熟地黄-山茱萸药对通过PI3K/AKT通路对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡的影响

目的研究熟地黄-山茱萸药对通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导小鼠脑神经瘤细胞株(N2a)细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35(20μmol/L)处理N2a细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h。采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western Blot法检测cleaved Caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果与空白对照组比较,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组比,高剂量组N2a细胞的凋亡率和Caspase-3活性降低,p-AKT/AKT比值升高(P<0.05)。结论熟地黄-山茱萸醇提物可对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与促进PI3K/AKT信号通路有关。

5-HMF高效液相色谱检测方法的建立及功能糖与不同产地党参、何首乌和熟地中5-HMF含量分析

本试验旨在建立5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)的高效液相色谱检测方法,检测不同产地党参、制首乌、熟地黄以及5个不同批次功能糖中5-HMF含量。采用C_(18)(4.6 mm×250.0 mm,5μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-水(8∶92),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL,紫外检测器,检测波长为280 nm。经方法学考察,显示该方法线性关系良好;精密度试验测定峰面积RSD平均值为1.438%;重复性试验显示HPLC重复性良好;稳定性试验峰面积RSD范围为1.338%~7.307%;加标回收率显示良好。中药及功能糖5-HMF含量检测结果显示,党参、制首乌和熟地黄相比,熟地黄中5-HMF含量较高,党参中5-HMF含量较低,其中又以河北产熟地黄中5-HMF含量最高。不同批次功能糖中5-HMF含量无显著性差异,但其含量是河北产熟地黄的90~100倍。通过现代化技术,用功能糖成功复制了中药中的活性成分5-HMF,降低了其生产成本,具有良好的发展前景。

熟地黄治疗绝经后骨质疏松症骨代谢紊乱的“性-效-用”特点探讨

绝经后骨质疏松症是一种以骨吸收-骨形成耦联失衡为基本发病机制的全身性代谢性疾病,属中医“骨痿”范畴。基于中医学理论,骨痿为病,以“筋骨肉病在外,肝脾肾虚在内”为主要病机特点。熟地黄之效在脏表现为补肝脾肾,补血滋阴,益精;在体表现为填骨髓、长肌肉、通利血脉。基于现代研究结果,熟地黄治疗绝经后骨质疏松症的作用是多种有效物质共同作用的结果,其可能通过多环节、多靶点调控骨吸收和骨形成的耦联。本文通过梳理国内外文献,从熟地黄的“性-效-用”特点3个维度,结合中医“五脏一体观理论”的认识,归纳及探讨熟地黄治疗绝经后骨质疏松症骨代谢紊乱的作用机制,旨在贯彻中药现代化研究的中西医结合研究范式,为更好地研究熟地黄治疗绝经后骨质疏松症的作用机制和挖掘其临床药用价值提供参考。

基于R语言探讨古代中医文献中治疗骨质疏松症的中药用药规律

【目的】挖掘分析古代中医文献中采用中药治疗骨质疏松症的用药规律,为临床运用中药治疗骨质疏松症提供参考。【方法】以“骨痿”“骨枯”“肾痿”为关键词,计算机检索第5版《中华医典》中采用内服中药治疗骨质疏松症的方剂。采用Excel软件对方药信息进行提取,采用R语言对中药进行使用频次分析、关联规则分析及聚类分析。【结果】共筛选得到治疗骨质疏松症的方剂88首,中药183味,总频次为902次;高频中药(使用频次≥10次)有25味,使用频次居于前5位的依次为牛膝、熟地黄、菟丝子、肉苁蓉、杜仲。高频药物根据其功效进行分类,主要可分为补虚药、利水渗湿药、收涩药、清热药、温里药、祛风湿药。关联规则分析得到281条关联规则,其中关联度最高的前5个药对为熟地黄-牛膝、菟丝子-肉苁蓉、菟丝子-牛膝、肉苁蓉-牛膝、杜仲-牛膝。关联规则分析和聚类分析形成以牛膝、熟地黄、菟丝子、肉苁蓉、杜仲为基础的核心药物组合。【结论】古代医家采用中药治疗骨质疏松症以补肾为基本原则,酌情加入针对湿浊、血瘀、脾虚等病机的中药。挖掘得到的核心药物组合可为骨质疏松症的临床治疗提供一定的参考。

