熟地黄多糖含量近红外模型的建立及其对肥胖小鼠肾损伤炎症的抑制作用

建立近红外光谱法快速测定熟地黄多糖(RGP)含量的方法,并探讨不同含量RGP对肥胖小鼠炎症的影响。采集熟地黄的近红外漫反射光谱,结合偏最小二乘法(PLS),采用多元散射校正法、直接差分法和一阶导数法对光谱进行处理,以4040.12~11221.66 cm^(-1)为波长区间,19为主成分数建立RGP含量的定量分析模型,其含量的预测值为34.63%~45.28%,测定值为34.49%~45.09%,绝对偏差为-0.41%~0.26%,相对偏差为0.121%~0.995%。并建立高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,以不同含量RGP给药14周后测定空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酐(Cr)和肾脏指数,观察小鼠肾脏组织病理形态。与模型组相比,RGP高含量组小鼠的体质量、TC、TG、Cr、FPG和肾脏指数分别下降11.29%、31.59%、47.63%、34.63%、28.57%、19.00%;RGP的干预可明显改善肾脏组织结构损伤,抑制炎症细胞的浸润,且作用效果与含量高低呈正相关。由此表明建立近红外光谱模型可快速准确地测定RGP含量;RGP具有调节肥胖小鼠血脂异常,抑制肾脏炎症反应,保护肾脏结构的作用,为RGP的开发利用提供实验依据。

地黄多糖提取工艺、生物活性及机制研究进展

近年来,从中药中提取的天然化合物因其广泛的生物活性,低毒性和较少的副作用而备受关注。地黄作为我国传统药食两用中药材,已有两千多年的食用历史。地黄多糖作为地黄的主要活性成分之一,具有增强免疫功能、抗氧化、抗肿瘤、调节血糖血脂等功效,在食品、药品和保健品开发方面具有广阔的应用前景。地黄多糖的有效提取是进行生物活性研究的基础,不同的提取方式对地黄多糖的生物活性具有一定的影响。因此,研究地黄多糖的提取工艺及揭示地黄多糖的生物活性及作用机制具有重要意义。本文针对地黄多糖进行综述,概括了近年来地黄多糖的提取方法研究进展,发现提取方法主要有普通水提法、超声辅助水提法、酶辅助水提法、微波辅助水提法、复合水提法和超临界CO_(2)萃取法等。同时也总结了地黄多糖的生物活性及作用机制,分析了现存的问题,并对地黄多糖未来研究方向进行展望,为地黄多糖的后续生物活性研究、构建并完善生产体系以及在食品与医药领域的开发应用提供理论依据。

熟地黄多糖调控lncRNA MEG3对碘乙酸钠致骨关节炎软骨细胞损伤的保护作用

目的探讨熟地黄多糖(RGP)调控长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)对碘乙酸钠(MIA)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响。方法培养大鼠软骨细胞,不同浓度MIA(0、1、2、4、8μmol/L)诱导建立软骨细胞损伤模型,并给予不同浓度RGP(50、100、200、400、800 mg/mL)处理筛选合适的实验浓度。实验分为正常组、MIA组、RGP组、RGP+si-NC组、RGP+si-MEG3组,Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测细胞活力;Hoechst 33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中MEG3、金属蛋白酶13(MMP-13)、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)和蛋白聚糖(ACAN)mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、BAX、BCL-2、caspase3蛋白表达水平。结果MIA以剂量依赖性方式降低软骨细胞活力,诱导细胞凋亡,并降低MEG3和COL2A1 mRNA、ACAN mRNA水平,升高MMP-13 mRNA水平(P<0.05)。100、200、400、800 mg/mL RGP可升高软骨细胞活力及MEG3水平(P<0.05)。与正常组相比,MIA组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2蛋白水平降低,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3蛋白水平升高(P<0.05);与MIA组相比,RGP组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2蛋白水平升高,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3蛋白水平降低(P<0.05);敲低MEG3可减弱RGP对MIA诱导的软骨细胞损伤的保护作用。结论RGP可促进软骨细胞ECM合成,并抑制细胞凋亡,减轻MIA诱导的软骨细胞损伤,其作用机制可能与上调MEG3表达,诱导PI3K/AKT通路活化有关。

