吉祥草种子的萌发特性和脱水耐性研究

为探明吉祥草[Reineckea carnea(Andrews.)Kunth]种子的萌发与贮藏特性,通过改变温度及光照条件,并进行硅胶快速脱水处理和种子萌发测试,对新鲜成熟的吉祥草种子萌发特性与脱水耐性进行研究。结果表明,新鲜成熟的吉祥草种子无休眠特性,最适发芽温度为20~25℃恒温;交替光照处理时的发芽率显著高于黑暗处理,应为需光种子,然而交替光照处理时的发芽速率显著慢于黑暗处理,符合耐阴的生态特性;新鲜成熟的吉祥草种子较不耐脱水,当含水量从初始的(19.8±0.1)%分别脱水至(9.0±0.2)%和(6.0±0.0)%时,发芽率从(88.0±2.2)%分别降至(59.0±6.4)%和(15.5±1.5)%,判断其应为顽拗性种子;另外,相较于发芽率、发芽势和平均发芽日数,发芽指数的变化对于种子脱水处理的响应最敏感,可以作为检测种子脱水耐性的首选指标。该研究能够促进吉祥草的应用、种子的长期保存与种质创新。

吉祥草多糖的单糖组成及抗氧化活性分析

优化吉祥草多糖(RCP)提取工艺,探讨RCP的单糖组成和体外抗氧化活性。以吉祥草全草为原料,经烘干、粉碎、脱脂、脱色等前处理,在单因素基础上,利用正交试验优化RCP的提取工艺,采用高效液相色谱仪(HPLC)测定单糖组成,并探讨RCP体外抗氧化活性。RCP提取最佳工艺为料液比1∶40(g∶mL),提取温度100℃,提取时间60 min,提取次数3次,此条件下RCP提取率为17.23%±0.78%。经HPLC分析表明,RCP主要由8种单糖组成,分别是半乳糖醛酸41.90%±0.01%、半乳糖9.14%±0.01%、阿拉伯糖4.20%±0.03%、鼠李糖1.99%±0.02%、葡萄糖1.98%±0.01%、甘露糖1.06%±0.01%、葡萄糖醛酸0.49%±0.01%。体外抗氧化活性分析表明,RCP具有较强的体外抗氧化能力,在1.0 mg/mL质量浓度时,DPPH自由基、羟自由基、O_(2)^(-)·自由基、模拟胃液NO_(2)^(-)自由基的清除率各为91.49%±2.76%,29.33%±2.09%,42.37%±2.65%,25.17%±1.06%,IC_(50)值分别为0.08,1.67,1.11,2.42 mg/mL。吉祥草有一定的抗氧化能力,本研究有利于吉祥草多糖在功能性食品、保健品和药物等领域的开发利用,为吉祥草的开发利用提供理论依据。

猕猴桃园套种吉祥草对土壤酶活性及果实产量、品质的影响

【目的】研究套种吉祥草和清耕对猕猴桃根际土壤微生物数量、酶活性和果实产量品质的影响及其相关性,为丰富猕猴桃生态学理论,猕猴桃优质生产及猕猴桃园套种吉祥草栽培模式的应用提供科学依据。【方法】在猕猴桃行间套种吉祥草,以清耕为对照,测定不同生长期猕猴桃根际土壤细菌、放线菌、真菌数量,脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性和含水量及果实的产量品质,并分析其相互关系。【结果】套种吉祥草可显著提高不同时期猕猴桃根际土壤微生物量和土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性,促进猕猴桃产量的增加和品质的改善,并随套种年限的延长趋于增加。连续4年套种吉祥草猕猴桃根际土壤细菌、放线菌和真菌数量比对照分别提高27.85%—54.34%、28.57%—96.05%和16.39%—148.38%,土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性和含水量分别为对照的0.20—0.61倍、0.30—0.87倍、0.41—0.65倍、0.23—0.32倍和0.05—0.16倍;果实单果体积和亩产量分别提高3.26%和4.88%;果实达食用时,维生素C、可溶性固形物、可溶性总糖、干物质和可滴定酸分别提高15.24%、5.46%、12.11%、5.63%和4.12%。相关性分析表明,套种吉祥草的猕猴桃树根际土壤微生物数量与脲酶和磷酸酶活性达极显著或显著正相关,与过氧化氢酶活性呈负相关;根际土壤微生物数量和土壤酶活性与猕猴桃果实单果重和品质间具有明显的相关性。【结论】套种吉祥草对提高猕猴桃根际土壤微生物数量和酶活性,增加果实产量和改善品质具有明显作用。

吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的观察吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用传统方法分离鉴定RCE-4。将0.3 m L Caski(4×107/m L)细胞悬液接种于裸鼠右侧后腿背部皮下,建立宫颈癌移植瘤模型,然后按瘤体积大小随机分为模型组、紫杉醇(10 mg/kg)和RCE-4(25、50、100 mg/kg)组,1次/d给药,连续4周,末次给药的次日处死裸鼠,称量裸鼠体质量、瘤质量,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。光镜下观察移植瘤组织形态学变化,TUNEL染色测定细胞凋亡率,免疫组化检测肿瘤组织中COX-2表达,荧光定量PCR测定移植瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,计算Bcl-2/Bax值,Western blot检测移植瘤组织中Survivin蛋白表达。结果 RCE-4(25、50、100 mg/kg)可明显降低宫颈癌裸鼠移植瘤的体积和瘤质量(P<0.05,P<0.01),上调Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和COX-2、Survivin蛋白表达及Bcl-2/Bax值(P<0.05,P<0.01)。结论RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的生长具有显著抑制作用,其机制可能与其上调Bax、Caspase-9、Caspase-3的表达和下调Survivin、Bcl-2、COX-2的表达有关。

吉祥草挥发油化学成分的研究

对贵州产吉祥草的挥发性化学成分进行分析。采取同时蒸馏萃取法提取吉祥草挥发油,用GC-MS分析吉祥草挥发油的化学成分。通过计算机检索,共鉴定出58个化合物,其峰面积相对含量占挥发油总量的81.75%,其主要化合物为反式-石竹烯(7.01%)、芳樟醇L(6.97%)、松油酮(5.45%)等。

吉祥草化学成分的分离与鉴定

目的对吉祥草的化学成分进行分离与鉴定。方法采用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、高效液相制备等方法分离纯化,所得化合物通过理化常数测定及光谱分析等手段鉴定其化学结构。结果分离得到8个化合物,分别为diosphenol(1)、N-benzoyl-L-phenylalaninol(2)、大豆素(daidzein,3)3、'-羟基大豆苷元(3'-hydroxydaidzein,4)、bis(2-ethylhexyl)phthalate(5)、邻苯二酸二正丁基酯(1,2-Benzenedicarboxylic acid,dibuty ester,6)、丁香脂素(syringaresinol,7)、刺五加酮(ci-wujiatong,8)。结论化合物1为新的天然产物2,-8为首次从该属植物中分离得到。

吉祥草药材薄层色谱检测方法研究

目的:建立吉祥草药材的薄层色谱鉴别方法。方法:吉祥草前处理后,分别以:1)氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(1.5∶4∶2.7∶1);2)氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2.4∶1.2下层)为展开剂,对吉祥草中剀提皂苷元和剀提5-B-D-吡喃葡萄糖皂苷进行薄层鉴别。结果:薄层色谱鉴别斑点清晰,能有效鉴别吉祥草中剀提皂苷元和剀提5-B-D-吡喃葡萄糖皂苷。

吉祥草中甾体皂苷成分及其抗肿瘤活性研究

目的研究吉祥草中甾体皂苷类成分及其体外抗肿瘤作用。方法运用正相、反相、凝胶柱色谱和波谱分析方法对吉祥草中的化学成分进行分离和结构鉴定,以人肾癌786-O细胞作为体外抗肿瘤实验模型,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果从吉祥草正丁醇萃取部分分离并鉴定了5个化合物,分别为异万年青-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖皂苷(1)、(25R)-5β-spirostane-1β,2β,3β,4β,5β,6β-hexol(2)、凯提皂苷元(3)、凯提-5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷(4)、吉托皂苷元-3-O-β-D-半乳糖苷(5),其中化合物1和5为首次从该植物中分离得到。体外抗肿瘤活性实验结果显示化合物1、2、3对人肾癌786-O细胞具有较强的细胞毒活性,其半数抑制浓度(IC50)分别为79.23,30.15,58.46μmol·L-1。结论化合物1和5为首次从吉祥草中分离得到,化合物1、2、3对人肾癌786-O细胞具有细胞毒活性。

