熟地黄-山茱萸药对通过PI3K/AKT通路对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡的影响

目的研究熟地黄-山茱萸药对通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导小鼠脑神经瘤细胞株(N2a)细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35(20μmol/L)处理N2a细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h。采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western Blot法检测cleaved Caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果与空白对照组比较,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组比,高剂量组N2a细胞的凋亡率和Caspase-3活性降低,p-AKT/AKT比值升高(P<0.05)。结论熟地黄-山茱萸醇提物可对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与促进PI3K/AKT信号通路有关。

静宁颗粒治疗56例小儿多动症气阴两虚证临床观察

目的探讨静宁颗粒经验方治疗小儿多动症气阴两虚证患儿的临床疗效及不良反应。方法采用中医、西医相应诊断标准纳入于2013年9月到2015年10月期间就诊于北京中医药大学东直门医院儿科门诊、北京市和平里医院儿科门诊的注意力缺陷多动障碍患儿60例,服用静宁颗粒12周,采用前后自身对照,观察有效率、中医证候评分、多动指数、划销试验、注意力缺陷多动障碍量表(SNAP-IV)以及相关安全指标和记录不良反应。结果 60例患儿中,脱落4例,总共完成56例临床观察。痊愈2例,显效12例,有效36例,无效6例,总有效率85.71%。治疗前后中医证候总积分、中医主要证候总积分、划销测验中计分、漏划数具有显著统计学差异(P<0.01);多动指数、注意缺陷多动障碍量表积分改善具有统计学差异(P<0.05);划销测验中错划数不具统计学差异(P>0.01)。结论静宁颗粒治疗小儿多动症气阴两虚型具有较好临床疗效和安全性。

壮骨关节丸中肝毒性药材的筛选研究

目的观察壮骨关节丸及所含药材对Beagle犬的肝脏毒性,寻找和确定壮骨关节丸引起肝损害的原因。方法按照故障排除法将壮骨关节丸全方拆分为最可能组(补骨脂组)、可能组(淫羊藿加独活组、乳香加没药组)、最不可能组(熟地组、续断加狗脊和鸡血藤组、骨碎补加桑寄生和木香组),与对照组和全方组进行Beagle犬的肝毒性对比研究,初步寻找出其中引起肝损害的药材组。将壮骨关节丸去掉毒性药材与全方进行肝毒性比较,对毒性药材进一步确认,每周称动物体重,从第3周开始监测血清生化指标。连续给药6个月,实验结束后取肝、脾、肾和肾上腺称重并计算脏器系数,对相应脏器进行病理检查。结果初筛发现乳香加没药组0.70g/kg犬血清中ALP、TC以及肝系数明显高于对照组,并且有1只犬肝脏汇管区有轻度胆管增生和胆汁淤积,熟地组犬血清TC水平升高,补骨脂组0.35g/kg犬血清ALP也高于正常对照组。壮骨关节丸全方组3.0g/kg从药后12周开始体重明显低于对照组,给药6周后ALP显著升高,3周后TC显著升高,肝、肾和肾上腺系数显著高于对照组,而去掉乳香和没药后的去乳香没药组2.65g/kg在6个月的实验中体重和ALP基本正常,仅13～20周高于对照组,且显著低于壮骨关节丸全方组,但TC依然显著升高。病理组织学检查表明全方组有3只犬肝脏内有轻度胆汁淤积,而对照组和去乳香没药组犬的肝脏均无胆汁淤积。结论壮骨关节丸中引起胆汁淤积的主要药材是乳香和没药,补骨脂对肝功能也有轻微影响。

