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Production of Transgenic Pig Clone Embryo Expressed the Red Fluorescent Protein by Using the Somatic Cell Nucleus Transplantation Technology
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作者 康锦丹 尹熙俊 +4 位作者 赵明辉 梁爽 刘希 李文学 崔成哲 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第2期287-290,307,共5页
[Objective] The research aimed to lay the foundation for producing the transgenic clone pig.[Method] The pig fetus fibroblast with the red fluorescent protein(RFP)gene that was transfected by the retrovirus was as t... [Objective] The research aimed to lay the foundation for producing the transgenic clone pig.[Method] The pig fetus fibroblast with the red fluorescent protein(RFP)gene that was transfected by the retrovirus was as the donor of nucleus transplantation.By using the somatic cell cloning technology,the development situation in vitro of clone embryo with RFP was studied.[Result] The fusion rate of RFP transgenic cell was 83.87% which had no significant difference with 80.56% of non-transgenic cell(P0.05).The blastula rate in vitro of RFP transgenic somatic cell reconstructed embryo was 8.67% which had no significant difference with 6.56% of non-transgenic cell(P0.05).After the reconstructed embryo of RFP transgenic somatic cell was transplanted into fifteen receptors,there was no conception individual.[Conclusion] The transgenic cell with the red fluorescent protein as the donor could successfully clone the transgenic embryo and obtain the transgenic blastula. 展开更多
关键词 TRANSGENE red fluorescent protein Nucleus transplantation Pig
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Protein Nutrition in Red Deer (Cervus elaphus)
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作者 罗理扬 陈化鹏 +2 位作者 谢绪昌 韩亚贞 王玉清 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 1997年第3期174-181,共8页
Red deer can adjust to seasonal change of forage quality to maintain a relatively constant crude protein level (21. 1±4.0, 14.7± 1 .0, 11. 1± 1. 1 and 6.5 ±0.8 in spring. summer. fall and winter. r... Red deer can adjust to seasonal change of forage quality to maintain a relatively constant crude protein level (21. 1±4.0, 14.7± 1 .0, 11. 1± 1. 1 and 6.5 ±0.8 in spring. summer. fall and winter. respectively). Apparent protein digestibility is variable from -99.9% to 97.5%, depending upon season and forage type. True protein digestibility is 99%. Digestion of protein is significantly influenced by phenolics in diets.Minimumm digestible energy intase of 153.5kcal/kg0.75/day is necessary to maintain a positive nitrogen balance. Red deer recycles 18-85% of the urea produced and urea kinetic parameters (urea pool size, urea entry rate and urea excretion rate) are correlated to plasma urea conccntration. Rumen NH3-N production changes with season, but seasonal changcs in other NH3-N kinetic parameters (NH3-N concentration, NH3-N pool size and NH3-N outflow rate) are in dispute. Protein metabolism may be promoted in response to cold strcss. Endogenous urinary nitrogen is 0.09 (red deer) and 0. 