中国鲤几个代表种群基因组DNA遗传多样性分析

中国鲤具有悠久的养殖历史和重要的经济价值,无论是天然种群还是养殖品种,年产量远超过其它鱼类。近几十年来,养殖新品种的开发获得成功,大大提高了产量,改善了品质。但是由于盲目的开发利用,许多重要的鲤养殖种类的种质资源遭到破坏。"江西三红"(Cyprinuscarpiovar.xingguonensis、Cyprinuscarpiovar.wuyuanensis、Cyprinuscarpiovar.wananensis)、黄河鲤(Cyprinusycarpiovar.)和黑龙江野鲤(Cyprinuscarpiohaematopterus)是中国鲤几个具有代表性的养殖品种和野生种,在我国鲤鱼遗传育种研究中均占有非常重要的地位。应用第二代分子标记,即微卫星标记(microsatellite)84个,对以上5个具有代表性的中国鲤进行了全基因组DNA检测。结果表明,当退火温度提高至60℃时,有43对标记引物扩增出清晰的条带,其中有14对在群体间呈现多态性,扩增等位基因位点为2～4个。微卫星座位MFW4,MFW19,MFW23和MFW26在群体内显示了高度的多态性,扩增等位基因位点为7～13个。统计实验结果发现,"江西三红"3个品种间遗传差异较小,兴国红鲤和荷包红鲤的亲缘关系较近(0.93);属于同一亚种不同地理种群的黄河鲤和黑龙江野鲤具有较高的遗传相似性(0.89)。另外,根据微卫星多态性分析结果,探讨了这5种鲤的遗传多样性。

红鲫(♀)×湘江野鲤(♂)F_2和F_3的染色体研究

采用血细胞培养制片法和肾脏细胞直接制片法对红鲫 (♀ )×湘江野鲤 (♂ )杂交种F2 和F3 代的染色体数目和核型进行了比较分析 ,得出F2 代染色体数目为 10 0条 ,染色体组型为 :2 2m +34sm +2 2st +2 2t ,NF =156;F3代染色体数目为 4n =2 0 0 ,染色体组型为 :4 4m +68sm +44st +44t ,NF =312。为证明红鲫×湘江野鲤杂交后代由异源二倍体转变为异源四倍体发生于F2 与F3代之间提供了直接证据。

不同蛋白水平的螺旋藻饲料对锦鲤体色、生长及免疫的影响

试验以初始体重(5.85±0.19)g的红白锦鲤幼鱼为试验对象,研究螺旋藻添加量为12%时,饲料不同蛋白水平(25.65%、30.43%、35.56%、40.42%、45.90%)对锦鲤体色、生长及免疫的影响。每组设3个平行,每个平行饲养20尾,表观饱食投喂,试验期为60 d。结果表明,饲料蛋白水平为45.90%时,试验鱼体表红质a*值最高,与DL2、DL3组间无显著差异;蛋白水平为30.43%时,类胡萝卜素含量显著升高(P<0.05),最大值出现在DL5组(蛋白水平为45.90%),显著高于其他试验组(P<0.05);蛋白水平为35.56%时,试验鱼的BWG、PER显著高于DL2、DL5组(P<0.05);蛋白水平为45.90%时,试验鱼血清ALT显著高于DL1组(P<0.05),GLU浓度显著低于DL3组(P<0.05),肝胰脏CAT、SOD活力最高。研究结果说明,螺旋藻添加量为12%时,使锦鲤生长、着色达到最佳效果的适宜饲料蛋白水平为35.56%。

虾青素对锦鲤血液及抗氧化指标的影响

以初始体重为（7.31±0.12）g的红白锦鲤幼鱼为试验对象,研究虾青素不同添加量（0、100、400、700、1 000、1 300、1 600 mg.kg-1）对锦鲤血液和免疫指标的影响。每组设3个平行,每个平行饲养10尾鱼,表观饱食投喂60 d。结果表明,在饲料中添加700-1 600 mg.kg-1（X3-X6组）虾青素,可显著提高锦鲤血红蛋白含量和红细胞数,在此范围对谷丙转氨酶（ALT）活力无显著影响,添加700 mg.kg-1（X3组）虾青素,可以显著提高锦鲤血糖（GLU）含量,同时,碱性磷酸酶（AKP）活性显著高于对照组。超氧化物歧化酶（SOD）活力在虾青素添加量为400 mg.kg-（1X2组）时,显著低于对照组和除100 mg.kg-（1X1组）外的其他试验组（P〈0.05）。添加虾青素没有对锦鲤乳酸脱氢酶（LDH）和过氧化氢酶（CAT）产生影响。上述研究说明,在饲料中添加虾青素可提高锦鲤免疫功能,综合经济效益角度建议,饲料中虾青素的适宜添加量为700 mg.kg-1。

