL A2 )杀菌活性的影响 ,探讨血小板型 PL A2 电荷性质在其杀菌机制中的作用。方法 :将金黄色葡萄球菌与重组人血小板型 PL A2 共同孵育 ,试验组加入肝素 ,通过测定细菌菌落数来评价杀菌效果... 目的 :研究肝素对重组人血小板型磷脂酶 A2 (PL A2 )杀菌活性的影响 ,探讨血小板型 PL A2 电荷性质在其杀菌机制中的作用。方法 :将金黄色葡萄球菌与重组人血小板型 PL A2 共同孵育 ,试验组加入肝素 ,通过测定细菌菌落数来评价杀菌效果。结果 :低浓度肝素对重组人血小板型 PL A2 杀菌功能有明显抑制作用 ,仅 0 .0 30 0 U / ml的肝素其杀菌抑制率达 10 0 %。结论 :1血小板型 PL A2 的正电荷性在其杀菌作用中是关键因素 ;2肝素是血小板型 PL A2 一种有效的抑制剂。 展开更多
关键词 低浓度肝素 重组人血小板型磷脂酶A2 杀菌活性 金黄色葡萄球菌
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重组钩体基因疫苗免疫豚鼠脾细胞LTT,IL-2,IL-6的活性测定 被引量:3
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作者 江南 戴保民 李胜富 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期17-18,111,共3页
目的 为从多方面证实赖型钩体重组基因疫苗的免疫活性。方法 将赖型钩体重组基因多肽疫苗 (分子量6 8k Da)多点皮下注射免疫豚鼠。(以质粒载体 p T7- 7为阴性对照 ,全钩死疫苗 WCV为阳性对照 )取其脾细胞 ,用 3H- Td R法和MTT比色法... 目的 为从多方面证实赖型钩体重组基因疫苗的免疫活性。方法 将赖型钩体重组基因多肽疫苗 (分子量6 8k Da)多点皮下注射免疫豚鼠。(以质粒载体 p T7- 7为阴性对照 ,全钩死疫苗 WCV为阳性对照 )取其脾细胞 ,用 3H- Td R法和MTT比色法分别测定特异性淋巴细胞转化试验 (L TT)的相对转化指数 (RPI)及 IL - 2 ,IL - 6活性。结果  1)重组基因疫苗免疫组特异性 L TT的 RPI为 2 .19± 0 .18明显高于 p T7- 7阴性对照 1.42± 0 .2 7(P<0 .0 0 5 ) ,与阳性对照 WCV无统计学差异 (P>0 .0 5 )。2 )基因疫苗免疫组 IL - 2 ,IL - 6活性分别为 34.8± 3.11,94.6± 6 .0 2测定值明显高于 p T7- 7阴性对照 2 0 .4± 3.0 5 ,6 1±6 .2 8(P<0 .0 0 5 ) ,与 WCV阳性对照无统计学差异 (P>0 .0 5 )。结论  1)钩体基因重组疫苗能使免疫豚鼠体内 Th1 、Th2 活化增强 ,有胸腺依赖性抗原性质 (TDAg) ,可激起体内强有力 T- B细胞协同效应的特异性体液免疫反应 ,确有增强免疫活性作用 ,是良好的免疫原。2 )重组钩体基因疫苗与阳性对照 WCV各实验值无统计学差异 ,提示二者免疫活动可能相当 ,但重组基因疫苗有毒副作用小的优势 。 展开更多
关键词 重组钩体基因疫苗 免疫活性 LTT IL-2 IL-6 豚鼠
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重组人骨形态发生蛋白-2生物学活性测定新方法的建立 被引量:3
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作者 丁红梅 刘农乐 +3 位作者 王芳 李少华 邵宁生 王会信 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期101-102,共2页
目的:采用小鼠异位成骨技术及甲基麝香草酚蓝比色法检测重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)的生物学活性。方法:将rhBMP-2埋入小鼠肌间隙内,14d后取出新生组织,采用血清钙试剂盒检测其钙含量。结果:随着给药组剂量递增,相应地钙含量也增加... 目的:采用小鼠异位成骨技术及甲基麝香草酚蓝比色法检测重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)的生物学活性。方法:将rhBMP-2埋入小鼠肌间隙内,14d后取出新生组织,采用血清钙试剂盒检测其钙含量。结果:随着给药组剂量递增,相应地钙含量也增加,二者具有较强的量效关系。结论:此方法为本实验室独创,较传统的血清碱性磷酸酶方法更为方便、快捷,是一种能够定量检测rhBMP-2活性的新方法。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-2 活性测定 钙含量
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新型重组免疫抑制融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL的分离纯化 被引量:1
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作者 关海容 孙玉英 +6 位作者 袁志宏 张惠丽 梁飞 刘楠 郭斯启 习彩霞 奚永志 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期123-127,共5页
为了建立高效快捷能分离大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的下游纯化路线,比较了不同组合的纯化策略和条件,包括反相层析、金属螯合层析、阴离子交换层析、蓝染料亲和层析和凝胶过滤层析等,并采用MTT法检测该融合蛋白的靶向杀伤活性。结... 为了建立高效快捷能分离大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的下游纯化路线,比较了不同组合的纯化策略和条件,包括反相层析、金属螯合层析、阴离子交换层析、蓝染料亲和层析和凝胶过滤层析等,并采用MTT法检测该融合蛋白的靶向杀伤活性。结果表明,在反相层析分离中疏水相分别采用了常规的甲醇和乙腈,结果为所分离的该重组融合蛋白均发生了变性,从色谱柱中分离出来就生成了絮状沉淀。在蓝染料亲和层析一步分离中,由于全菌体蛋白中与亲和树脂发生非特异结合的成分较多,极难区分目的蛋白和杂蛋白。但是,PRSETA-B7-2-PE40KDEL表达载体上带有翻译增强序列T7-g10,可在表达目的蛋白N端融合6个组氨酸,这十分有利于通过Ni-NTA金属鏊和层析法快速高纯度地纯化表达产物。根据这一特性,经反复筛选实验设计最终确定了金属螯合层析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析三步法的纯化路线,用于纯化分离B7-2-PE40KDEL融合蛋白。所得的目的蛋白的纯度可达95%以上,总回收率为8%。Western-blot实验显示,所得蛋白可与B7-2及PEA抗体特异性结合;MTT生物活性测定表明,该融合蛋白对表达CD28受体的人T细胞系Jurkat产生特异性杀伤作用,而对不表达CD28的淋巴细胞系Raji无任何杀伤作用。结论:建立了高效快速纯化大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的技术路线,所纯化的重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白能特异性靶向杀伤表达CD28受体的人T细胞。 展开更多
