新型hGLP-1基因对β-TC-6胰岛瘤细胞凋亡的影响

目的探讨新型人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)对四氧嘧啶(AXN)诱导凋亡的β-TC-6胰岛瘤细胞株的影响。方法脂质体介导重组质粒pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1转染β-TC-6胰岛瘤细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP),酶联免疫吸附法(ELISA)检测目的蛋白表达;以AXN诱导细胞凋亡后观察细胞形态,Hoechst染色及四甲基偶氮唑盐光吸收法(WST-1)检测目的基因表达对细胞凋亡的影响。结果荧光显微镜观察到GFP表达;ELISA显示重组质粒转染组细胞培养液吸光度值为(2.53±0.05),高于其他研究组(P<0.05);细胞形态观察及Hoechst染色显示,AXN可诱导β-TC-6细胞凋亡;WST-1显示转染重组质粒的细胞组存活率为66.23%,高于其他研究组(P<0.05);Hoechst染色显示,经重组质粒转染的细胞凋亡减少。结论 2×Val2-hGLP-1的表达对胰岛β细胞凋亡具有一定抑制作用,为糖尿病基因治疗提供了相关试验研究基础。

桑葚汁的制备工艺和对糖尿病作用效果研究

目的:对桑葚汁的制备条件进行优化后研究其对糖尿病的影响。方法:通过测定桑葚汁的褐变度和出汁率确定桑葚汁制备过程中护色剂和离心时间的选择,再给予链脲佐菌素建立糖尿病模型小鼠后随机分组如下:糖尿病组、二甲双胍组、低剂量桑葚汁组和高剂量桑葚汁组,此外设置正常小鼠组作为对照,在第0、2、4和6周定时测量每组小鼠的空腹血糖水平,第6周末进行口服糖耐量实验。另复苏并传代培养小鼠胰岛素瘤beta-TC-6细胞,分为正常组、高糖组、高糖+二甲双胍组、高糖+低剂量桑葚汁和高糖+高剂量桑葚汁组,采用CCK-8试剂盒检测不同组细胞在给药后的存活率。结果:桑葚汁制备过程中联用两种护色剂和离心时间采用10min时得到的桑葚汁褐变度最低和出汁率最高。动物实验结果表明高剂量的桑葚汁可明显改善糖尿病小鼠的空腹血糖和糖耐量水平,但桑葚汁对高糖诱导beta-TC-6损伤并无改善作用。结论:选择合适的护色剂和离心时间可优化桑葚的制备工艺,此外,桑葚汁对糖尿病有一定的缓解作用。

抵抗素对胰岛β细胞胰-十二指肠同源盒因子-1表达及胰岛素分泌和细胞凋亡影响的观察

目的探讨抵抗素对胰岛β细胞胰-十二指肠同源盒因子-1(PDX-1)的表达、胰岛素分泌及细胞增殖、凋亡的影响。方法βTc6细胞分为对照(NC)组和抵抗素组(浓度20～200ng/ml),干预6、12、24h,CCK-8法测定细胞增殖能力,DNA Ladder检测细胞凋亡,RT-PCR检测PDX-1基因表达,放射免疫法测定胰岛素分泌。结果 (1)与NC组比较,20、40ng/ml抵抗素组各干预时段,胰岛β细胞的PDX-1表达、增殖活力、凋亡、胰岛素分泌差异均无统计学意义(P>0.05);(2)随抵抗素浓度在60～200ng/ml内增加,干预时间由6～24h延长,细胞PDX-1表达、增殖活力、胰岛素分泌均呈现浓度和时间依赖性降低(P均<0.05),且细胞凋亡条带逐渐明显。结论在一定的浓度和时间范围内,抵抗素可呈浓度和时间依赖性下调胰岛β细胞PDX-1表达,损害胰岛素分泌,抑制细胞增殖、诱导其凋亡。