“全红”瓯江彩鲤不同世代间的遗传结构及遗传分化初步分析

利用ISSR技术对"全红"瓯江彩鲤(Cyprinus car pio var. color)4个世代群体的遗传结构及其分化进行了分析。筛选的15个ISSR引物从4个世代群体中分别扩增到120、118、101和110条扩增谱带,全部扩增片段长度在200—2500bp之间。根据扩增结果,利用POPGENE version 1.31进行分析,结果表明:4个群体的多态位点比例(P)为51.49%—67.80%,Shannon信息指数(Ho)为0.2176—0.2745之间,并随着世代的增加,选育群体的遗传多样性呈现下降趋势。有70%的遗传变异来自于群体内;结合遗传分化指数Gst、UPGMA聚类分析,证实"全红"瓯江彩鲤4个世代间存在一定程度的遗传分化,即任意两个群体间的遗传分化达到较大的水平(Gst均为0.1588—0.2766)。

松浦红镜鲤保种群体的遗传结构

应用35对多态性较高的微卫星标记对鲤新品种——松浦红镜鲤（Cyprinuscarpiovar.songpuredmirrorcarpl的保种群体进行了遗传结构研究。结果显示，在91尾松浦红镜鲤个体中，共检测到140个等位基因，每个位点等位基因数3-6个，平均有效等位基因数为3．0426；期望杂合度范围为0．3750-0．8274，均值为0．6493；多态信息含量范围为0．396-0．912，均值为O．5869；哈迪-温伯格平衡检验结果表明群体处于不平衡状态；平均固定系数为-0．026，说明该群体存在杂合子过剩现象；瓶颈效应分析表明，群体已经历了瓶颈效应；根据连锁不平衡方法计算有效群体大小为31．2。该研究表明松浦红镜鲤遗传多样性较为丰富，为了在下一步保种工作中避免或降低瓶颈效应，应加强保护工作，从而保持其丰富遗传多样性和优良的经济性状。

盐藻、辣椒粉及温度对红白锦鲤生长及着色的影响

以体重(22.76±3.59)g的红白锦鲤为试验对象,采用正交设计方法研究盐藻、辣椒粉和温度对红白锦鲤生长和着色的影响。养殖周期为70 d,试验分别在第15、30、40、50、60、70 d采集鳞片、皮肤、头、鳍条进行色素吸光度测定。结果表明:投喂40 d后,影响红白锦鲤生长和各部位总类胡萝卜素含量强弱顺序为盐藻>辣椒粉>温度,即试验最佳条件为添加盐藻0.4 g/kg、辣椒粉20 g/kg或30 g/kg,温度27℃,投喂时间为40 d。50 d后,色素持续性较好。

异育淇鲫及其双亲同工酶的比较研究

用4.5％聚丙烯酰胺凝胶平板电泳研究了异育淇鲫及其母本淇鲫和父本兴国红鲤的肌可溶性蛋白以及肾、肝、眼、背白肌和心等五种组织的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和酯酶(EST)。结果发现:异育淇鲫的肌可溶性蛋白以及同工酶的电泳图谱与母本淇鲫相同而与父本兴国红鲤显著不同,因而认为异育淇鲫是淇鲫雌核发育的产物,父本基因对子代基本无影响。在此基础上,本文对异源精子在雌核发育中所起的生物学作用进行了初步探讨。

我国鲤鱼遗传改良研究概况

我国鲤鱼遗传资源丰富，并且重视鲤鱼的开发利用和遗传改良。常用的鲤鱼遗传改良技术包括选择育种、杂交育种、单倍体和多倍体育种、引种驯化等，近些年来，细胞核移植、细胞融合、基因工程等生物技术发展很快。遗传改良成果的推广应用，提高了养殖产量和经济效益。

冷休克对兴国红鲤胚胎发育的影响

本文采用冷休克技术对兴国红鲤(Cyprinus carpio var singuonensis)受精卵进行不同时间的处理,详细比较了正常发育和冷休克处理后的胚胎发育过程以及主要的形态特征。结果表明,对授精后3～5min的受精卵进行冷休克(0～2℃)处理10～15min,其出膜时间比正常胚胎的出膜约提前7h,为最适处理时间。正常胚胎发育与经处理的胚胎发育在主要形态结构上无明显差异。