关键词 重组外毒素融合蛋白 B7-2-PE40KDEL 蛋白纯化 靶向杀伤 生物活性
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基因工程人白细胞介素-2的生物功能研究
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作者 刘新垣 虞建良 +15 位作者 郑宏大 陈寅 沈菊芳 冯作化 陈兆聪 尤丽芳 孙邦华 周瑶玺 姚堃 常经丽 臧人杰 唐思伦 张叔人 张友会 姜廷芳 沈优君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期18-23,共6页
重组白细胞介素-2(rIL-2),能维持T-淋巴细胞及CTLL-2细胞株(IL-2依赖)的增殖达一个月之久,细胞总数增加了近千倍。这种作用能被rIL-2专一的单克隆抗体破坏,显示rIL-2的专一性;rIL-2能增加天然杀伤细胞(NK)的活动达46—96%,但其剂量太高... 重组白细胞介素-2(rIL-2),能维持T-淋巴细胞及CTLL-2细胞株(IL-2依赖)的增殖达一个月之久,细胞总数增加了近千倍。这种作用能被rIL-2专一的单克隆抗体破坏,显示rIL-2的专一性;rIL-2能增加天然杀伤细胞(NK)的活动达46—96%,但其剂量太高时反而起抑制作用;它能诱异淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine Activated Killer,LAK)的生成,它还能杀伤转移性人肺癌细胞及抗NK的HL-60癌细胞株,其杀伤效率达37.96—54.84%。这说明我们获得的rIL-2在上述生物功能方面与天然IL-2相似。 展开更多
关键词 重组IL-2 基因工程 生物功能
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新型重组融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL部分表征的鉴定
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作者 关海容 孙玉英 +6 位作者 袁志宏 张惠丽 梁飞 刘楠 郭斯启 习彩霞 奚永志 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期157-160,166,共5页
目的:对构建的新型重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分表征进行分析鉴定。方法:采用SDS-PAGE相对分子量、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱、蛋白印迹、全波长扫描和MTT法分别测定该融合蛋白相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀... 目的:对构建的新型重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分表征进行分析鉴定。方法:采用SDS-PAGE相对分子量、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱、蛋白印迹、全波长扫描和MTT法分别测定该融合蛋白相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性。结果:B7-2-PE40KDEL经12%SDS-PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算,其相对分子量为72628,与理论预测值69561相比误差在5%之内;全波长扫描分析显示该目的蛋白分别在225nm和276nm处各有一吸收峰;MALTI-TOF-MS质谱测定共获得15个与理论预测值相符的肽段,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明,在分子量为60000~80000的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白,证明本融合蛋白为全新蛋白,与我们预测的目的蛋白相符;Westernblot实验显示B7-2-PE40KDEL能与人B7-2及PEA抗体特异性结合;MTT杀伤活性测定表明,该融合蛋白对表达CD28+的人T淋巴瘤细胞系Jurkat产生特异性杀伤,而对不表达的CD28-淋巴细胞系Raji无任何杀伤。结论:重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白为一全新的具有靶向B7:CD28细胞杀伤活性的蛋白质。 展开更多
关键词 重组外毒素融合蛋白 B7-2-PE40KDEL 肽谱 抗原特异性 生物学活性
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乙型肝炎表面抗原基因重组2型腺相关病毒的免疫原性研究
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作者 欧程山 胡贵方 +2 位作者 陈清 吴小兵 俞守义 《中国热带医学》 CAS 2005年第5期932-934,共3页