金匮肾气丸历史演变考证

查阅历代医方著作、本草典籍,对金匮肾气丸名称以及药物组成演变进行考证。考证发现:金匮肾气丸因出自《金匮要略》而得名,其组成应为八味。在元代时期有部分医家认为金匮肾气丸组成为六味,并将其与六味地黄丸等同,显然这种认识是错误的。明清时期有部分医家认为金匮肾气丸组成为十味,对现代制药产生了较大的影响,但经考证发现,现代十味药物组成的金匮肾气丸是由济生肾气丸演变而来,并非金匮肾气丸原方。所以现在《中药成方制剂》规定金匮肾气丸药物组成为十味并不合理。历代医方著作所载金匮肾气丸多以八味肾气丸、八味丸、桂附地黄丸等名称出现,其药物组成中“地黄”经历了“地黄→熟干地黄→熟地黄”的变化,“桂”经历了“桂→桂心→肉桂”的变化,体现了历代医家中药炮制技术以及中药材分部位用药认识的进步。

基于数据挖掘和网络药理学探讨中药治疗肌肉萎缩的用药规律和作用机制

目的基于数据挖掘分析中药治疗肌肉萎缩的用药规律,运用网络药理学探究核心药对治疗肌肉萎缩的作用机制。方法收集整理中国知网和《中医方剂大辞典》治疗肌肉萎缩的相关方剂,利用中医传承辅助平台(V2.5)探讨用药规律,基于药物频数分析和关联分析获得核心药对。在中药系统药理学数据库与分析平台和Swiss Target Prediction数据库获得核心药对的化学成分及作用靶点,在OMIM、GeneCards和TTD数据库筛选疾病作用靶点,使用在线韦恩分析工具获得药物和疾病的交集靶点,在STRING数据库中进行交集靶点的蛋白质与蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,在Metascape数据库里完成交集靶点的GO及KEGG分析,最后采用分子对接技术完成核心成分和关键靶点的对接验证。结果数据挖掘共筛选出方剂182首,中药201味,以补虚药为主,其中黄芪-熟地黄支持度最高,作为核心药对。核心药对与肌肉萎缩的交集靶点有86个,对应16个化学成分,其中槲皮素、山奈酚和豆甾醇最为重要。经过PPI网络分析得到的关键靶点有AKT1、TNF和IL-6等。GO富集分析得到1616条生物过程,90条细胞组成,117条分子功能。KEGG通路分析得到176条相关信号通路,包括癌症通路、PI3K-Akt信号通路和HIF-1信号通路等。分子对接结果显示,核心成分与关键靶点对接良好,其中豆甾醇与AKT1的结合性最好。结论中药治疗肌肉萎缩以益胃养阴、补血滋阴、健脾益气为主。黄芪-熟地黄药对能通过多成分、多靶点、多通路来干预肌肉萎缩病程。

熟地黄对毁损下丘脑弓状核大鼠学习记忆及下丘脑-垂体肾上腺-海马轴的影响

目的 :观察滋阴药熟地黄益智作用及机理。方法 :采用谷氨酸单钠 (MSG)毁损下丘脑弓状核模型作为肾阴虚学习记忆障碍模型 ;跳台法和Morris水迷宫法观察熟地黄对学习记忆的影响 ;放免法测定血浆ACTH和CORT含量 ,原位杂交观察海马糖皮质激素受体mRNA(GRmRNA)变化 ;测量体温。结果 :熟地黄明显改善MSG大鼠被动回避和空间记忆能力 ,抑制血浆CORT含量和海马GRmRNA表达 ,抑制基础体温升高。结论 :熟地黄具有改善学习记忆作用 ,其机理与抑制血浆CORT含量和海马GRmRNA表达有关。

熟地对去卵巢大鼠骨代谢生化指标及骨密度的影响

目的研究熟地水煎液对去卵巢大鼠骨代谢生化指标及骨密度的影响,探讨熟地对骨质疏松症大鼠的药理作用。方法采用去卵巢大鼠模型,每天灌胃1g/kg、2g/kg及4g/kg3种剂量的熟地水煎液,3个月后检测大鼠血清雌二醇、骨钙素、碱性磷酸酶、钙、磷、尿脱氧吡啶啉、钙、磷等生化指标及股骨骨密度的变化,并与模型组、正常对照组、己烯雌酚组比较。结果与假手术组比较,熟地3个剂量组、己烯雌酚组ALP和BGP均明显升高(P<0·05),E2含量均低于假手术组(P>0·05)。与模型组比较,各用药组ALP、BGP、尿DPD/Cr、Ca/Cr含量均低于模型组(P<0·05)。各用药组大鼠股骨骨密度均较模型组有所升高(P<0·05)。结论熟地可抑制骨吸收,延缓去卵巢大鼠骨量丢失,对骨质疏松症有一定的防治作用。