16 g N/kg0.75day (elk), and metabolic frcal nitrogen is 5.58 g N/kg dry-matter intake. Protein requirements ranges from 100 g/kg DM to 170 g/kg DM for red deer of various ages and physiological stages. In conclusion.the knowledge of protein nutrition of red deer is limite.Much work is urgently needed in metabolism and requirements of protein before the appropriate feeding standard of red deer is coming. 展开更多
关键词 red deer cervus elaphus protein NUTRITION
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Interactions of pyrogallol red with proteins and the determination of proteins by resonance light-scattering 被引量:3
3
作者 Hu Xiaoli 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期67-72,共6页
The interactions of pyrogallol red (PR) with proteins and a derivative method for the determination of proteins were proposed. In the pH range 2 56-4 10, PR interacts with proteins, including bovine serum albumin, hu... The interactions of pyrogallol red (PR) with proteins and a derivative method for the determination of proteins were proposed. In the pH range 2 56-4 10, PR interacts with proteins, including bovine serum albumin, human serum albumin, lysozyme, chymotrypsin, resulting in enhanced resonance light scattering(RLS) with the maximal peak at 360 0 nm. With the enhanced RLS, proteins in the range 0-5 0(μg/mL can be determined with the determination limits between 10 3 and 32 2 ng/mL depending on different protein. The effects of foreign substances were tested. The method has been applied to the determination of protein in the synthetic samples and human urine with satisfaction results. 展开更多
关键词 proteinS Pyrogallol red(PR) resonance light scattering(RLS)
全文增补中
Influence of fish meal quality on growth,feed conversion rate and protein digestibility in shrimp (Penaeus chinensis ) and red seabream (Pagrosomus major)
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作者 梁明青 AndersAksnes 《海洋水产研究》 CSCD 2001年第4期75-79,共5页
The effect of fishmeal quality on growth,feed conversion ratio and protein digestibility was studied in a growth experiment with shrimp and red seabream.The shrimp and fish were fed three diets varing in the quality o... The effect of fishmeal quality on growth,feed conversion ratio and protein digestibility was studied in a growth experiment with shrimp and red seabream.The shrimp and fish were fed three diets varing in the quality of the fishmeal used in the respective feeds: low quality fish meal,good quality fish meal,and Peru fish meal.The experiment lasted for 2 months.The shrimp and fish fed the feed with good quality fish meal showed significantly better feed conversion ratio,weight gain rate,protein digestibility than the other groups. 展开更多
关键词 鱼粉质量 中国对虾 真鲷 饲料转化率 蛋白质 消化率 对虾
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性别对红骨绵羊肌肉食用和营养品质的影响
5
作者 赵洪文 黄金才 +6 位作者 苏文琳 毛比超 庞宗美 陈明华 王卫 杜丹 杨平贵 《草学》 2024年第2期63-69,共7页