吉祥草总黄酮提取物的抗氧化活性评价

目的对吉祥草中总黄酮的体外抗氧化活性进行研究。方法采用盐酸-镁粉法测定黄酮含量,通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法和铁离子还原(ferric ion antioxidant power,FRAP)法评价吉祥草总黄酮提取物的抗氧化活性。结果总黄酮提取物和脂溶性成分的EC50为(0.253±0.009)g·L-1,FRAP值为(0.964±0.028)mmol·g-1。结论吉祥草中总黄酮具有较强的抗氧化活性。

吉祥草根茎中一个甾体皂苷的提取与含量测定

采用醇提、溶剂萃取和色谱分离等手段从吉祥草根茎中分离提取得到一个已知化合物甾体皂苷RCE-4,该化合物具有良好的诱导肿瘤细胞凋亡的作用.该文建立了高效液相色谱技术测定RCE-4含量测定方法,色谱条件为:Venusil XBPC18(250mm×4.6mm.id.,5μm)色谱柱,乙腈-水(45∶55)为流动相,恒定流速为0.8mL/min,检测波长为203nm,柱温25℃.测得吉祥草根茎中RCE-4的含量为0.1229%.RCE-4在0.0325～1.3mg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.99997,平均回收率为100.05%,RSD(n=5)为1.74%.该方法简便准确,重现性好,可以作为吉祥草中RCE-4的含量测定方法,并为吉祥草药材质量标准建立奠定基础.

不同产地吉祥草药材HPLC-ELSD指纹图谱的研究

目的:利用HPLC-ELSD技术建立不同产地吉祥草药材的指纹图谱,为评价其质量品质提供理论依据。方法:采用Diamonsil(R)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速0.8 mL/min;柱温25℃;ELSD检测器:漂移管温度85℃,氮气压力350 kPa,增益值为6。结果:建立不同产地吉祥草药材的HPLC-ELSD的指纹图谱,共找到6个共有峰。结论:该方法具有良好的重复性和稳定性,为有效控制吉祥草药材的质量提供了依据。

电感耦合等离子体质谱法测定吉祥草根茎中多种金属元素含量

吉祥草根茎样品经微波消解处理,采用电感耦合等离子体质谱法测定样品溶液中27种金属元素的含量。使用碰撞反应池技术消除了多原子离子对锂、铍、硼、镁、铝、钴、镍、镓、铷、锶、碲、钡、铋和铀等14种元素的干扰。方法的检出限(3s)在0.003～9.79μg.L-1之间。方法用于吉祥草根茎样品的分析,回收率在92.0%～106%之间,相对标准偏差(n=8)在0.06%～4.4%之间。

苗药观音草提取物的体外抗氧化活性研究

采用羟基自由基体系和超氧阴离子自由基体系对观音草提取物的抗氧化性能进行了研究。结果表明,观音草提取物对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有较强的清除作用,其清除率随观音草提取物浓度的增大而升高,说明观音草具有较强的抗氧化活性,极可能是一种天然抗氧化剂的新资源。

吉祥草与沿阶草的比较鉴别

【目的】从植株外观性状、显微结构特征方面鉴别比较百合科植物吉祥草和沿阶草,为2种植物的生药学研究提供参考依据。【方法】采用植物性状鉴定、显微鉴定的方法。【结果】吉祥草未见形成肉质小块根,叶表皮细胞长方形,叶脉面积小,顶面观未见表皮附属物;叶横切面上下表皮细胞层以内未见机械组织;根茎横切面髓部不明显;根横切面内皮层细胞壁均匀增厚;粉末中偶见方晶。沿阶草须根中部或先端常膨大形成肉质小块根,叶表皮细胞类圆形,排列疏松,叶脉面积大,叶顶面观可见锯形表皮附属物;叶横切面上下表皮细胞层以内可见1～3列切向延长的机械组织;根茎横切面髓部明显;粉末中未见方晶。【结论】吉祥草与沿阶草在外观性状、显微结构特征方面的区别特征可作为2种植物的生药学鉴别依据。

