吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的实验研究

目的研究吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的影响。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测和培养肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株,待24 h、48 h、72 h后采用不同浓度的吉非替尼、奥曲肽、顺铂、5-FU进行单用和联用处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析药物的增效效果。结果联合用药对肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株可起到协同抑制作用,与单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。联合用药组的肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株培育48 h后的IC50=(5.3±0.5)、(5.4±0.8)mg/L,单药组IC50=(20.1±1.2)、(20.3±1.4)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、单药组、联合用药组诱导肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株后凋亡率差异明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吉非替尼联合用药对细胞的增生具有协同抑制作用,对其他肺癌的治疗也具有一定的效果。

肺腺癌A_(549)/DDP细胞周期变化及其多药耐药性

用Fura 2 /AM标记药物敏感的肺腺癌细胞A54 9和抗顺铂药物的肺腺癌细胞A54 9/DDP两种细胞胞内游离Ca2 +,用碘化丙锭 (PI)标记细胞DNA ,检测其胞内Ca2 +的变化及两种细胞增殖能力和细胞周期 .实验结果表明 ,抗药性细胞株A54 9/DDP胞浆内游离Ca2 +的浓度仅为药物敏感细胞株A54 9的 1/ 3左右 ,同时前者的细胞增殖能力较后者明显增强 ,而且细胞周期也明显缩短 .当用BAPTA AM和EGTA或A2 3187和Thapsigargin处理细胞以降低或升高其胞内自由Ca2 +浓度时可改变细胞的生长周期 ,二者也呈现明显差别 .这些结果表明 ,对顺铂产生耐药性的人肺腺癌A54 9/DDP细胞胞内Ca2 +浓度的降低 ,可能影响细胞的增殖 ,缩短细胞的生长周期 ,特别是影响起决定作用的G1期 。

miR-125a-5p通过靶向APAF1增强非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性

目的:探讨miR-125a-5p在诱导非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞吉非替尼(gefitinib,Gef)耐药中的作用及其机制。方法:选用人NSCLC耐药细胞株A549/GR和NSCLC细胞株A549,将miR-125a-5p mimic、miR-125a-5p inhibitor、pcDNA3.1-APAF1、空载体pcDNA3.1转染至A549/GR细胞。用qPCR检测细胞中miR-125a-5p的表达水平,用MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测Gef对细胞增殖、迁移和凋亡的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p与细胞凋亡蛋白酶活化因子1(apoptotic peptidase activating factor 1,APAF1)的靶向关系,用Western blotting检测A549/GR细胞中APAF1蛋白水平,用比色法测定细胞中caspase-3及caspase-9表达水平。结果:A549/GR细胞中miR-125a-5p表达水平显著高于A549细胞(P<0.01)。敲降miR-125a-5p显著增强Gef对A549/GR细胞增殖、迁移的抑制作用(均P<0.05),并促进细胞凋亡(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-125a-5p靶向APAF1,并负调控其表达。进一步实验显示,miR-125a-5p通过靶向下调APAF1缓解Gef对A549/G细胞增殖、迁移的抑制作用及凋亡的促进作用(均P<0.05),减弱Gef引起的凋亡相关蛋白caspase-3及caspase-9表达的上调(均P<0.05)。结论:miR-125a-5p促进NSCLC细胞Gef耐药,其机制是通过靶向APAF1而促进细胞的增殖、迁移并抑制凋亡。