地黄叶多糖的超高压提取工艺优化及抗氧化活性研究

为充分利用地黄叶资源,采用超高压提取方法提取地黄叶中多糖,并且将其与热水提取、微波提取和超声波提取的地黄叶多糖进行抗氧化活性的比较。结果表明:超高压压力400MPa、加压时间8.5min、液固比20∶1mL/g为最佳提取条件,在该条件下,地黄叶中多糖得率达到4.52%,其对DPPH自由基和ABTS+自由基清除能力的IC50分别为1.26mg/mL和1.78mg/mL,清除能力强于热水提取、微波提取和超声波提取的地黄叶多糖。超高压提取方法提取地黄叶多糖得率高、时间短、活性高。在提取地黄叶多糖方面具有较好的应用前景。

低分子量地黄多糖对癌基因表达的影响

低分子量地黄多糖对癌基因表达的影响魏小龙茹祥斌刘福君汤建芳魏昌华（北京毒物药物研究所，北京１００８５０）低分子量地黄多糖（ｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔＲｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＲＰＳ）是从地黄多糖中...

响应面分析法优化怀地黄多糖的微波提取工艺

为了优化怀地黄多糖的微波提取工艺,采用苯酚—硫酸比色法对怀地黄多糖含量进行测定,通过设定不同单因素研究了微波处理时间、微波功率和液料比对怀地黄多糖提取率的影响,以响应面分析法确定了微波提取怀地黄多糖的最佳工艺。结果显示:微波处理时间、微波功率和液料比对地黄多糖得率具有显著影响,其中在微波处理功率为720W,微波处理时间为210s,料水比为1:6条件下,地黄多糖提取率可达到61.9%,并且该工艺有很好的重现性。

怀地黄多糖化学研究

采用ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｕｌｏｓｅ及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析，从怀地黄水提取物中分离出一多糖ＲＧ，醋酸纤维素薄膜电泳，高效凝胶渗透色谱证实，ＲＧ为单一组份，薄层层析和气相色谱分析表明，该多糖由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖组成。

超声技术在熟地黄多糖提取中的应用

研究了熟地黄多糖的超声提取方法。在超声波作用下,通过对提取时间、超声波频率、提取温度、料液比、熟地黄粉碎的粒度等因素进行研究,确定了熟地黄粉碎的粒度为40目,超声波频率为40kHz,最佳提取条件为料液比为1g:56ml,提取温度64.5℃,提取时间3.1min。实验的重复性较好。

地黄多糖的超临界CO_2萃取及其对创伤小鼠脾脏的影响

为探讨地黄多糖对创伤小鼠脾脏和创面愈合的影响,采用超临界CO2萃取法提取地黄多糖,对创伤昆明种小白鼠灌服地黄多糖治疗,计算脾指数;石蜡包埋脾脏进行病理学分析;制备脾脏单细胞悬液,应用流式细胞仪进行检测,ModFit软件进行脾细胞周期分析。结果显示,地黄多糖的提取率达到30.4%;与对照组比较,模型组脾脏淋巴细胞稀疏,S期脾细胞比例和脾指数降低,而治疗组损伤程度减轻,S期、G2/M期脾细胞比例和脾指数升高,且创面愈合情况好。表明地黄多糖能够促进脾淋巴细胞的增殖,改善脾脏组织学变化,提高创伤小鼠脾指数和脾脏免疫功能,进而促进创面愈合。

地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响

目的探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响。方法取大鼠P3-P5代BMSCs,随机分为正常对照组(CON组)、神经生长因子组(BDNF组,10μg/ml)和地黄多糖诱导A、B、C组(RGP组,浓度分别为50、100、200μg/ml),诱导后连续培养7d。观察细胞一般形态。采用Western blotting检测CON组与RGP C组神经标志物相关蛋白神经巢蛋白(Nestin)、βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光法和Western blotting分别检测各组诱导后0、1、3、7d时Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD的表达。结果 CON组始终以梭形细胞为主,RGP C组第5天起出现神经元样细胞。Western blotting检测到RGP C组Nestin蛋白表达由强到弱,NSE和βⅢ-tubulin蛋白表达由弱到强,GFAP蛋白呈弱表达。免疫荧光结果显示,RGP各组各时间点Notch1蛋白阳性细胞率均显著低于CON组(P<0.05),且随时间延长Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;RGP C组中Jagged1阳性细胞率诱导后1d时具有明显的上升趋势,而后显著下降(P<0.05),BDNF组基本无Jagged1蛋白表达。Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果类似。结论地黄多糖具有诱导BMSCs向神经元样细胞分化的作用,且可影响Notch1和Jagged1蛋白的表达。