苗药观音草总皂苷水提取工艺的研究

目的:优化观音草总皂苷的水提取工艺。方法:采用正交试验法,以总皂苷的含量为考察指标。结果:薯蓣皂苷的线性范围是4-24μg/ml,r=0.9995。各因素对总皂苷得率的影响顺序为提取次数>液料比(ml/g)>提取温度>提取时间,其中液料比和提取次数对总皂苷得率具有显著影响(P<0.05)。结论:观音草中总皂苷的最佳提取工艺为:提取温度70℃,提取时间30min,液料比12:1(ml/g),提取次数3次。

苗药观音草渗漉提取工艺的研究

目的:优化观音草总皂苷的渗漉提取条件。方法:采用正交试验法,以提取液中总皂苷的含量为考察指标。结果:试验设计3因素中渗漉速度有明显影响,最佳的提取工艺为:10倍量50%乙醇,0.6 mL/min的渗漉速度。结论:本法提取总皂苷得率高,经济、可行。

民族药吉祥草的本草考证

为临床合理选择用药,进一步开发研究吉祥草[Reineckia carnea(Andr.)Kunth]资源,以“吉祥草”“Reineckia carnea(Andr.)Kunth”等为关键词查阅相关典籍和文献,对吉祥草的名称、产地、性能、功效、方药进行考证。结果表明,吉祥草别名主要有小青胆、小叶万年青、玉带草;其药用部位主要为全草,较少用到根茎;性能主要为甘、平、凉;功效主要有清肺止咳、凉血止血、解毒利咽;主治咳嗽、哮喘、疳积、腰痛、骨折等病症。后续可从药理作用方面入手研究吉祥草临床应用,进一步研究其药效基础和作用机制等,促进吉祥草资源开发与利用。

吉祥草药材质量标准研究

目的对多产地吉祥草药材中水分、总灰分、酸不溶性灰分、农药残留、重金属、浸出物及总皂苷含量进行定量测定,进一步完善吉祥草药材的质量标准。方法常规检查项目按2010年版《中华人民共和国药典》(一部)ⅨH水分测定法中的烘干法、附录ⅨK灰分测定法、附录ⅩA浸出物测定法及ⅨE重金属检查法测定;采用紫外分光光度法测定总皂苷含量。结果 13批吉祥草样品所测的值平均为:水分10.4%,总灰分12.22%,酸不溶性灰分5.0%,浸出物25.2%,总皂苷含量1.28%;同时对其各检测项限度提出了建议。结论研究结果为进一步完善吉祥草药材质量标准提供依据。

底肥用量、密度、栽期对吉祥草产量性状的影响研究

目的:研究吉祥草产量性状的影响因素,为其规范化种植提供理论依据。方法:采取田间试验及大棚试验,考察不同底肥施量、密度、栽期等处理对吉祥草产量性状影响。结果:底肥用量试验中应首选处理2,避免处理6,需培育种苗,可选择处理3。密度对吉祥草产量性状中的可分株数及地上干重的影响最为显著,对叶长、叶数、根数、地上鲜重、地下鲜重、地下干重的影响具显著差异,仅对的根长及芽数无影响;处理2对多个产量构成因素的正效应最大,密度15 cm×20 cm系最佳的处理方案。栽期对吉祥草叶长无影响,对可分株数影响最大,对大部分产量性状均有影响。2、3月份系最适栽期,需培育移栽苗则选9月份最好,总的来说,吉祥草的移栽可选择春秋两季,其中3月、9月分别为春秋最佳栽期。结论:底肥施量、密度、栽期等处理对吉祥草产量性状都产生了效应,在实际生产中,选择底肥用量为1500 kg/亩左右,密度为15 cm×20 cm,2、3月份系最适栽期。

Fischer法合成2-苄基-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚工艺的改进

采用Fischer法,以苯肼和1-苄基-4-哌啶酮为原料,首先合成苯腙化合物,再经过酸的催化重排、冷却、抽滤、洗涤、重结晶得2-苄基-2,3,4,5-四氢-1 H-吡啶并[4,3-b]吲哚,考察了投料方式、酸的选择、"一锅煮"技术、重结晶溶剂对收率的影响,确定适宜的工艺条件为:投料方式采用将苯肼滴加到1-苄基-4-哌啶酮和酸的混合液中,酸选择醋酸-盐酸(5∶1,摩尔比)、重结晶溶剂选择甲醇,在此条件下目标化合物收率(以苯肼计)达86%～93%,纯度达98%以上。