为探究盐源县不同性别红骨绵羊的肉质特性,本试验以该绵羊的背最长肌为材料,测定其肉质理化指标和营养指标,研究性别对红骨绵羊肉品质特性的影响。结果表明盐源红骨绵羊肉的pH值、熟肉率、剪切力和色差等指标在公母之间均无显著性差异(P... 为探究盐源县不同性别红骨绵羊的肉质特性,本试验以该绵羊的背最长肌为材料,测定其肉质理化指标和营养指标,研究性别对红骨绵羊肉品质特性的影响。结果表明盐源红骨绵羊肉的pH值、熟肉率、剪切力和色差等指标在公母之间均无显著性差异(P>0.05),营养指标中常规营养成分、氨基酸、重金属等指标在公母之间均无显著性差异(P>0.05),矿物质含量中钙元素在公母之间具有显著性差异(P<0.05),表明性别对红骨绵羊肉除矿物质元素钙以外的pH值、嫩度、熟肉率、常规营养成分、氨基酸及重金属含量等指标均没有显著的影响。 展开更多
关键词 性别 红骨 绵羊 肉质 氨基酸 蛋白质
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利用种子红色荧光标记鉴定转基因番茄后代
6
作者 章力 魏凯 +9 位作者 李珊珊 宁宇 路菲菲 王孝宣 国艳梅 刘磊 李鑫 杜永臣 李君明 黄泽军 《山东农业科学》 北大核心 2024年第4期1-8,共8页
转基因技术有助于番茄基因功能研究和遗传改良,其中转基因后代的筛选是一个非常重要但工作量大的环节。本研究基于番茄油体蛋白基因家族序列分析和番茄基因表达数据库SGN-TEA搜索结果,克隆了一个种子特异且高水平表达的油体蛋白基因SlOL... 转基因技术有助于番茄基因功能研究和遗传改良,其中转基因后代的筛选是一个非常重要但工作量大的环节。本研究基于番茄油体蛋白基因家族序列分析和番茄基因表达数据库SGN-TEA搜索结果,克隆了一个种子特异且高水平表达的油体蛋白基因SlOLE1(Solyc06g034040)。利用无缝克隆的方法将红色荧光蛋白基因TagRFP的编码区序列插入到SlOLE1基因的终止密码子前,形成一个嵌合基因SlOLE1-TagRFP。将嵌合基因插入到pBI121双元载体,构建植物表达载体pSlOLE1-TagRFP,利用农杆菌介导法转化番茄品种‘Money Maker’,T_(0)代植株的自交种子在荧光显微镜下呈现出明亮红色荧光或无荧光。PCR分子标记进一步验证发现,红色荧光种子萌发的幼苗均存在TagRFP序列,表明在种子阶段检测红色荧光筛选转基因番茄后代的准确率为100%。由此,本研究建立了一种利用SlOLE1-TagRFP嵌合基因,可以通过种子红色荧光可视化分析,简单快速、低成本地鉴定转基因番茄后代的方法。 展开更多
关键词 番茄 种子 红色荧光蛋白 油体蛋白 转基因鉴定
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不同交配型拟轮枝镰孢菌荧光蛋白标记菌株的构建
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作者 张峰程 张君 +1 位作者 李凡 郭维 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-43,共9页
【目的】构建不同交配型的拟轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides)荧光蛋白标记菌株,为研究拟轮枝镰孢菌的侵染、定殖、有性生殖等提供基础材料。【方法】通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导的原生质体转化法分别将荧光蛋白基... 【目的】构建不同交配型的拟轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides)荧光蛋白标记菌株,为研究拟轮枝镰孢菌的侵染、定殖、有性生殖等提供基础材料。【方法】通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导的原生质体转化法分别将荧光蛋白基因eGFP和mCherry导入不同交配型的拟轮枝镰孢菌FvLNF15-11和FvSHF19-37菌株,并比较荧光标记菌株与野生型菌株间的生长特性、有性生殖和致病力差异。【结果】经PCR检测获得了带有荧光标记的菌株,激光共聚焦显微镜观察表明eGFP基因和mCherry基因分别在FvLNF15-11和FvSHF19-37菌株的分生孢子和菌丝中成功表达。与野生型菌株相比,荧光标记菌株的生长发育、子囊壳形成和致病力均无明显差异。【结论】构建了拟轮枝镰孢菌不同交配型eGFP和mCherry荧光标记菌株,不仅为研究拟轮枝镰孢菌在寄主体内的侵染、定殖等提供了材料,也为研究该菌的有性生殖过程积累了基础。 展开更多
关键词 拟轮枝镰孢菌 PEG介导 绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白 交配型
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Red蛋白抗血清的制备及其亚细胞定位研究 被引量:4
8
作者 张晓楠 陈苏民 +4 位作者 罗二平 黄勇 柴玉波 李云峰 陈南春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期305-308,共4页
目的:在大肠杆菌中分别表达3种Red蛋白,并制备兔抗Red蛋白的抗体。方法:从λ噬菌体基因组中,通过PCR分别扩增gam、bet和exoDNA的全长序列。将PCR产物克隆入非融合表达载体pDH2中,构建Red蛋白的高表达工程菌。通过温敏诱导表达3种Red蛋白... 目的:在大肠杆菌中分别表达3种Red蛋白,并制备兔抗Red蛋白的抗体。方法:从λ噬菌体基因组中,通过PCR分别扩增gam、bet和exoDNA的全长序列。将PCR产物克隆入非融合表达载体pDH2中,构建Red蛋白的高表达工程菌。通过温敏诱导表达3种Red蛋白(Bet、Exo和Gam),用PACTE薄层扫描检测目的蛋白含量。用3种Red蛋白分别免疫家兔制备抗血清,并以Westernblot鉴定抗体的效价和特异性。结果:大肠杆菌中表达的Bet、Exo和Gam蛋白,分别占菌体总蛋白量的40.3%、49.2%和73.4%。3种抗血清的效价约为1∶2000。Westernblot分析显示抗血清具有较好的特异性。结论:成功地获得Bet、Exo和Gam3种蛋白,并分别制备了相应的抗血清。使用这3种抗血清,检测了3种蛋白在真核细胞中的表达和定位,为研究Red蛋白的同源重组奠定了基础。 展开更多
关键词 red蛋白 多克隆抗体 瞬时转染
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红色荧光蛋白DsRed2基因在大肠杆菌中的表达和观察及其在本科实验教学中的应用 被引量:10