熟地多糖提取物对小鼠免疫活性影响

目的从熟地黄中提取出多糖，并对其免疫活性进行研究。方法采用水提醇沉法提取熟地多糖，苯酚-硫酸分光光度法测定多糖的含量。分别用绵羊红细胞（SRBC）和卵清蛋白为抗原给小鼠注射后，将熟地多糖分为3个剂量[50，100，200mg／kg·d）]灌服小鼠7d，加强免疫后，检测相应抗体生成水平和血清中自细胞介素-2（IL-2）生成水平，评价其免疫活性。结果熟地多糖的含量为1．45％，回收率为98．53％，相对标准偏差（RSD）为2．28％，线性范围为5～40μg／ml。中剂量实验组SRBC抗体水平（P〈0．05）和卵清抗体水平显著高于对照组（P〈0．01），IL-2激发水平显著高于对照组（P〈0．05）。结论熟地多糖对正常小鼠机体免疫有增强作用。

RP-HPLC双波长法同时测定熟地黄中4种成分的含量

目的建立RP-HPLC双波长同时测定熟地黄中4种成分含量的方法。方法色谱柱为WatersSunfire C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-体积分数0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为λ1=210 nm和λ2=330 nm;流速为1.0 mL.min-1;柱温为30℃。结果梓醇、麦角甾苷、吉奥诺苷B1和马替诺皂苷质量浓度分别在125.0～2 000.0 mg.L-1(r=0.999 9)、11.0～176.0mg.L-1(r=0.999 9)、15.0～240.0 mg.L-1(r=0.999 9)和7.5～120.0 mg.L-1(r=0.999 8)内与峰面积呈良好的线性关系。加样回收率在97.5%～101.3%内。结论该方法灵敏,操作简便,结果可靠,可用于熟地黄药材的质量控制。

熟地黄粗多糖对血虚模型小鼠胸腺和脾脏组织形态的影响

目的:探讨熟地黄粗多糖对血虚模型免疫器官形态的影响。方法:以放血与环磷酰胺并用致小鼠血虚模型为研究对象,将模型动物分为5组,在造模的同时给药,分别灌服大、中、小剂量的熟地黄粗多糖溶液、当归补血口服液和同体积生理盐水,另设一组空白对照组,每天给药1次,连续给药10 d,实验结束时取胸腺和脾脏作病理切片。结果:熟地黄粗多糖组可显著对抗造模所致动物胸腺和脾脏的萎缩,显著增加模型动物胸腺皮质厚度和皮质细胞数,显著增加脾小结大小和皮质细胞数。结论:怀熟地黄多糖可拮抗血虚模型小鼠胸腺及脾脏的萎缩。

FT-IR光谱法对酒炖熟地黄炮制工艺过程的监控研究

目的:跟踪熟地炮制工艺全过程,寻求熟地黄最佳“炮制终点”,规范熟地黄饮片质量标准。方法:利用FT IR红外光谱法,从分子水平,快速、准确,整体宏观监控炮制过程,分析生地黄特征峰和熟地黄特征峰变化趋势和规律。结果:用直观的量化的标准红外光谱谱图来说明“黑如漆,甜如饴”这种传统的经验标准。结论:在地黄传统炮制经验基础上,规范其炮制工艺,制定其饮片质量标准,并为中药炮制质量检测、工艺监控等提供强有力分析手段。