红鲫与湘江野鲤杂交的受精细胞学研究

红鲫成熟卵直径680—720μm;卵膜孔为精子入卵的唯一通道,包括前庭和精孔管两部分;精孔管内径约5μm。湘江野鲤精子头部直径约2.5μm。在通常情况下,红鲫卵为单精受精。尽管红鲫与湘江野鲤不同属,但杂交仍具有正常的受精细胞学程序。红鲫卵子处于第二次成熟分裂中期接受湘江野鲤精子入卵,精子入卵5min后,出现明显的精子星光;15min后,雄性原核及雌性原核形成;25min后,雌、雄性原核融合;30min后、开始卵裂,发现1个受精卵切片上有4个即将融合的原核,这可能是由于双精受精所致。

雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤卵母细胞成熟的细胞学比较研究

对雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤的卵母细胞成熟过程,进行了详细的细胞学比较研究。在银鲫卵母细胞成熟过程中,绝大部分卵母细胞的核物质,在胚泡破裂(GVBD)后的第一次成熟分裂时期,出现明显的不同于红鲤卵母细胞核的行为,其染色体逐渐清晰地分为三群,这三群染色体的发育既彼此独立又相互联系,最终形成一首尾相接的三极纺锤体。随后,三极纺锤体扭转、重叠、合并成为一个正常的中期纺锤体。但极少数银鲫卵母细胞也出现了类似于红鲤卵母细胞的成熟单星光,并进而发育成两极纺锤体,形态类似红鲤第一次成熟分裂中期纺锤体。在银鲫上述两类卵母细胞的成熟过程中均未观察到“第一极体”外排的现象。由此,我们确认,银鲫卵是通过第一次成熟分裂异常,卵核染色体不减数来维持染色体倍性的;并且,根据上述特殊现象,我们对银鲫卵子第一次成熟分裂异常的机制进行了初步分析。

松浦红镜鲤形态学特征及主要经济性状的初步研究

将松浦红镜鲤(Cyprinus carpio Songpu red mirror)、散鳞镜鲤(Cyprinus carpio L.mirror)和荷包红鲤(Cyprinus carpio red var.Vuguanensis)抗寒品系乌仔各705尾放养到0.047hm^2池塘中,同塘培育到鱼种;春片鱼种各500尾放养到0.2hm^2池塘中;各池塘的投喂和饲养管理相同,按GB/T18654.2-2008和GB/T18654.3-2008标准测定鱼体质量和形态性状。结果显示,松浦红镜鲤体长/体高、体长/尾柄高、体长/头长、头长/吻长大于散鳞镜鲤和荷包红鲤抗寒品系;三个品种的8个可量比例性状主成分分析构建的3个主成分贡献率分别为:50.94%、17.08%、13.68%,累计贡献率达81.70%;主成分散点图显示,松浦红镜鲤聚成独立一簇,与其他品种明显区分;特定增重率、相对增重率、净增重、饲养成活率及越冬成活率等主要经济性状均显著高于荷包红鲤抗寒品系(P<0.05),但与散鳞镜鲤无明显差异。

与“全红”瓯江彩鲤体色相关的SRAP及SCAR分子标记

利用相关序列扩增多态性(Sequence Related Amplified Polymorphism,SRAP)技术分析"全红"和"粉玉"瓯江彩鲤,筛选与瓯江彩鲤体色相关的分子遗传标记。从88个SRAP引物组合筛选出的12个引物组合共获得扩增条带104个,并筛选出1个SRAP特异扩增带,即"全红"瓯江彩鲤家系SR2,7173 bp带。该条SRAP特异扩增条带经回收、克隆和测序,并将测序结果进行BLAST分析,发现该片段在GenBank中与斑马鱼的POl多蛋白基因和尿红素基因有较高的同源性。根据序列信息分别设计了4对正、反向引物(22—26 bp)。用4对引物分别在"全红"瓯江彩鲤F2和"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中进行PCR扩增,仅发现SC-3(154 bp)能够在"全红"瓯江彩鲤群体中特异扩增,而且在"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中未出现此扩增带。采用大样本对该SC-3标记进行验证,结果发现,在"全红"瓯江彩鲤群体中呈现阳性,而在"粉玉"瓯江彩鲤群体中为阴性,可以区分这两种群体。因此SC-3标记可以作为"全红"瓯江彩鲤群体一个重要的分子遗传特征指标,为进一步进行分子标记辅助育种奠定了基础。

滁州鲫雌核发育的细胞学研究

研究产于安徽省滁州市城西水库的滁州鲫是否行雌核发育繁殖。对滁州鲫♀×滁州鲫♂及滁州鲫♀×红鲤♂受精卵进行细胞学研究,结果表明：（1）在刚产出的成熟卵细胞内没有发现极体,在精子入卵约15-16min后（水温为18-20℃）,单个极体被排出;（2）在受精卵内,精核保持凝聚状态,没有形成雄性原核;（3）精子入卵20 min后,卵核形成雌性原核,在第一次卵裂前没有观察到雌性原核与呈凝聚状态的精核的融合;（4）同源与异源精子激发滁州鲫卵的发育过程基本相同,异源精子能进入滁州鲫卵细胞并激发卵核形成雌性原核,并进行正常胚胎发育,其鱼苗正常,无畸形和无杂交性状的鱼苗。研究表明,滁州鲫为雌核发育鱼类。