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作者 邢万金 赵宇航 +1 位作者 任仕超 包晓红 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期548-551,601,共5页
用PCR方法从质粒pDsRed2-1中扩增获得DsRed2,亚克隆到pMD19-T载体上,然后酶切将DsRed2分别插入到原核表达载体pET-Trx和pGEX-4T1上,转入E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达.在LB平板培养基上或液体培养基中直接观察菌体颜色,最后用SDS-P... 用PCR方法从质粒pDsRed2-1中扩增获得DsRed2,亚克隆到pMD19-T载体上,然后酶切将DsRed2分别插入到原核表达载体pET-Trx和pGEX-4T1上,转入E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达.在LB平板培养基上或液体培养基中直接观察菌体颜色,最后用SDS-PAGE检测DsRed2蛋白的表达.结果显示构建的重组载体pET-Trx-DsRed2和pGEX-GST-DsRed2在E.coli中成功表达,且不形成多聚体.LB平板培养基上和IPTG诱导24h后的液体培养基中都能直接观察到红色荧光,说明DsRed2可以作为原核表达系统的报告基因. 展开更多
关键词 原核表达 红色荧光蛋白 Dsred2 实验教学
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兔抗Red蛋白抗血清的纯化及MC3T3细胞中Red蛋白表达时相的分析 被引量:2
10
作者 张晓楠 黄勇 +3 位作者 陈苏民 陈南春 王涛 赵伟钦 《科学技术与工程》 2006年第6期681-685,共5页
为了纯化兔抗Red蛋白的3种多克隆抗体,并用其研究Red蛋白在真核细胞中的表达时相,首先于30℃培养了不含目的基因的空载体(pDH2)大肠菌,经彻底裂菌后用丙酮沉淀全菌蛋白,用其在不同时间吸附3种待纯化的Red抗体,然后用间接 ELISA法及Weste... 为了纯化兔抗Red蛋白的3种多克隆抗体,并用其研究Red蛋白在真核细胞中的表达时相,首先于30℃培养了不含目的基因的空载体(pDH2)大肠菌,经彻底裂菌后用丙酮沉淀全菌蛋白,用其在不同时间吸附3种待纯化的Red抗体,然后用间接 ELISA法及Western-blot法检测了3种抗体的效价和特异性。最后用纯化后的3种Red抗体检测三顺反子表达载体pCMV-gIbIx的3 种蛋白表达产物在MC3T3细胞中的表达时相。ELISA及Western-blot检测结果表明:3种抗血清经纯化后特异性好且效价没有受到影响,随后用纯化的抗体成功地研究了Red基因在真核细胞中的表达时相,此结果为Red重组系统在真核生物基因功能的研究中提供了必要的条件。 展开更多
关键词 多克隆抗体 抗体纯化 red蛋白 表达时相
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含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建 被引量:2
11
作者 郭超 Alexander Endler +2 位作者 张敬 石红军 张军 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2008年第1期17-20,共4页
目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启... 目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率。结果DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%。结论成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 Dsred2 RNA干扰 U6启动子
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表达红色荧光蛋白DsRed报告基因的逆转录病毒载体的构建和在肝干细胞体内示踪中的应用 被引量:1
12
作者 李文林 苏娟 +2 位作者 陶欣荣 Joseph T Lau 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期240-242,共3页
目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓... 目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67 细胞系。结果:利用PT67 细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝原始细胞系。将这些DsRed标记的肝原始细胞移植到小鼠损伤肝脏中,4周后可以在再生肝脏中清晰地观察到具有红色荧光的外源细胞。结论:由于肝脏组织没有红色自发荧光,用DsRed标记肝原始细胞进行肝内示踪时背景干扰小。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 基因.报告 逆转录病毒载体 肝干细胞
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补阳还五汤对高脂血症模型小鼠红细胞的影响
13
作者 周云越 杨金彪 +3 位作者 陈星彤 杨蕊红 肖洪彬 牛雯颖 《中国药房》 CAS 北大核心 2024年第22期2716-2720,共5页
目的研究补阳还五汤对高脂血症模型小鼠红细胞的影响。方法以高脂饲料喂养雄性C57BL/6小鼠制备高脂血症模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙组(0.26 g/kg)、非诺贝特组(1.3 mg/kg)和补阳还五汤高、中、低剂量组(18.6、... 目的研究补阳还五汤对高脂血症模型小鼠红细胞的影响。方法以高脂饲料喂养雄性C57BL/6小鼠制备高脂血症模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙组(0.26 g/kg)、非诺贝特组(1.3 mg/kg)和补阳还五汤高、中、低剂量组(18.6、9.3、4.6 g/kg),每组10只;另取10只以普通饲料喂养的小鼠作为正常组。各组小鼠灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续21 d。