目的观察含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-HBsAg)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的重组病毒颗粒单次注射Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBsAg基因cD-NA:ELISA检测肝组织中HBsAg的表达;RIA... 目的观察含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-HBsAg)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的重组病毒颗粒单次注射Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBsAg基因cD-NA:ELISA检测肝组织中HBsAg的表达;RIA法检测血清中表面抗体(抗一HBs)滴度;51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果外源性HBsAg基因己整合到肝细胞染色体DNA并有效地转录和翻译,表达水平最高可达33.8pg/(mglivertissue),rAAV-HBsAg免疫小鼠后可以诱导机体产生表面抗体并激发特异性CTL。结论外源性HBsAg基因可以转移到小鼠肝细胞并稳定表达;rAAV-2-HBsAg免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。提示基于rAAV-2载体的乙型肝炎(HBV)疫苗,对于防止HBV感染,尤其是作为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗可能只有潜在的应用价值,值得做进一步的系统研究。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 基因表达 2型重组腺相关病毒 细胞毒性T淋巴细胞活性
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含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒的构建和免疫原性 被引量:3
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作者 孙海峰 俞守义 +1 位作者 欧程山 胡贵方 《热带医学杂志》 CAS 2007年第3期222-225,共4页
目的构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性。方法采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因,将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒(AAV-2)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-Ag85A;用脂质体转染的方法将... 目的构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性。方法采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因,将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒(AAV-2)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-Ag85A;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到能表达目的基因混合细胞系BHK-Ag85A;用具有rAAV-2包装功能的辅助病毒感染BHK-Ag85A,纯化后得到rAAV-2-Ag85A;Western blotting检测重组病毒Ag85A基因在BHK-21细胞中的表达;rAAV-2-Ag85A免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测血清中抗-Ag85A抗体,^(51)Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果PCR扩增的Ag85A基因序列与GenBank公布的序列一致,纯化后得到的rAAV-2-Ag85A滴度为1×10^(12)virus particles/ml;Western blotting检测到rAAV-2-Ag85A在BHK-21细胞中能够表达出一相对分子质量为32000的多肽;rAAV-2-Ag85A免疫的Balb/c小鼠,抗-Ag85A抗体的滴度可达1∶1024,同时还可激发Ag85A特异性的CTL产生。结论rAAV-2-Ag85A构建成功,rAAV-2-Ag85A免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。rAAV-2-Ag85A对于防止结核分枝杆菌感染,尤其是作为结核病的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 AG85A 重组腺相关病毒 2 基因表达 细胞毒性T淋巴细胞活性
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重组人骨形态发生蛋白2促进髁状突囊内骨折山羊骨髓间充质干细胞的成骨分化 被引量:3
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作者 胡娟 姚志涛 +2 位作者 王珊 胡阿特·哈德尔 买买提吐逊·吐尔地 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第29期4610-4616,共7页
背景:国内外学者均认为髁状突囊内骨折后形成颞下颌关节强直的原因主要是大量成骨的过程。评估不同类型髁状突囊内骨折后骨髓间充质干细胞的成骨潜能,为创伤性颞下颌关节强直提供细胞生物学及分子学证据。目的:探讨重组人骨形态发生蛋白... 背景:国内外学者均认为髁状突囊内骨折后形成颞下颌关节强直的原因主要是大量成骨的过程。评估不同类型髁状突囊内骨折后骨髓间充质干细胞的成骨潜能,为创伤性颞下颌关节强直提供细胞生物学及分子学证据。目的:探讨重组人骨形态发生蛋白2对不同类型髁状突囊内骨折山羊骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:16只健康山羊双侧关节随机分为4组,8只山羊为左侧A型髁突囊内骨折组(A组)+右侧B型髁突囊内骨折组(B组),另外8只为左侧C型髁突囊内骨折组(C组)+右侧对照组(D组),分别在术后1,2,3,6个月各时间点A、B组处死2只,C、D组处死2只,即每个时间点共处死4只,分离、提取第3代骨髓间充质干细胞,根据是否进行重组人骨形态发生蛋白2诱导分为诱导组和非诱导组,按照试剂盒说明检测培养7,10 d时的碱性磷酸酶活性及骨钙素含量,诱导培养1周后进行碱性磷酸酶染色。结果与结论:与非诱导组比较,4组骨髓间充质干细胞使用重组人骨形态发生蛋白2诱导后,碱性磷酸酶活性及骨钙素含量明显升高(P<0.05);B组诱导后碱性磷酸酶活性及骨钙素含量较A、C、D组明显升高(P<0.05)。结果表明,体外分离培养的山羊骨髓间充质干细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导作用下表现出明显的成骨活性,且B型髁突囊内骨折后的骨髓间充质干细胞成骨活性明显高于A型、C型髁突囊内骨折。 展开更多
