人参-五味子药对对PCPA失眠大鼠神经递质及cAMP/Epac/Raf1信号通路的作用机制研究

目的通过观察人参-五味子药对对失眠大鼠下丘脑中神经递质及其cAMP/Epac/Raf1信号通路水平的影响,探讨人参-五味子药对对PCPA失眠大鼠的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、地西泮组、人参-五味子低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。除空白组外,其余5组连续3 d对大鼠进行腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型。模型复制成功后,人参-五味子药对低、中、高剂量组给药浓度分别为0.3、0.9、2.7 g/mL,地西泮组给药浓度为0.002 g/mL,模型组、空白组每天生理盐水灌胃,各组每日灌胃2 mL,连续给药14 d。观察记录各组大鼠的行为学变化;采用HE(苏木素-伊红)染色法检测大鼠下丘脑组织病理形态的改变;ELISA(酶联免疫吸附法)测定大鼠下丘脑中甘丙肽(GAL)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、腺苷(Ado)水平;RT-PCR(实时荧光定量聚合酶链式反应)检测大鼠下丘脑中Eapc、Raf1mRNA的表达;IHC(免疫组织化学染色法)检测大鼠下丘脑中cAMP蛋白的含量。结果和空白组相比:模型组大鼠下丘脑病理切片损伤明显;GAL、5-HT、Ado含量显著下降(P<0.05),NE含量显著上升(P<0.05),下丘脑Eapc、Raf1 mRNA表达显著下降(P<0.05),下丘脑cAMP蛋白表达显著下降(P<0.05),差异有统计学意义。与模型组相比:地西泮组、人参-五味子低、中、高剂量组下丘脑病理切片损伤明显改善;地西泮组、人参-五味子中、高剂量组GAL、5-HT、Ado含量显著上升(P<0.05),NE含量显著下降(P<0.05),下丘脑Eapc、Raf1 mRNA表达显著上升(P<0.05),下丘脑cAMP蛋白表达显著上升(P<0.05),差异有统计学意义。结论人参-五味子药对可能通过上调cAMP/Epac/Raf1信号通路,缓解PCPA大鼠失眠症状。

不同中药药对调节氢化可的松药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的研究

目的研究不同治法中药配伍调节肾上腺皮质功能的作用。方法小鼠ig给予1.65 mg/(kg·d)氢化可的松14 d诱发药源性证候,同步给予助阳散寒(附子-肉桂)、滋阴泻火(知母-黄柏)、补气生津(人参-黄芪)、补血益精(熟地-山茱萸)4种中药药对干预,检测小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取脾脏、胸腺称定质量并计算脏器指数;运用ELISA法检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肾上腺素和去甲肾上腺素含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21-羟化酶(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)和11β-羟化酶2(Cyp11b2)、酪氨酸羟化酶(Th)、多巴胺脱羧酶(Ddc)、多巴胺β-羟化酶(Dbh)、苯乙胺-N-甲基转移酶(Pnmt)基因表达;运用Western blotting方法检测肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族I型清道夫受体(SR-BI)、StAR蛋白表达。结果 4种治法对氢化可的松造成的小鼠体质量下降和体温下降效果不显著,附子-肉桂组小鼠抓力显著高于模型组(P<0.05)。与模型组比较,知母-黄柏组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P<0.01),StAR、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达水平显著升高(P<0.05、0.01),SR-BI、StAR蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论滋阴泻火治法寒性药对(知母-黄柏)对小剂量氢化可的松诱发的药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的纠正作用最佳。