末次给药后,各组小鼠称体重,检测血糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TAG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,观察红细胞形态变化,检测红细胞膜中葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、红细胞膜蛋白带4.2(protein 4.2)、小窝蛋白1(caveolin-1)、筏蛋白1(flotillin-1)的表达水平。结果与模型组比较,补阳还五汤各剂量组小鼠体重和TC、TAG、HDL-C、LDL-C水平以及GLUT1、caveolin-1、flotillin-1蛋白表达水平均显著降低,血糖水平和protein 4.2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);补阳还五汤低、中剂量组小鼠红细胞形态明显改善。结论补阳还五汤可降低高脂血症模型小鼠的血脂水平,改善高脂环境中红细胞的形态及功能,有预防高脂血症并发症动脉粥样硬化的潜力。 展开更多
关键词 补阳还五汤 高脂血症 血脂 红细胞 红细胞膜蛋白
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RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB 被引量:1
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作者 唐志如 张友明 +2 位作者 孙志洪 黄瑞林 印遇龙 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期417-421,共5页
RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB,为发光光状杆菌基因敲除提供方法。采用TOPO克隆方法将基因cipA和cipB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA-cipA和pTA-cipB;采用Red/ET方法分别将Gentar基因和Aprar基因分别插入pTA-cipA... RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB,为发光光状杆菌基因敲除提供方法。采用TOPO克隆方法将基因cipA和cipB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA-cipA和pTA-cipB;采用Red/ET方法分别将Gentar基因和Aprar基因分别插入pTA-cipA和pTA-cipB的cipA和cipB基因中,并替换cipA和cipB基因部分序列,获得pTA-GentaIncipA和pTA-ApraIncipB;pTA-GentaIncipA通过BamHⅠ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得GentaIncipA,将GentaIncipA导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescenssubsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipA;pTA-ApraIncipB用EcoRⅠ酶切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得ApraIncipB,将ApraIncipB导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescenssubsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipB;42℃下热激去除突变菌中的质粒pASK-αβγA。克隆PCR和SDS-PAGE电泳结果表明发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB均被敲除。采用RED同源重组法成功地敲除了发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB。 展开更多
关键词 发光光状杆菌 red同源重组 敲除 晶体蛋白
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pDsRED-LC3真核表达载体的构建及其在肝癌细胞系HepG2中的表达和定位
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作者 彭琬昕 孙瑶湘 +3 位作者 陈琛 金洁 邵根宝 王嫘 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期84-88,共5页
本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激... 本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的表达和分布情况,并观察血清饥饿时细胞发生自噬的情况.结果表明:(1)成功构建pDsRFP-LC3真核表达载体,该载体能在人肝癌细胞中表达;(2)血清饥饿应激实验证明,该载体可以良好地指示自噬泡的形成过程,为研究肿瘤细胞的自噬发生情况提供了一个重要而方便的工具. 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 MAP-LC3 自噬 肝癌
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小鼠PDL1-Red2融合蛋白真核表达载体的构建、表达及其效应
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作者 廖雯君 孙晶 +2 位作者 朱慧芬 张金元 沈关心 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1068-1071,共4页
目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋... 目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋巴细胞培养,以FCM测定脾细胞的增殖反应。结果:融合基因在转染的真核细胞中获得表达,并呈膜分布,转染PD-L1/pDsRed2-N1的细胞对淋巴细胞增殖反应有一定的抑制作用,表明PD-L1/pDsRed2-N1融合蛋白中分子标签未影响PD-L1的结构及其生物学活性。结论:PD-L1与DsRed2融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 PD-L1 红色荧光蛋白 融合基因 混和淋巴细胞培养