六味地黄汤及“补泻”药对对肾阴虚模型小鼠HPA轴功能及肾上腺组织形态学的影响

目的观察六味地黄汤及三个＂一补一泻＂药对对肾阴虚模型小鼠下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴功能及肾上腺形态的影响。方法将小鼠随机分为空白组、模型组和给药组（六味地黄汤组、山茱萸-牡丹皮组、熟地黄-泽泻组、山药-茯苓组）共6个试验组;连续9 d分别灌胃给予以上对应药物;第5-9天,除空白组灌胃蒸馏水外,其他各组按50 mg/kg体质量每天灌胃氢化可的松注射液,称体质量,测定环磷酸腺苷（c AMP）、环磷酸鸟苷（c GMP）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇（Cor.）含量,观察肾上腺病理切片。结果肾阴虚模型小鼠体质量、血浆c GMP含量降低,血浆c AMP、血清ACTH、Cor.含量升高,与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,肾上腺组织受损;与模型组比较,六味地黄汤能上调模型小鼠体质量、血浆c GMP含量,下调血浆c AMP含量、血清ACTH、Cor.含量（P〈0.05,P〈0.01）,修复受损肾上腺组织;山茱萸-牡丹皮药对能下调模型小鼠血浆c AMP、血清ACTH含量（P〈0.01）,修复受损肾上腺组织。结论六味地黄汤能改善肾阴虚证,其作用机制可能与其降低垂体分泌的ACTH含量、下调肾上腺分泌的Cor.含量,改善HPA轴的功能及肾上腺形态有关。其中山茱萸-牡丹皮药对是该方改善肾阴虚证的主要药效物质基础。

六味地黄汤及其水提醇沉物对2型糖尿病肾阴虚证大鼠脂代谢的影响

目的观察六味地黄汤及其水提醇沉物对2型糖尿病肾阴虚证大鼠脂代谢的影响。方法采用高脂乳灌胃结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)再灌胃氢化可的松的方法建立2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型。设空白组、模型组、六味地黄汤组、六味地黄汤水提醇沉物组、罗格列酮组,分组给药30 d,模型组和空白组给等量生理盐水,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血清cAMP、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)。结果模型大鼠FBG≥16.7 mmoL/L,cAMP水平为(1.32±0.04)mmoL/L,成功建立了2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型;六味地黄汤及其水提醇沉物均能降低2型糖尿病肾阴虚证大鼠空腹血糖值及CHO、TG、LDL-C水平,升高HDLC水平,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),改善脂代谢。结论六味地黄汤干预2型糖尿病肾阴虚证的作用可能与其改善脂代谢有关,其水提醇沉物可能是六味地黄汤改善2型糖尿病肾阴虚证的药效物质基础之一。

熟地黄和茯苓对山茱萸中3种成分煎出量的影响

目的研究熟地黄Rehmanniae Radix Preparata(A)和茯苓Poria(B)对山茱萸Corni Fructus(C)中马钱苷、莫诺苷、5-羟甲基糠醛煎出量的影响。方法将这3种药材互相组合,分为7组(A、B、C、A+B、A+C、B+C、A+B+C),HPLC法测定3种成分含有量。结果与山茱萸单煎相比,熟地黄与山茱萸合煎,或熟地黄、茯苓与山茱萸合煎时,马钱苷和5-羟甲基糠醛煎出量降低,莫诺苷煎出量提高;茯苓与山茱萸合煎时,该情况恰好相反。结论山茱萸、熟地黄、茯苓合煎提高了莫诺苷煎出量,可能使合煎液药效更强。

山茱萸与熟地配伍时山茱萸中主要组分变化规律研究

为了研究山茱萸与熟地两种药物不同比例配伍时山茱萸中主要组分的变化规律,利用高效液相色谱(HPLC)法和电喷雾质谱(ESI-MS)法比较山茱萸和熟地药材单煎液、合煎液和单煎合并液中山茱萸主要组分的含量变化和各溶液的谱学行为。在一定质量比例内(m(山茱萸)∶m(熟地)≤4∶8),山茱萸与熟地共煎有相互协同溶出的效应。合煎液中山茱萸莫诺苷、马钱苷和没食子酸组分的百分含量随熟地配伍比例的增加均呈现线性变化规律。不同的配伍方式(合煎与单煎合并)会产生不同的新物质。结果表明,熟地组分的存在对山茱萸组分的溶出有较大影响,但该影响不受温度的限制。

