The Application of TDZ in Enhancing Regeneration of Transgenic Plants

At present, transgenic plants are globally grown. Availability of a reliable regeneration system predominantly from a single transformed cell is the prerequisites for gene transfer, but regeneration is still a key

激素TDZ对促进白菜下胚轴不定芽再生的效应分析

以华阳三号(HY)大白菜和苏州青(SZQ)小白菜下胚轴为外植体,MS为基本培养基,将TDZ与NAA配置不同激素浓度组合,观察TDZ对下胚轴不定芽再生的影响,并对各组合的培养效果进行了比较。结果表明,TDZ能较好地促进大白菜下胚轴不定芽再生,在MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA的培养条件下,HY的不定芽再生频率达到45％,且再生周期短,芽点多,再生芽正常,可以满足植物遗传转化需要。TDZ很难诱导SZQ小白菜下胚轴不定芽再生,只能诱导产生大量愈伤组织。

TDZ/NAA对尾赤桉茎段愈伤分化及植株再生的影响

以尾赤桉继代幼苗茎段作为外植体,研究不同质量分数组合的TDZ/NAA对愈伤和不定芽分化及植株再生培养的影响.结果表明：改良MS＋TDZ 0.05 mg/L＋NAA 0.5 mg/L培养基效果最好,可获得高达80%的不定芽诱导,每个愈伤组织可以产生10~20个有效芽.获得的分化苗在无TDZ和NAA培养基中的壮苗效果好.

TDZ对甜椒不定芽分化的影响

为了建立甜椒高频、高效离体培养再生体系,以甜椒子叶、真叶、下胚轴为外植体,采用了不同浓度的TDZ与IAA、6-BA的配比,研究了TDZ对甜椒不定芽分化的影响。结果表明:仅含有TDZ的培养基中芽分化率几乎为0,仅含有IAA、6-BA的培养基中芽分化率最高达80%,加入TDZ后,在0.5mg/L IAA+10.0mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ的激素组合培养条件下,可获得96%的丛生芽诱导频率。表明在甜椒芽诱导过程中添加TDZ能够很好地提高分化效率。

TDZ和BA对金花梨和鸭梨叶片不定芽再生的影响

为了提高金花梨和鸭梨2个品种叶片不定芽再生能力,以其试管苗叶片为外植体,以NN69为基本培养基,研究了不同浓度TDZ和BA对2个品种梨叶片不定芽再生的影响。结果表明:BA对鸭梨叶片不定芽的再生比TDZ有效,TDZ未能诱导鸭梨叶片产生不定芽;BA对金花梨叶片不定芽再生率的影响与TDZ无显著差异,但TDZ比BA显著提高了金花梨叶片的平均每叶不定芽数。

TDZ诱导三种植物叶切块离体培养植株再生

以0.01μmol/L浓度附加到MS固体培养基上的TDZ,诱导三叶半夏叶切块产生愈伤组织和形成球状体的能力显著超过附加2μmol/L BA的,且所诱导形成的球状体经转移培养后能正常形成再生小植株.在诱导非洲紫罗兰叶切块出芽和植株再生方面,0.005μmol/L TDZ的效力即与0.5μmol/L BA的相当.0.5μmol/LTDZ诱导蟆叶秋海棠叶切块出芽和植株再生方面的效力与5μmol/LBA相当.以上结果表明很低浓度的TDZ就可代替BA用于某些植物的离体微型繁殖中.

DREB2A基因对苜蓿遗传转化的研究

以黑龙江紫花苜蓿Medicago sativa主栽品种:肇东苜蓿、敖汉苜蓿、公农1号和公农2号为受体材料,系统地探讨了除菌剂种类和浓度以及卡那霉素筛选浓度等,建立了高效的苜蓿再生体系和遗传转化体系;分别构建了由诱导型启动子rd29A和组成型启动子E12调控的DREB2A基因的2个植物表达载体pB2A29A和pB2AE12;采用农杆菌介导法进行遗传转化,获得大量转基因抗性植株并进行了分子生物学(PCR和Southern blot)检测。结果表明,DREB2A基因已整合到苜蓿基因组中。