鲜地黄加工炮制后新成分含量变化研究

目的:分析鲜地黄加工炮制成生地黄和熟地黄后新产生成分含量变化。方法:采用HPLC法,研究鲜地黄加工成生地黄及炮制成熟地黄中,新产生的2个化学成分:5-羟甲基麦芽酚(DDMP)和5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量变化,并测定市售生地黄和熟地黄中两者的含量。色谱条件:Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(5∶95);流速1.0 mL·min-1;检测波长280 nm。结果:鲜地黄中未检测到DDMP和5-HMF,加工炮制成生地黄和熟地黄后均检测到,其在熟地黄中的含量高于生地黄,在熟地黄中两者的含量均随炮制时间的延长而逐渐升高,分别炮制至24 h和32 h达到最高,随后降低。在市售3批生地黄和10批熟地黄中均检测到这2个成分,5-HMF的含量熟地黄高于生地黄,DDMP含量生地黄和熟地黄没有明显差异。结论:鲜地黄加工成生地黄及炮制成熟地黄后产生DDMP和5-HMF,含量随炮制时间延长逐渐升高。熟地黄中5-HMF含量与生地黄中有明显差异。

四种归肝经明目中药防护晶状体氧化损伤和上皮细胞凋亡的研究

目的 :探讨四种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对晶状体氧化损伤及晶状体上皮细胞 (lensepithelialcell,LEC)凋亡的防护作用。方法 :将 2 1只 (42眼 )新西兰白兔晶状体分成 7组 :空白对照组、Fenton组、吡诺克辛钠 (PS)组和车前子、青葙子、菊花及熟地四种归肝明目中药组。采用Fenton反应复制兔晶状体氧化损伤模型 ,在显微镜下观察各组晶状体的混浊程度 ,并分别测定晶状体酶性和非酶性抗氧化剂水平。同样 ,将 2 1只 (42眼 )SD大鼠双眼随机分成上述 7组 ,采用H2 O2 复制LEC凋亡模型 ,同时分别采用上述不同药物干预。应用TUNEL法检测LEC凋亡及凋亡率、透射电子显微镜观察LEC超微结构改变和凋亡小体形成。结果 :四种归肝明目中药组的晶状体混浊程度均明显轻于Fenton组 ;四种归肝明目中药组晶状体中酶性抗氧化剂的活性和非酶性抗氧化剂的含量均明显高于Fenton组。四种归肝明目中药组LEC凋亡率均显著低于H2 O2 组 (P <0 .0 1) ,且与PS组均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。超微结构研究显示 ,H2 O2 组绝大多数LEC发生凋亡 ,并呈凋亡各期改变 ;四种归肝明目中药组均仅有少数LEC发生凋亡 ,并多为早期或中期的轻微改变。结论 :四种归肝经明目中药均可通过提高晶状体的抗氧化能力对抗晶状体的氧化损伤 ,抑?

静宁颗粒治疗56例小儿多动症气阴两虚证临床观察

目的探讨静宁颗粒经验方治疗小儿多动症气阴两虚证患儿的临床疗效及不良反应。方法采用中医、西医相应诊断标准纳入于2013年9月到2015年10月期间就诊于北京中医药大学东直门医院儿科门诊、北京市和平里医院儿科门诊的注意力缺陷多动障碍患儿60例,服用静宁颗粒12周,采用前后自身对照,观察有效率、中医证候评分、多动指数、划销试验、注意力缺陷多动障碍量表(SNAP-IV)以及相关安全指标和记录不良反应。结果 60例患儿中,脱落4例,总共完成56例临床观察。痊愈2例,显效12例,有效36例,无效6例,总有效率85.71%。治疗前后中医证候总积分、中医主要证候总积分、划销测验中计分、漏划数具有显著统计学差异(P<0.01);多动指数、注意缺陷多动障碍量表积分改善具有统计学差异(P<0.05);划销测验中错划数不具统计学差异(P>0.01)。结论静宁颗粒治疗小儿多动症气阴两虚型具有较好临床疗效和安全性。