药对生地山茱萸抗糖尿病大鼠糖化产物生成的作用研究

目的:观察药对生地山茱萸抑制糖尿病大鼠血清及组织内糖化产物生成作用。方法:高脂饲料喂养,一次性腹腔注射STZ,筛选合格的糖尿病大鼠模型,灌胃给药12周。12周末,取血,以肝素:全血(0.1:30)分装制备红细胞,另取全血静置,分离制备得血清。处死动物,取出左肾,切取肾脏皮质。比色法测定红细胞中GHb含量、血清中GSP含量,ELISA法检测肾皮质和血清中AGEs的含量。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR法)检测肾皮质中RAGEmRNA的表达。结果:糖尿病大鼠血中GHb与GSP显著升高(P<0.05),药对组下降较为明显(P<0.05,P<0.01);肾皮质与血清中AGEs升高明显,但药物组仅有下降趋势;与此同时,RAGEmRNA表达与AGEs检测结果一致。结论:药对生地山茱萸抑制糖尿病大鼠血清、红细胞和肾皮质中糖化产物的生成。

二维相关红外光谱对熟地黄“加味(砂仁)炮制”的研究

目的:对不同方法制备的熟地黄进行无损快速鉴别研究。方法:采用傅立叶红外光谱法和二维相关红外光谱分析方法和技术。结果:酒炖熟地、砂仁制熟地和砂仁拌熟地在一维红外光谱和二阶导数谱差异不明显,而在二维相关光谱显示较大差异。结论:该方法为中药炮制尤其是加辅料或加味中药"复制"炮制的研究提供一个崭新的思路。

六味地黄汤对快速衰老小鼠认知功能及Wnt3a、GSK-3β表达的影响

目的研究六味地黄汤对D-半乳糖(D-gal)致快速衰老小鼠认知功能及Wnt3a、GSK-3β表达的影响。方法以500 mg/(kg·d)的D-半乳糖颈部皮下注射复制快速衰老小鼠模型,将动物随机分为正常组,模型组,六味地黄(简称六味)高、中、低剂量组,Vit E组,给予相应干预,历时8周。观察小鼠的体质量变化,采用Morris水迷宫实验评价小鼠的认知功能,免疫组化法、RT-q PCR法检测Wnt3a、GSK-3β的表达。结果六味地黄汤对快速衰老小鼠体质量及水迷宫实验的影响:模型组与正常组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01);各用药组与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01);六味高剂量组与其他用药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);六味地黄汤对快速衰老小鼠认知功能及Wnt3a、GSK-3β表达的影响:模型组与正常组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01),各用药组与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01),六味高剂量组与其他用药组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论六味地黄汤可以有效改善D-半乳糖致快速衰老小鼠的学习记忆障碍;增加衰老小鼠Wnt3a的表达,激活Wnt信号通路,下调GSK-3β的表达可能是六味地黄汤延缓衰老健脑益智的作用机制。

试析六味地黄丸“三补”药的核心作用

方剂是由药物组成的,药物通过有序的配伍,增强自身功用,发挥药物间相辅相成作用,使各具特性的药物组合成为一个整体,而组成药物中的核心配伍药物的作用则显得尤为关键,它决定着整个方剂的主要功用和主治取向。试从中医方剂配伍理论、中医文献资料、现代药理研究、中医临床运用等方面论证熟地黄、山茱萸、山药作为六味地黄丸"三补"药的核心作用。

补肾活血颗粒的薄层鉴别研究

目的:建立补肾活血颗粒中熟地、杜仲和枸杞的专属性薄层鉴别。方法:通过考察不同的制备及薄层展开条件,优选出制剂中熟地、杜仲和枸杞的薄层鉴别方法。结果:熟地的最佳溶剂为水-乙酸乙酯,最佳展开体系为三氯甲烷-甲醇(7:3);杜仲的最佳的提取溶剂为无水乙醇,最佳的展开体系为正己烷-乙酸乙酯(9:1);枸杞的最佳的提取溶剂为三氯甲烷,最佳的展开体系为乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(3:2:1)。结论:补肾活血颗粒的薄层鉴别专属性、重复性均较好,可有效控制制剂的质量。

卢尚岭大剂量用药经验总结与思考

卢尚岭教授临证常重用益母草、土茯苓、丹参、葶苈子、石菖蒲、附子、川乌、枳实、生地黄、麦冬、蜈蚣等药物,每取佳效。其用药主要以长期临床实践经验为依据,同时也因病位高下、病性虚实、病势急缓而异。单味药治病,也常取大剂奏效。从卢老的用药经验可知,大剂量用药需熟谙药性,有胆有识。人体生理功能的改变、疾病病情的需要、药物性状的古今差异可能是增加大剂量用药需求的影响因素。

