地黄与天目地黄种间杂种倍性及SSR分子标记鉴定研究

为鉴定地黄与天目地黄的杂交后代(粉花地黄)染色体倍性及杂种真实性,本研究采用流式细胞术开展了染色体倍性研究,采用SSR分子标记技术鉴定杂种真实性。结果表明,粉花地黄为四倍体,与母本地黄一致,父本天目地黄为二倍体。通过PCR技术从45对引物中筛选出11对SSR引物用于杂种真实性鉴定,11对引物共扩增出不同条带总数为45,多态性条带数为40,多态性比率达88.89%,除引物CPSSR_225外,从其余每对引物扩增出的图谱中可见,粉花地黄出现的基因峰值均与父本及母本的部分峰值相同,在某个位点中出现4个峰值,各自有2个分别与母本及父本一致。研究表明,粉花地黄为地黄与天目地黄的真杂种。

天目地黄4个变异株形态观测及倍性鉴定

在连续开展3年多的地黄属植物收集选育工作过程中,发现了4株表观形态有所变化的不同变异株,编号分别为T-1、T-2、T-3、T-4,对其形态指标进行测量统计及数据分析后发现,与天目地黄相比形态差异明显。具体差异表现为:T-1主茎明显短缩;T-2柱头外露于花瓣,叶片长宽比变小;T-3柱头外漏于花瓣,主茎明显短缩;T-4单叶叶面积增大近3倍,主茎明显短缩近无。为明确变异株染色体倍性,用流式细胞仪进行倍性检测分析,结果显示T-1、T-2、T-3峰值均与原株一致,鉴定为2倍体,T-4峰值约为原株的2倍,鉴定为4倍体。

白花天目地黄的愈伤组织再生体系研究

白花天目地黄是天目地黄的一个优良变型,其资源稀少。本研究以白花天目地黄幼嫩叶片为外植体,探讨不同生长调节物质对其愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:MS+BA1.5mg·L-1+IBA0.5mg·L-1是诱导叶片愈伤组织最佳的培养基;MS+BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基对不定芽分化的效果最好;不定芽增殖最适宜的培养基为MS+BA2.0mg·L-1+IBA0.2mg·L-1;其不定芽的最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.05mg·L-1;试管苗移栽成活率达到96.7%。同时,在此基础上探讨了白花天目地黄的园林绿化及对地黄属药用方面的利用前景。

浙江天目地黄2新变型(英文)

描述了产于浙江临安的天目地黄2个新变型——白花天目地黄(Rehmanniachingii Li f.albiflora G.Y.Li et D.D.Ma)和紫斑白花天目地黄(R.chingii Li f.purpureo-punctata G.Y.Li et G.H.Xia),它们与原变型的主要区别为花冠白色;前者喉部淡黄色,后者喉部具紫色斑点。

不同植物生长调节物质对天目地黄组织培养及植株再生的影响

以天目地黄幼叶片为外植体,研究不同植物生长调节物质对其组织培养和植株再生的影响.结果表明,实验条件下,诱导叶片分化形成愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg.L-1+2,4-D 0.2 mg.L-1;最适的丛生芽分化培养基为1/2 MS+6-BA1.0 mg.L-1+IBA0.05 mg.L-1;诱导丛生芽生根的最佳培养基为1/2 MS+IBA0.1 mg.L-1.并在此基础上探讨了组织培养技术在地黄属植物药用及园林方面的开发和利用前景.

用RP-HPLC法测定天目地黄中梓醇和毛蕊花糖苷的含量

目的:建立RP-HPLC法测定天目地黄中梓醇与毛蕊花糖苷的含量,分析两种成分在天目地黄中的动态积累规律,为其资源开发和质量标准建立提供参考依据。方法:采用甲醇回流提取法进行提取,用RP-HPLC法测定不同发育阶段新鲜药材块根与全草中梓醇和毛蕊花糖苷的含量。结果:梓醇和毛蕊花糖苷在天目地黄块根和全草中含量有显著差异,其中梓醇主要分布于块根,在5月份成长期含量最高(3.42%);而毛蕊花糖苷主要分布在全草,于6月份开花结实期含量较高(0.47%)。结论:本研究初步探索了天目地黄中有效成分的动态积累规律,为该药材资源的合理利用提供了科学依据。

天目地黄化学成分研究

目的研究天目地黄Rehmannia chingii全草的化学成分。方法通过正相硅胶、Sephadex LH-20以及反相HPLC柱等色谱方法对天目地黄的化学成分进行分离纯化,应用谱学技术鉴定化合物的结构。结果从天目地黄水提取物中分离得到17个化合物,分别鉴定为8-甲基-9氢环戊烷并吡喃-1,3,6,8-四醇（1）、3,4-二羟基苯乙醇（2）、3-甲氧基-4-羟基苯乙醇（3）、苯乙醇-8-O-β-D-葡萄糖苷（4）、（3,4-二羟基苯乙醇）-鼠李糖-（1→3）-葡萄糖苷（5）、（苯乙醇）-木糖-（1→6）-葡萄糖苷（6）、去乙酰地黄苷（7）、毛蕊花糖苷（8）、异毛蕊花糖苷（9）、地黄苷（10）、异地黄苷（11）、焦地黄苯乙醇苷C（12）、焦地黄苯乙醇苷A1（13）、焦地黄苯乙醇苷B1（14）、3,4-dihydroxy-β-phenethyl-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→3）-O-β-D-galacopyranosyl-（1→6）-4-O-caffeoyl-β-D-glucopyranoside（15）、肉苁蓉苷F（16）、异肉苁蓉苷F（17）。结论共鉴定17个化合物,包括1个环烯醚萜（1）,16个苯乙醇及其苷（2~17）;化合物1为新化合物,命名为天目地黄素;化合物16、17为首次从该属植物中分离得到。经体外活性筛选发现化合物9、12、14~16有醛糖还原酶抑制活性。

CRISPR/Cas9技术在天目地黄RcPDS1基因编辑中的应用

为了研究CRISPR/Cas9技术在天目地黄基因编辑中的应用,克隆了天目地黄(Rehmannia chingii)的八氢番茄红素脱氢酶基因(Rc PDS1),利用PCR方法扩增其c DNA序列和基因组DNA序列。通过构建单靶点CRISPR/Cas9载体,利用根癌农杆菌介导的遗传转化方法侵染天目地黄无菌苗叶盘,通过TA克隆测序法分析基因编辑的类型。结果显示,克隆获得了1个天目地黄Rc PDS1的全长c DNA序列,其具有1个长度为1743 bp的开放阅读框,编码580个氨基酸残基,基因组DNA序列长度8041 bp,包含14个内含子和15个外显子。通过遗传转化共获得57个转基因再生株系,其中具明显白化表型的株系有20个(35.09%)。TA克隆测序结果显示,Rc PDS1靶位点突变类型主要包括碱基缺失、替换和插入。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在天目地黄中成功实现了对Rc PDS1基因的靶向敲除。