怀地黄多糖的含量测定

采用苯酚 硫酸比色法对怀地黄的中性多糖进行含量测定 ,测定波长 483nm ,多糖换算因子f=2 .332 ,测得多糖含量为 6 .5 9%。

阳离子化地黄多糖:一种新型非病毒基因传递载体

通过氧化、席夫碱反应及与氮丙啶的接枝反应,对地黄多糖(RGP)进行阳离子化改性,得到新型载体阳离子化地黄多糖(C-RGP)。利用红外光谱、核磁共振氢谱、热重分析对C-RGP进行结构表征。粒径、电位分析以及琼脂糖凝胶电泳结果显示,C-RGP可以通过静电作用负载质粒脱氧核糖核酸(DNA)。噻唑蓝实验表明该载体没有细胞毒性。当构建载体与绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP)质量比为18/1时,转染效率高达(90±0.25)%。载体负载核糖核酸(RNA)干扰(RNAi)表达载体pshEGFR转染肝癌细胞SMMC-7721,靶基因hEGFR mRNA表达下调(67±1.61)%。

熟地和制首乌多糖对贫血小鼠骨髓有核细胞数和细胞周期的影响

目的:观察熟地多糖(RPS)和制首乌多糖(PPS)对骨髓抑制贫血小鼠外周血象、骨髓有核细胞(BMC)数和细胞周期的影响。方法:用60Co辐射和腹腔注射环磷酰胺(Cy)及氯霉素(Ch),建立骨髓抑制贫血小鼠模型,分别提取熟地和制首乌多糖,腹腔注射RPS(20mg/kg)和PPS(25mg/kg),观察对外周血象、BMC数的影响,并用流式细胞仪分析细胞周期。结果:RPS和PPS均能一定程度促进外周血象的恢复,明显提高骨髓抑制贫血小鼠BMC数量(P<0.01);流式细胞术分析表明,G0/G1期细胞比例明显减少(RPS:P<0.01,PPS:P<0.05),S期细胞比例明显增加(RPS:P<0.01,PPS:P<0.01)。结论:RPS、PPS能促进骨髓抑制贫血小鼠骨髓抑制的恢复,促进骨髓有核细胞进入增值周期。

地黄多糖对过氧化氢损伤大鼠脂肪间充质干细胞的保护作用

目的:研究地黄多糖对过氧化氢损伤大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的保护作用,为ADMSCs的应用提供实验依据。方法:分离、培养并鉴定大鼠脂肪间充质干细胞。取第3代ADMSCs,随机分为7组,A:H2O2损伤组;B、C、D、E、F分别为H2O2损伤加地黄多糖各浓度作用组(1mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L);G:正常对照组,对应于分组,加入不同浓度地黄多糖培养24h,加250μmol/L过氧化氢(H2O2)作用2h,诱导ADM-SCs损伤,然后用MTT法检测细胞存活情况,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的水平。结果:A组与G组相比较存活细胞显著减少(P<0.01)、LDH水平明显增高(P<0.01)。地黄多糖各浓度组与A组比较,存活细胞显著增加,LDH水平明显降低,而且呈浓度依赖性。结论:地黄多糖可以抑制H2O2引起的ADMSCs减少和细胞培养上清中LDH含量的升高,减轻H2O2对ADMSCs的损伤,对ADMSCs具有保护作用。