芙蓉鲫(芙蓉鲤♀×红鲫♂)及其原始亲本的形态学分析

本研究随机采集芙蓉鲫及其原始亲本(芙蓉鲤、红鲫、散鳞镜鲤、兴国红鲤),测定了7项可数性状和12项可量性状,研究芙蓉鲫与其原始亲本之间的表型差异。结果表明:芙蓉鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassiusauratusred var.♂)可数性状稳定,介于父母本之间,可量性状中芙蓉鲫有5项偏向父本,3项偏向母本、4项超父母本。聚类分析显示芙蓉鲫可量性状更接近于父本红鲫,而与另3种亲本差异较远。判别分析结果也显示芙蓉鲫与红鲫形态更为接近,各组判别准确率依次为芙蓉鲫100%,红鲫96%,兴国红鲤87%,散鳞镜鲤81.3%,芙蓉鲤73.1%。

芙蓉鲤鲫(芙蓉鲤♀×红鲫♂)的性腺组织学及繁殖性能研究

采用解剖观察、组织切片及人工催情等方法,研究芙蓉鲤鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassius auratus red var.♂)的性腺发育及繁殖性能。结果显示:解剖观察,芙蓉鲤鲫性腺发育异常的个体占83.64%,性腺外观基本正常的个体占16.36%。组织学观察,芙蓉鲤鲫性腺可分三类:两性嵌合体占21.13%,其中以精巢为主的16.90%,以卵巢为主的4.23%,它们性腺发育迟缓,在繁殖季节成熟系数也没有明显变化,性腺多为一侧发育或两侧不对称,两种性腺细胞均不能成熟;雌性个体占40.84%,在生殖季节卵巢可发育到第IV时相,但未见其细胞核发生偏移;雄性个体,占38.03%,在生殖季节只能发育到精子细胞阶段,不能产生成熟的精子。经人工催产,芙蓉鲤鲫少部分个体有发情产卵行为但不能正常受精。结果表明芙蓉鲤鲫为两性败育类型。

异育淇鲫及其亲本血清生化组成的比较研究

应用Beckman 42型临床生化分析仪测定异育淇鲫(淇鲫♀×兴国红鲤♂) 及其亲本血清的生化指标,包括总蛋白,白蛋白,尿素氮,血糖、乳酸脱氢酶,碱性磷酸酶,谷草转氨酶和羟丁酸脱氢酶,经t检验发现异育淇鲫与其母本的血清生化指标均无明显差异,而与其父本均有十分显著的差异。本文从代谢方面论证了淇鲫与兴国红鲤属间“杂交”,异源精子只起刺激作用,而并不产生生物学效应。结果与传统的雌核发育相吻合。

黄河鲤鱼血液的研究（Ⅱ）──三项血液指标的测定

本文对黄河鲤鱼ＣｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏｈａｅｍａｔｅｒｕｓＴ．ｅｌｓ．，２项血液指标的的常数值进行测定，结果是：红细胞数的全距为１．４０００×１０￣（１２）～３．３６５０×１０￣（１２）个／Ｌ，平均值为（２．３５５４±０．５４１９）×１０￣（１２）个／Ｌ；白细胞数的全距为０．４８７５×１０￣（１０）～２．４５００×１０￣（１０）个／Ｌ，平均值为（１．８１００±０．６１５０）×１０￣（１０）个／Ｌ；血红蛋白含量全距为７４～１０５ｇ／Ｌ，平均值为８６．６±８．９ｇ／Ｌ。比较雌鱼和雄鱼三项血液值发现，雄鱼的红细胞平均数、白细胞平均数、血红蛋白平均含量均高于雌鱼，对这种雌雄差异进行显著性分析，差异不显著。

非特异性免疫复合制剂对德国镜鲤免疫功能的影响

以红细胞C3b受体花环率、白细胞吞噬率及人工感染死亡率为评价指标,研究并比较了非特异免疫复合制剂与单一非特异免疫物质对德国镜鲤免疫效果,结果表明投喂复合免疫制剂试验鱼的白细胞吞噬率均高于单一非特异免疫物质试验组(P<0.05)及对照组(P<0.05),其红细胞C3b受体花环率显著高于对照组(P<0.05);人工感染死亡率则低于单一非特异性免疫物质试验组及对照组。