防治骨质疏松症常用单味中药实验研究概况

中医药对骨质疏松症的防治具有很高的临床价值和突出优势。研究证实,中药防治本病有其特殊的疗效且副作用极少。本文对淫羊藿、熟地黄、杜仲、黄芪、骨碎补、补骨脂、续断7味中药在防治骨质疏松症方面的实验研究作一简要总结,为指导临床用药和进一步用先进的科学研究方法和手段来揭示其治疗骨质疏松症的机理,提高中医药防治骨质疏松症的水平提供参考。

基于网络药理学及分子对接探讨熟地黄-山茱萸药对治疗阿尔茨海默病的潜在机制

目的采用网络药理学及分子对接技术探讨熟地黄-山茱萸药对治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的活性成分和潜在分子机制。方法通过TCMSP数据库、SwissTargetPrediction平台、GeneCards和DisGeNET数据库及查阅文献收集并获取熟地黄和山茱萸的主要化学成分、作用靶点及AD疾病的相关靶点。将疾病靶点与药物靶点取交集获得熟地黄-山茱萸药对治疗AD的潜在靶点,将这些交集靶点导入STRING数据库,建立蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。利用Cytoscape软件对PPI网络进行拓扑分析并提取核心靶点,利用CytoNCA插件计算度值,筛选出药对的关键成分。通过Metascape平台进行GO和KEGG通路富集分析,并构建“中药-相关关键成分-关键靶点-通路”网络,然后使用AutoDock Vina和PyMOL软件对核心靶点和关键成分进行分子对接。结果筛选出熟地黄-山茱萸药对治疗AD的10个关键成分、718个药物靶点和450个疾病靶点,药物与疾病的共同靶点120个。PPI网络最终筛选确定了7个关键核心靶点。GO生物过程分析发现关键核心靶点主要富集于Notch受体加工、生物碱代谢过程以及多巴胺分解代谢过程等。KEGG富集分析得到10条作用通路。在分子对接中,各核心靶点与各关键成分表现出较强的结合活性。结论熟地黄-山茱萸药对可能依靠墙草碱、四氢鸭脚木碱和亚油酸乙酯等关键核心成分,通过对苏氨酸激酶1(AKT1)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、肿瘤蛋白P53(TP53)和肿瘤坏死因子(TNF)等靶点的调节,参与多个相关信号通路,发挥抑制神经元凋亡、抗炎、增强突触可塑性等神经元保护作用以治疗AD。

经方辨治抑郁症六法

抑郁症属于中医学＂郁证＂范畴。郁证是由于情志不舒、气机郁滞所引起的一类病证,主要表现为心情抑郁,情绪不宁,胸胁胀痛,或易怒喜哭,以及咽中如有异物梗阻、失眠等各种复杂症状）^（[1]）。《金匮要略·脏腑经络先后病脉证治》提出三因致病学说：＂千般疢难,不越三条。一者,经络受邪,入脏腑,为内所因也;二者,四肢九窍,血脉相传,壅塞不通,为外皮肤所中也;三者,房室、金刃、虫兽所伤。以此详之,病由都尽。

基于网络药理学的熟地黄-山茱萸药治疗阿尔茨海默病的作用机制分析

目的采用网络药理学方法筛选熟地黄-山茱萸药对治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的活性成分和作用靶点,明确治疗AD的作用机制。方法利用TCMSP及BATMAN数据库预测熟地黄、山茱萸的有效成分及有效活性成分对应的靶点;运用TTD数据库,GAD数据库和TCMSP数据库筛选AD的相关靶点;通过Cytoscape软件建立利用"熟地黄-山茱萸有效活性成分-AD疾病靶点"网络模型;DAVID数据库对"熟地黄-山茱萸有效活性成分-AD疾病靶点"进行GO注释分析和KEGG通路分析。结果筛选出熟地黄-山茱萸药共14个活性成分;14个吸收成分不仅调节人前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)等10个靶标,还影响44个生物过程(如乙酰胆碱受体活性、乙酰胆碱酯酶活性等)和6条代谢途径(钙信号通路、胆碱能突触信号通路等)。结论熟地黄-山茱萸药对可通过多成分、多靶点、多途径发挥其抗AD的作用,其主要生物学机制可能与钙信号通路、胆碱能突触等信号通路有关。