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远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定
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作者 何志强 薛渊 +8 位作者 石燕 杨恒 赵银霞 王楷文 周成林 王胜军 邵启祥 焦志军 许化溪 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第1期17-20,共4页
目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模... 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。 展开更多
关键词 远红荧光蛋白Hcred 树突状细胞系2.4 原核表达
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细菌λ Red重组技术的应用及其影响因素 被引量:9
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作者 付喜爱 张德显 +3 位作者 周维 于立辉 田春莲 刘明春 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期91-95,共5页
由λ噬菌体的exo、beta、gam 3个基因分别编码的Exo、Beta和Gam蛋白组成λRed同源重组系统。λRed重组是细菌靶基因置换的有效技术,该技术发展迅速,已广泛应用于大肠埃希菌等细菌染色体DNA的基因敲除、基因整合,可以对任何大小的DNA分... 由λ噬菌体的exo、beta、gam 3个基因分别编码的Exo、Beta和Gam蛋白组成λRed同源重组系统。λRed重组是细菌靶基因置换的有效技术,该技术发展迅速,已广泛应用于大肠埃希菌等细菌染色体DNA的基因敲除、基因整合,可以对任何大小的DNA分子进行精确修饰。利用λRed重组系统不仅可以构建工程菌,还可以为研究细菌的致病机理和耐药机制提供新的方法。然而,许多应用因重组频率而受到限制,影响重组频率的因素主要有底物浓度、同源片段的长度、内源性核酸酶、错配蛋白等。论文综述了λRed同源重组技术的应用进展及影响重组的因素,以期为优化重组试验方案及提高试验的成功率提供帮助。 展开更多
关键词 λ red同源重组 应用 底物 内源性核酸酶 错配蛋白
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红豆肽的制备、分离纯化及降糖活性研究
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作者 胡宁 韩佳欣 +5 位作者 秦梅子 包怡萍 于兴涛 张丰香 韩彩静 金梅 《中国食物与营养》 2024年第4期34-40,共7页
目的:筛选红豆蛋白的酶解工艺并研究红豆多肽的降糖活性及构效关系。方法:采用碱沉酸提法提取红豆粗蛋白,以肽得率、水解度、α-葡萄糖苷酶抑制、Fe^(2+)螯合率、DPPH清除率为指标筛选最佳蛋白酶;酶解得到红豆多肽,醇沉多糖后通过DA201-... 目的:筛选红豆蛋白的酶解工艺并研究红豆多肽的降糖活性及构效关系。方法:采用碱沉酸提法提取红豆粗蛋白,以肽得率、水解度、α-葡萄糖苷酶抑制、Fe^(2+)螯合率、DPPH清除率为指标筛选最佳蛋白酶;酶解得到红豆多肽,醇沉多糖后通过DA201-C大孔吸附树脂进行脱盐纯化后,测定多肽的分子量及氨基酸组成来探讨其构效关系。结果:经4种蛋白酶(中性、碱性、风味、复合蛋白酶)水解后,碱性蛋白酶的肽得率为82.95%,水解度为52.67%,实验浓度范围内最佳α-葡萄糖苷酶抑制为72.14%,比其他3种酶均高;85%乙醇醇沉后的肽糖比、α-葡萄糖苷酶抑制率(73.49%)和α-淀粉酶抑制率(31.31%)均最高,脱盐纯化后肽含量高达97.61%,在2 mg/mL时测定对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制效果,分别为52.49%和14.63%,表明除去多糖后红豆多肽仍具有独立降血糖活性;经测定,红豆多肽以小分子为主,3 kDa以下占比91.40%,其中小于1000 Da占比达到75.28%。纯化后疏水性氨基酸占比约37.28%,其中甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸和谷氨酸含量较高。结论:碱性蛋白酶是制备红豆多肽的最佳蛋白酶,分离纯化后的红豆多肽具有降糖活性,其活性可能与4种疏水性氨基酸含量较高且分子量较小有关。 展开更多
关键词 红豆多肽 蛋白酶解 分离纯化 降糖 构效关系
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含DsRed类似生色团的红色荧光蛋白的发展及应用 被引量:4
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作者 王志芳 安建梅 孔建强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期197-206,共10页
自从绿色荧光蛋白(GFP)被发现以来,荧光蛋白在生物医学领域已经成为一种重要的荧光成像工具.随着红色荧光蛋白DsRed的出现,各种优化的DsRed突变体和远红荧光蛋白也不断涌现.其中荧光蛋白生色团的形成机制对改建更优的荧光蛋白变种影响很... 自从绿色荧光蛋白(GFP)被发现以来,荧光蛋白在生物医学领域已经成为一种重要的荧光成像工具.随着红色荧光蛋白DsRed的出现,各种优化的DsRed突变体和远红荧光蛋白也不断涌现.其中荧光蛋白生色团的形成机制对改建更优的荧光蛋白变种影响很大,对于红色荧光蛋白而言,大多数的红色荧光蛋白的生色团类型为DsRed类似生色团,在此基础上又出现了Far-redDsRed类似生色团.目前,含DsRed类似生色团的荧光蛋白主要有单体红色荧光蛋白、光转换荧光蛋白、斯托克斯红移蛋白、荧光计时器等.这些优化的荧光蛋白作为分子探针可以实现对活细胞、细胞器或胞内分子的时空标记和追踪,已经在生物工程学、细胞生物学、基础医学领域得到广泛应用.本文综述了含DsRed类似生色团的荧光蛋白的研究进展及其应用,以及由此发展起来的远红荧光蛋白在活体显微成像技术中的应用,并展望了荧光探针技术研究的新方向. 展开更多
关键词 Dsred类似生色团 远红荧光蛋白 荧光显微成像
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