基因枪转化小麦幼胚的再生培养与转基因植株的获得

以小麦幼胚为受体,用基因枪法对Trx-S反义基因 目的基因 和Bar基因 标记基因 进行了共转化,以轰击后的小麦幼胚为实验材料,对幼胚培养的基本培养基、分化和生根培养基进行了筛选优化.结果表明:4种基本培养基中,L3培养基的成愈率最高,且增殖速度快;MS培养基次之.以L3为基本培养基,分化培养基中添加NAA1mg·L-1和ZT2mg·L-1配比对愈伤组织诱导分化的效果最好,分化率达到50%以上.1/2MS培养基中添加IAA0.8mg·L-1的生根效果好,且移栽成活率高.以优化的培养方案对来自7个小麦品种的幼胚进行转化与再生培养,多数品种的出愈率都达到90%以上,分化率在40%以上,并在5个品种上获得再生植株,经检测证实在4个品种上获得转基因再生植株.

花生幼叶为外植体的植株再生系统的建立

本文报道利用花生成熟胚幼叶为外植体获得高频植株再生的方法 ,为花生转基因提供有效的受体系统。通过诱导培养基TDZ、BA、NAA的浓度以及种子萌发时间、继代培养基种类五个因素不同水平的正交试验 ,筛选出了分化高频发生的最佳组合为 :MS培养基中应含有TDZ 1 .0 μmol/L、BA 0 .4μmol/L、NAA 5 .0 μmol/L ,种子萌发 4d,继代培养基为MS0 。本研究表明 ,五因素中诱导培养基TDZ浓度为诱导花生幼叶分化的主要影响因素 ,其次为继代培养基、种子萌发时间 ,而诱导培养基中BA和NAA的浓度作用较小。试管苗生根后移栽田间 。

‘富有’和‘次郎’甜柿叶片再生植株的研究

比较了不同生长调节剂及其种类浓度和培养时间对‘富有’和‘次郎’两个甜柿(DiospyroskakiThunb.)品种的叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。TDZ诱导叶片愈伤组织和不定芽再生的能力很强,在含ZT0·5mg·L-1的培养基中,愈伤组织的形成率达96%,愈伤组织不定芽分化率达80%以上,由0·5mg·L-1TDZ诱导形成的富有和次郎愈伤组织,在含有ZT0·5mg·L-1的1/2DKW培养基培养30d,不定芽分化率均达96%以上,平均芽数分别为7·8和5·4,所得再生苗的生根率近75%。

农杆菌介导法获得抗病毒病转基因大白菜

为获得抗芜菁花叶病毒病的大白菜植株,用携带TuMV-cp基因的农杆菌R1000和EHA105转化大白菜子叶和下胚轴,PCR、PCR-Southern检测证实TuMV-cp基因已导入并整合到大白菜的基因组中.RT-PCR检测表明TuMV-cp在转录水平上获得了稳定表达.TuMV-cp基因在转基因植株T1代中获得了稳定的遗传.抗病性鉴定结果表明转基因植株T1代较非转基因植株对TuMV的抗性增强,获得了抗病毒病的转基因大白菜植株.

小麦不同转基因受体材料的植株再生培养研究

为了确定适宜的小麦转基因受体材料,通过不同取材和预处理,发现小麦幼胚作为基因枪转化的受体材料,其愈伤组织形成与芽分化能力优于幼穗。幼胚在枪击前的预培养时间对愈伤组织抗轰击损伤和恢复生长能力都有明显影响,预培养2周的幼胚愈伤组织作为受体的再生率较高。在轰击前6h到轰击后18h用0.4mol·L-1甘露醇处理,能增加分化率。小麦基因型不同,基因转化与植株再生的效果也有明显差别,本研究中豫麦18-64是较理想的受体基因型。

甘蓝下胚轴的高效再生和农杆菌介导B.t.基因转化甘蓝

分别对取材时间和培养基组成进行研究，建立了甘蓝下胚轴外植体的高效再生系统，当选取6～7d苗龄的下胚轴，将其置于MSB＋BA2．5mg／L＋ZT1mg／L＋IBA0．1mg／L的芽分化培养基中，并于培养基中附加AgNO37．5mg／L时，最高的芽分化频率，“夏光甘蓝”母本“103”可达81．67％，父本“60天早椰菜”可达78．56％。在此基础上，我们对影响转化频率的不同因素，即：抑制农杆菌生长的抗生素种类及其浓度、预培养的有无及感染时的浓度、下胚轴外植体与农杆菌的感染时间和共培养时间、筛选时抗生素的加入时间进行了探讨。共获得100余株卡那霉素抗性植株，全部移栽成活，生长良好。对转基因植株总DNA进行Southernblotting分析，证明nptⅡ基因已整合到甘蓝植株细胞基因组中。

豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究

本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,其中部分株系的叶片可在一定程度上抑制扁刺蛾幼虫的生长。

海藻糖合酶基因转化黑麦草及耐旱性研究

以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)种子成熟胚为外植体,在MS附加5mg/L2,4-D、500mg/L的L-脯氨酸、130mg/L天门冬酰氨、10mg/LAgNO3的诱导培养基(MSJ)上诱导胚性愈伤组织。用基因枪法将ubiqutin启动子驱动的海藻糖合酶基因(TPS基因)转入多年生黑麦草的胚性愈伤。在含有5mg/LBialaphos的选择培养基上经过2个月的抗性筛选,抗性愈伤组织在分化培养基上生成了898株再生植株,其中的220株检测为阳性株,检测的阳性率占供检株数的24.5%。PCR分析及PCR-Southern杂交鉴定表明,TPS基因已整合到黑麦草的基因组中。抗旱性鉴定表明,转基因黑麦草在干旱胁迫条件下的保水能力增强,电解质渗出率明显低于对照,耐旱性提高。

白三叶转基因研究进展

综述了白三叶植株再生体系的建立及转抗病毒、抗虫、抗逆、品质改良、植物疫苗、矿质营养吸收、植物激素合成等基因方面的研究进展。此外,还对转基因白三叶的发展前景作了简要展望。

哈密瓜转ACC脱氨酶基因再生植株的获得

ACC脱氨酶基因表达产物具有减少植物乙烯合成的作用 ,从而达到果实保鲜耐贮的目的。用农杆菌侵染三种哈密瓜 (皇后、迦师瓜、红蜜脆 )培养 8d的子叶块 ,接种在MS附加BA1.0mg/L ,Kana(卡那霉素 ) 75mg/L和Amp(氨苄青霉素 ) 2 0 0mg/L的培养基上 ,在温度 (2 7± 1)℃、光照 2 0 0 0lx条件下 ,经 2 0d左右培养出现不定芽的分化 ;继续将这些不定芽接种在MS附加IBA0 .1mg/L ,Kana 5 0mg/L和Amp 2 0 0mg/L的培养基上 ,诱导根的产生 ,最终获得了转化植株。通过对转化植株的PCR扩增检测证明 ,1kb的ACC脱氨酶基因已经整合到哈密瓜基因组中。

转基因玉米抗性愈伤再生植株的影响因素研究

再生植株的培养是玉米转基因重要环节之一。本文比较了基本培养基、愈伤组织大小、继代次数、激素添加物对转基因抗性愈伤组织分化和再生植株的影响。结果表明：以N6为基本培养基有利于抗性愈伤组织分化;抗性愈伤组织大小在2.5-3.5mm之间、继代2-3次的分化率最高;再生培养基中添加ABT 0.5 mg·L^-1和S3307 0.25 mg·L^-1能促进生根壮苗。本研究为转基因玉米再生体系建立提供了依据。

肥城桃组培苗诱导、基因转化及其增殖

红里、白里是肥城桃的两个优良品种,但不耐贮藏。为试图利用基因工程解决这一问题,先通过组培将其胚、胚乳、子叶的愈伤组织分别诱导再生植株和芽剥离出茎尖培育成苗。再将肥城桃反义PG基因,通过农杆菌介导转化组培苗,转化苗在含卡那霉素培养基上筛选,获得抗卡那霉素的转基因苗。用研制的增殖培养基培养4～7周,一个苗可生长出14～18分枝的苗,解决了转基因苗获得率低的问题,也满足了对转基因株系进行检测和从组培室到温棚到田间果园过渡栽培和芽接的需求,提高了繁育速率。

盆栽非洲菊基因枪介导法转化体系的建立

以非洲菊盆栽品种为材料,研究了BA和NAA不同浓度组合对不定芽诱导增殖的影响;基因枪介导法转化的不同轰击距离对转化率影响。结果表明:1.5 mg/L BA的培养基上增殖倍数最高,高达8.96倍;9 cm的目标轰击距离转化效率最高,达到10.9%。建立了非洲菊盆栽品种的再生和转基因体系,为非洲菊基因工程育种打下基础。