基于古法特色炮制前后的地黄饮片及其多糖对衰老模型大鼠的抗氧化作用比较

目的:比较地黄特色炮制过程中鲜地黄、干地黄、熟地黄及其炮制前后多糖对衰老模型大鼠的抗氧化作用差异,为地黄的加工炮制提供参考。方法:按照古法特色炮制方法制备熟地黄样品,保留加工过程中鲜地黄、干地黄样品,并采用水提醇沉法提取鲜地黄和熟地黄中的粗多糖。将96只大鼠分为空白组(水)、模型组(水)、阳性对照组[维生素C,100 mg/(kg·d)]、鲜地黄组[700mg/(kg·d)]、干地黄组[135 mg/(kg·d)]、熟地黄组[135 mg/(kg·d)]、鲜地黄多糖组[1 400 mg/(kg·d),以鲜地黄质量计]和熟地黄多糖组[270 mg/(kg·d),以熟地黄质量计],每组12只。除空白组外,其余各组大鼠均于颈背部皮下注射D-半乳糖[125 mg/(kg·d)]复制亚急性衰老模型,并于造模同时灌胃给药,每日给药1次,连续给药56 d。末次给药后,测定大鼠肝、脑、肾、脾、心脏、胸腺指数,并测定其血清和肝、脑、肾组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量。结果:与空白组比较,模型组大鼠各脏器指数以及血清和脑、肝、肾组织中T-AOC和SOD活力、CAT活力均显著降低(P<0.05或P<0.01),MDA含量均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,鲜地黄组大鼠脑、肝、肾指数以及血清和肾组织中SOD活力升高不显著(P>0.05);干地黄组大鼠肾指数以及血清和脑组织中T-AOC,血清和肝、肾组织中SOD活力升高不显著(P>0.05);鲜地黄多糖组大鼠肾指数以及血清和脑组织中T-AOC,血清中SOD活力升高不显著(P>0.05);其余各组大鼠脏器指数,血清和组织中TAOC、SOD、CAT活力均显著升高(P<0.05或P<0.01);各给药组大鼠血清及脑、肝、肾组织中MDA含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与鲜地黄组比较,干地黄组大鼠血清中T-AOC显著降低(P<0.01),其余测定指标差异无统计学意义(P>0.05);熟地黄组大鼠肾、脾指数显著升高(P<0.05),肾组织中T-AOC,血清和脑、肾组织中SOD活力,脑、肝组织中CAT活力均显著升高(P<0.05或P<0.01),脑、肝组织中MDA含量显著降低(P<0.01);熟地黄组大鼠脑和肝组织中CAT活力显著高于阳性对照组(P<0.01)。与鲜地黄多糖组比较,熟地黄多糖组大鼠脾、肾指数显著升高(P<0.05或P<0.01),血清和脑、肝、肾组织中T-AOC、SOD活力、CAT活力均显著升高(P<0.05或P<0.01)并且其脑、肝、肾组织中T-AOC和CAT活力均显著高于阳性对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:在提高衰老模型大鼠脏器指数以及增强其血清和脑、肝、肾组织中抗氧化酶活力方面,熟地黄优于鲜地黄和干地黄,熟地黄多糖优于鲜地黄多糖。古法特色炮制地黄过程中多糖的改变提高了其抗氧化能力。

地黄叶和茎的解剖学及组织化学研究

采用解剖学和组织化学方法对地黄叶和茎的显微结构以及梓醇、多糖的分布进行观察研究,以明确梓醇和多糖在地黄叶和茎中的分布特征。结果显示:(1)地黄叶的上、下表皮均分布有腺毛和非腺毛,腺毛都属于头状腺毛,包括长柄和短柄的头状腺毛,两类腺毛的分泌物化学成分主要是黄酮和多糖;叶的上、下表皮上都分布有无规则型气孔,下表皮的气孔密度比上表皮的大,但气孔指数相差不大;栅栏组织由2～3层薄壁细胞构成,排列紧密,海绵组织薄壁细胞形状无规则,细胞间隙大。(2)组织化学研究表明,海绵组织中黄斑样的薄壁细胞是梓醇和多糖的贮存场所,这类薄壁细胞在叶片边缘的齿末端处最为集中,茎的皮层、韧皮部和木质部的薄壁细胞也都是梓醇和多糖的贮存场所。

鲜地黄片的微波真空干燥工艺研究

研究了微波功率、真空度、切片厚度、装载量对微波真空干燥鲜地黄片特性的影响,设计了四因素三水平的正交实验,通过比较干燥时间、还原糖得率和多糖得率等指标,优化工艺参数。结果表明,微波干燥过程分升速、恒速和降速三个过程;影响鲜地黄片微波真空干燥特性的因素主次为:切片厚度>微波功率>真空度>装载量。较优组合是:切片厚度12mm,微波功率800W,真空度0.06MPa,装载量150g。

不同炮制工艺熟地黄多糖单糖分析及其对卵巢颗粒细胞的影响

目的研究九蒸九晒、九蒸九烘、现代法炮制熟地黄及生地黄多糖的单糖组成、及其对大鼠卵巢颗粒细胞增殖活性的影响。方法通过水提醇沉、活性炭除色素、TCA法脱蛋白、无水乙醚和丙酮除小分子化合物后获取多糖,采用苯酚硫酸法测定总多糖含有量;用4 mol/L三氟乙酸水解多糖,加盐酸羟胺进行衍生化反应,采用气相色谱法对其单糖组成进行分析,MTT法检测各组分多糖作用于大鼠卵巢颗粒细胞24 h的增殖情况。结果九蒸九晒熟地黄的多糖含有量最多,达1.625%,九蒸九烘熟地黄多糖含有量最少,只占0.949%;4种炮制工艺地黄多糖中均含有阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖及半乳糖醛酸,除生地黄多糖外其余熟地黄多糖还含有鼠李糖;不同质量浓度多糖溶液对卵巢颗粒细胞均有一定的促进作用,质量浓度150μg/mL时对卵巢颗粒细胞增殖效果最显著。结论该方法简便、准确、快速,可用于熟地黄的质量控制,对卵巢颗粒细胞有增殖效果。

