重组胰腺再生蛋白Reg3β的制备及初步活性研究

构建重组p ET28a(+)-rReg3β表达质粒,转入T7 Expression E.coli表达菌,获得鼠源重组Reg3β表达菌株,经IPTG诱导后以包涵体形式表达重组Reg3β蛋白。重组Reg3β蛋白通过裂解菌体、镍柱亲和层析等方法进行分离纯化,纯化后透析复性,通过Western blot进行定性分析,SDS-PAGE及HPLC进行纯度分析。小鼠胰岛素瘤MIN6细胞系MTT检测显示重组Reg3β蛋白具有明显的促进细胞增殖作用,Western blot方法证明其能够显著提高Akt和Erk1/2信号分子的磷酸化水平从而刺激细胞增殖。结论:该课题成功构建和制备了重组Reg3β蛋白,并在体外实验中证实重组Reg3β具有促进胰岛β细胞系增殖的活性,并进一步探讨了其作用机制,可能在胰岛细胞的保护和再生领域具备较好前景。