壮骨关节丸中肝毒性药材的筛选研究

目的观察壮骨关节丸及所含药材对Beagle犬的肝脏毒性,寻找和确定壮骨关节丸引起肝损害的原因。方法按照故障排除法将壮骨关节丸全方拆分为最可能组(补骨脂组)、可能组(淫羊藿加独活组、乳香加没药组)、最不可能组(熟地组、续断加狗脊和鸡血藤组、骨碎补加桑寄生和木香组),与对照组和全方组进行Beagle犬的肝毒性对比研究,初步寻找出其中引起肝损害的药材组。将壮骨关节丸去掉毒性药材与全方进行肝毒性比较,对毒性药材进一步确认,每周称动物体重,从第3周开始监测血清生化指标。连续给药6个月,实验结束后取肝、脾、肾和肾上腺称重并计算脏器系数,对相应脏器进行病理检查。结果初筛发现乳香加没药组0.70g/kg犬血清中ALP、TC以及肝系数明显高于对照组,并且有1只犬肝脏汇管区有轻度胆管增生和胆汁淤积,熟地组犬血清TC水平升高,补骨脂组0.35g/kg犬血清ALP也高于正常对照组。壮骨关节丸全方组3.0g/kg从药后12周开始体重明显低于对照组,给药6周后ALP显著升高,3周后TC显著升高,肝、肾和肾上腺系数显著高于对照组,而去掉乳香和没药后的去乳香没药组2.65g/kg在6个月的实验中体重和ALP基本正常,仅13～20周高于对照组,且显著低于壮骨关节丸全方组,但TC依然显著升高。病理组织学检查表明全方组有3只犬肝脏内有轻度胆汁淤积,而对照组和去乳香没药组犬的肝脏均无胆汁淤积。结论壮骨关节丸中引起胆汁淤积的主要药材是乳香和没药,补骨脂对肝功能也有轻微影响。

熟地黄对急性血瘀症大鼠血液流变性和凝血功能的改善作用

目的研究熟地黄水提物对急性血瘀症大鼠血液流变性和凝血功能的改善作用。方法以肾上腺素结合冰水浴建立大鼠急性血瘀症模型,给予不同剂量的熟地黄水提物,测定血液流变学及凝血功能的相关指标。结果与模型组比较,大鼠给予熟地黄水提物中、高剂量组能显著降低血液流变学相关指标,延长凝血酶时间、凝血活酶时间和凝血酶原时间,降低纤维蛋白原含量。结论熟地黄水提物通过降低红细胞压积和红细胞沉积、缩短血小板聚集时间、延长凝血酶时间和降低纤维蛋白原含量,改善急性血瘀症大鼠的血液流变性和凝血功能。

妇科养坤丸质量标准提高研究

目的：提高妇科养坤丸的质量标准。方法：增加了蔓荆子的显微特征，当归、川芎、香附、木香、延胡索、地黄、熟地、白芍、甘草、砂仁的TLC鉴别，黄芩苷的HPLC法含量测定。结果：成品能检出蔓荆子显微特征，能检出当归、川芎、香附、木香、延胡索、地黄、白芍、甘草、砂仁的TLC特征斑点；黄芩苷浓度在3．28～131.2μg／mL的范围内呈良好线性关系，平均回收率为100．4％，RSD1．0％（n=6），各阴性均无干扰。结论：所建立方法简便专属，重复性好，为提高妇科养坤丸质量控制提供了方法。

4种归肝经明目中药对晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的调控

目的 :探讨 4种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞 (lensepithelialcell,LEC)凋亡相关基因Bcl 2和Bax的调控。方法 :将SD大鼠双眼随机分成 7组 :空白对照组、过氧化氢 (H2 O2 )组、吡诺克辛 (PS)组、车前子组、青葙子组、菊花组和熟地组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体 ,使晶状体孵育在 30 0 μmol·L-1H2 O2 培养液中复制LEC凋亡模型 ,同时采用 4种归肝经明目中药干预 ,置二氧化碳培养箱共同孵育 2 4h。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl 2和Bax的蛋白表达并进行比较。结果 :正常SD大鼠LEC中Bcl 2和Bax均有表达 ,Bcl 2表达较Bax表达强 ;H2 O2组Bcl 2表达显著下调 ,Bax表达显著上调 (P <0 .0 1) ,Bcl 2 Bax比率下降 ;与H2 O2 组比较 ,4种归肝经明目中药可明显上调Bcl 2表达 ,下调Bax表达(P <0 .0 1) ,Bcl 2 Bax比率上升 ;PS与 4种归肝经明目中药的调节作用相似 ,但弱于 4种归肝经明目中药的作用 (P <0 .0 5 )。结论 :4种归肝经明目中药调控凋亡相关基因Bcl 2和Bax的表达可能是其抑制LEC凋亡的分子机制。

熟地黄水提液对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响

为研究熟地黄水提液对Balb/C小鼠的抗肿瘤活性,用L929生物法研究熟地黄水提液刺激Balb/C小鼠单核细胞分泌TNF-α的作用。结果表明,熟地黄组单核细胞分泌TNF-α活性与对照组相比有显著性差异(P<0.05),提示熟地黄水提液具有抗肿瘤活性。