地黄多糖干预对多次低剂量X线照射小鼠血清性激素水平的影响

目的探讨地黄多糖（RPS）干预对多次X线照射后小鼠血清性激素水平的影响。方法选择雄性昆明小鼠70只[5~6周龄,体重（22±2）g）],随机分为A组（单纯照射组,21只）、B组（照射＋200mg/kg RPS灌胃组,21只）、C组（照射＋800mg/kg RPS灌胃组,21只）、D组（对照组7只）;再将A、B、C组分别随机分为3组,每组7只。所有小鼠在照射前5d开始每天灌胃1次,其中A组及D组给予0.2 mL生理盐水灌胃,B组及C组分别给予200 mg/kg、800 mg/kgRPS溶于0.2mL生理盐水灌胃,共灌胃20次;A、B、C组采用低剂量X线每天1次全身照射,共15次;单次照射剂量分别为0.025Gy、0.075Gy、0.100Gy,剂量率为0.025Gy/min。所有小鼠在末次照射结束后48h内在麻醉通过下腔静脉采血,脱颈法处死小鼠、摘取睾丸并称重;采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清睾酮（T）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）水平。结果随着X线照射剂量的增加,小鼠睾丸重量及睾体比值逐渐降低（P〈0.05）;给予不同剂量RPS灌胃可以增加0.1Gy照射后小鼠的睾体比值,差异有统计学意义（P〈0.05）;血清FSH在0.1Gy单纯照射组（A组）较对照组（D组）明显增高[（22.54±7.19）U/L vs.（31.61±6.07）U/L]（P〈0.05）,而LH、T的变化在A组和D组中差异均无统计学意义（P〉0.05）;给予不同剂量（200mg/kg及800mg/kg）RPS灌胃干预后,不同低剂量X线照对小鼠血清性激素水平均未产生明显影响。结论多次低剂量X线全身照射在大剂量时可引起小鼠血清FSH水平和睾体比值改变,RPS干预对多次低剂量X线全身照射小鼠引起的生殖内分泌功能损伤有一定保护作用。

螺旋藻粉、地黄多糖和益母草提取物对蛋鸡蛋品质和部分生化指标的影响

为研究螺旋藻粉、地黄多糖和益母草提取物对蛋鸡蛋品质和部分生化指标的影响,试验选取210日龄海兰灰蛋鸡495只,采用三因素一次回归正交设计,随机分为11组,即1个对照组,10个试验组,分别在饲粮中添加螺旋藻粉5、10、15 g/kg,地黄多糖提取物2.5、3.0、3.5 g/kg,益母草提取物0.7、0.9、1.1 g/kg。结果表明:1饲粮添加螺旋藻粉、地黄多糖和益母草提取物,使平均蛋重、蛋黄颜色、哈夫单位明显增加,胆固醇、甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。添加螺旋藻粉10 g/kg、地黄多糖3.0 g/kg和益母草提取物0.9 g/kg,哈氏单位比对照组增加了9.04%(P<0.05)。胆固醇、甘油三酯均以添加螺旋藻粉15 g/kg、地黄多糖提取物3.5 g/kg和益母草提取物1.1 g/kg为最佳。2随螺旋藻粉添加量的增加,蛋黄颜色、铁含量显著增加,胆固醇、甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。随地黄多糖提取物添加量的增加,蛋壳强度极显著增加(P<0.01),蛋黄颜色有增加的趋势,甘油三酯含量有降低的趋势(P<0.1)。随益母草提取物添加量的增加,蛋黄颜色显著增加(P<0.05),蛋壳强度极显著增加(P<0.01)。3螺旋藻粉和地黄多糖提取物对平均蛋重、蛋壳强度的拮抗作用极显著(P<0.01),益母草提取物和地黄多糖提取物对蛋壳强度、胆固醇含量的拮抗作用显著(P<0.05)。考虑相互作用和经济效益,添加螺旋藻粉10 g/kg、地黄多糖提取物3.0 g/kg和益母草提取物0.9 g/kg的效果最好。