关键词 髁状突囊内骨折 骨髓间充质干细胞 重组人骨形态发生蛋白2 碱性磷酸酶活性 骨钙素 成骨分化 创伤性颞下颌关节强直 新疆维吾尔自治区自然科学基金
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吸血蝙蝠纤溶酶原激活剂α2的原核表达及抗体制备
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作者 魏昭荣 李刚强 +1 位作者 李校堃 刘德虎 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期294-298,共5页
利用人工合成的吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂α2(DSPAa2)基因,研究了其在细菌中的表达及表达产物的纯化和抗体制备。首先人工合成 DSPAa2基因,并构建原核表达载体转化大肠杆菌。经 IPTG 诱导后,DSPAa2在细菌中得到了高效表达。SDS-PAGE ... 利用人工合成的吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂α2(DSPAa2)基因,研究了其在细菌中的表达及表达产物的纯化和抗体制备。首先人工合成 DSPAa2基因,并构建原核表达载体转化大肠杆菌。经 IPTG 诱导后,DSPAa2在细菌中得到了高效表达。SDS-PAGE 结果显示,以包涵体的形式存在的 DSPAce2重组蛋白占到细菌总蛋白的32%。包涵体裂解后经亲合层析柱纯化,100mL 菌液中能得到2.2mg 纯的重组蛋白。用纯化的 DSPAa2分别免疫大鼠和小鼠,经 ELISA 检测,获得了效价达到1:12800以上的高质量的抗血清。West-ern blot 结果显示抗体能与 DSPAα2特异性地结合。 展开更多
关键词 吸血蝙蝠 纤溶酶原激活剂α2 重组蛋白 基因表达 免疫应答 急性心脑血栓 溶栓类蛋白药物
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rIL-2/LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤 被引量:3
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作者 张月桂 刘军 +5 位作者 唐亚莉 李殿俊 龙庆山 薛英威 王贵奇 赵家宏 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期12-13,共2页
胎儿来源的LAK细胞/rIL-2对5例失去手术、化疗、放疗机会的晚期恶性肿瘤病人进行了过继免疫治疗。结果都取得了一定的疗效,黑色素瘤病人肺转移结节基本消失,局部瘤细胞全部坏死,组织细胞正常;淋巴瘤病人转移灶消退59%... 胎儿来源的LAK细胞/rIL-2对5例失去手术、化疗、放疗机会的晚期恶性肿瘤病人进行了过继免疫治疗。结果都取得了一定的疗效,黑色素瘤病人肺转移结节基本消失,局部瘤细胞全部坏死,组织细胞正常;淋巴瘤病人转移灶消退59%;小肠平滑肌肉瘤病人在没进行此疗法之前2年半复发、手术三次。第三次手术后用此疗法治疗一个疗程,三年后第一次复发。为晚期恶性肿瘤病人延长了生命,提高了生存质量争得了再次治疗的机会。 展开更多
关键词 基因重组 白细胞介素2 免疫疗法 LAK细胞
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HBV外膜蛋白2型重组腺相关病毒免疫原性
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作者 郝晓萌 吴小兵 +1 位作者 胡贵方 俞守义 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1357-1358,共2页
目的观察乙型肝炎病毒(HBV)外膜大蛋白(LP)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-LP)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的rAAV-2-LP单次肌肉注射接种Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBV外膜大蛋白基因cDNA;RIA法检测血清中表... 目的观察乙型肝炎病毒(HBV)外膜大蛋白(LP)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-LP)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的rAAV-2-LP单次肌肉注射接种Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBV外膜大蛋白基因cDNA;RIA法检测血清中表面抗体(抗-HBs)滴度;51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果HBV外膜大蛋白基因已整合到肝细胞染色体DNA,rAAV-LP接种小鼠后第20 d,小鼠体内可出现针对HBV外膜大蛋白特异性CTL,第30 d,血清中可检测到表面抗体。结论rAAV可以介导HBV外膜大蛋白基因转移到小鼠肝细胞;rAAV-2-LP免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。基于rAAV-2载体的HBV疫苗,对于防止HBV感染,尤其是作为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒(HBV) 外膜大蛋白 2型重组腺相关病毒(rAAV-2-LP) 基因表达 细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)
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