人参-黄芪与熟地-山茱萸影响肾上腺皮质瘤细胞皮质酮生成的比较研究

目的研究“补气生津”人参-黄芪与“填精补肾”熟地-山茱萸对皮质激素生成的影响。方法采用0.25-8 g·L^(-1)人参-黄芪与0.25-8 g·L^(-1)熟地-山茱萸水煎醇沉液分别干预小鼠肾上腺皮质瘤细胞(Y1 adrenocortical cell,Y1细胞)48 h,采用MTT比色法(MTT assay,MTT)检测细胞增殖,运用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞分泌皮质酮含量,实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测类固醇激素合成酶基因表达,免疫蛋白印迹法(Western blot,WB)检测蛋白表达。结果与空白组(Control,Con)比较,0.25-8 g·L^(-1)人参-黄芪和熟地-山茱萸均抑制Y1细胞增殖(P<0.01);4 g·L^(-1)和8 g·L^(-1)人参-黄芪促进皮质酮分泌(P<0.01),4 g·L^(-1)和8 g·L^(-1)熟地-山茱萸抑制皮质酮分泌(P<0.01);8 g·L^(-1)人参-黄芪增强CYP11A1、CYP21A2、CYP11B1蛋白表达(P<0.05),8 g·L^(-1)熟地-山茱萸抑制CYP11A1、CYP21A2、CYP11B1蛋白表达(P<0.01);8 g·L^(-1)人参-黄芪抑制Star基因表达(P<0.05),而8 g·L^(-1)熟地-山茱萸促进Star基因表达(P<0.01),4 g·L^(-1)与8 g·L^(-1)人参-黄芪和0.25-8 g·L^(-1)熟地-山茱萸均能显著抑制Cyp11a1基因表达(P<0.01),8 g·L^(-1)人参-黄芪和1-8 g·L^(-1)熟地-山茱萸都抑制Cyp21a1基因表达(P<0.05),1-8 g·L^(-1)人参-黄芪和0.25-8 g·L^(-1)熟地-山茱萸均抑制了Cyp11b1基因表达(P<0.05)。与佛司可林(Forskolin,FSK)组比较,人参-黄芪与熟地-山茱萸预处理Y1细胞后,FSK不能诱导Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b11基因表达(P<0.01)。结论人参-黄芪促进皮质酮分泌,熟地-山茱萸抑制皮质酮分泌,主要通过调节类固醇激素合成酶表达发挥药效。

中西医结合治疗慢性肾小球肾炎38例疗效观察

目的观察中西医结合治疗慢性肾小球肾炎疗效。方法 76例患者随机分成治疗组和对照组各38例,对照组予西医常规治疗方法,治疗组在对照组基础上给予中药治疗,治疗3个月后观察24 h尿蛋白定量、尿红细胞数、血肌酐、血尿素氮变化情况。结果治疗组总有效率92.1%,明显高于对照组65.8%(P<0.05);治疗组治疗前后及治疗后与对照组比较,24 h尿蛋白定量、尿红细胞数有明显降低(P<0.01);肌酐有明显降低(P<0.05)。结论中西医结合治疗慢性肾小球肾炎有明显优势。

传统明目中药材复配对视网膜损伤小鼠抗氧化的影响

目的探讨各复配组方对视网膜损伤小鼠的影响。方法将小鼠分为正常对照组、模型组、熟地黄+枸杞子组、熟地黄+菊花组、熟地黄+铁皮石斛组、熟地黄+枸杞子+菊花组共6组,分别对小鼠连续干预8周后进行强光造模,光照结束后用采集晶状体及肝脏组织进行抗氧化的指标检测。观察晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC),肝组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、及GSH-Px的活力。结果模型组晶状体GSH-Px与T-AOC值均显著低于正常对照组(P<0.05);各复配组GSH-Px和T-AOC值与模型组比较均显著升高(P<0.05)。在肝脏抗氧化指标中,模型组与正常组比较,MDA含量升高,SOD活力、CAT活力和GSH-Px活力下降;与模型组比较,各复配组均可降低MDA含量,升高SOD活力、CAT活力和GSH-Px活力,且均具有显著性差异(P<0.05)。结论各复配组均对光损伤造成的氧化损伤具有缓解作用。