用套式RT-PCR检测兰州地区肺炎患儿下呼吸道分泌物中的RSV和HPIV-3

为了调查兰州地区肺炎患儿中RSV和HPIV-3的感染状况,分别在RSV的G蛋白基因的保守序列和HPIV-3的HN基因的保守序列处,设计了套式引物,采用套式RT-PCR的方法检测了60份兰州地区肺炎患儿下呼吸道分泌物样本,结果显示,60份样本中RSV阳性为14例(23%),HPIV-3阳性为12例(20%)。并分别随机对其中的5份样本的扩增产物进行了基因序列测定,结果5份RSV阳性样本与参考株序列的同源性均大于97%,5份HPIV-3阳性样本与参考株序列的同源性大于97%。表明兰州地区下呼吸道感染患儿中,RSV和HPIV-3是常见的感染病原体。

老年人呼吸道合胞病毒感染的调查研究

目的了解深圳地区老年人呼吸道合胞病毒感染现状。方法采用碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶桥联酶标(APAAP)、间接酶联免疫吸附试验(ELT-SA)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对老年呼吸疾病患者进行RSU Ag、RSV IgG、RSV RNA进行检测。结果患者标本中,RSV抗原阳性率:老年人组为14.48％,对照组为8.75％;RSV IgG阳性率:老年人组为52.33％,对照组为26.25％;RSV RNA阳性率:老年人组为12.15％,对照组为7.5％(P<0.05)。两组比较无显著差异。结论老年呼吸系统疾病患者中,RSV感染较为普遍,应引起重视。

小儿哮喘的研究进展

婴幼儿哮喘是以中性粒细胞为呼吸道的主要炎性细胞，有肥大细胞和嗜酸粒细胞参与为主的呼吸道慢性过敏性炎症。婴幼儿哮喘包括过敏体质或非过敏体质、与病毒感染相关的哮喘，但尚无好的方法预测是否为持续性哮喘。若哮喘对常规治疗反应差或持续时间达4周以上，应注意排除其他原因引起的哮喘。合并上呼吸道感染的短期应用吸入激素可减少哮喘的发生。吸入糖皮质激素可有效减少哮喘的发作。

小儿呼吸道病毒感染的实验观察

目的探讨分析小儿呼吸道病毒感染的实验观察结果。方法使用桥联酶标（APAAP）法，对呼吸道疾病住院的97例患儿，取其呼吸道分泌物，进行合胞病毒（RSV）、流感甲（FLUA）、流感乙（FLUB）及副流感Ⅲ（PIV-3）的检测。结果其阳性率为：RSV33．0％、FLUA25．8％、FLUB27．8％，PIV-325．8％。同一标本可检测2～4种病毒，少单一存在。结论说明小儿呼吸道病毒感染是多种病原，其中以RSV最多。本法操作简单，特异染色显色清楚易辩。

小儿呼吸道合胞病毒性肺炎的中医证候学特点

目的研究小儿呼吸道合胞病毒性肺炎的中医证候学特点。方法对114例风热闭肺证、痰热闭肺证患儿进行证候学资料调查及统计分析。结果风热闭肺证和痰热闭肺证患儿在发热、痰壅、紫绀、舌象、脉率、精神方面差异有统计学差异(P<0.05),痰热闭肺证重于风热闭肺证;在恶风恶寒方面差异有统计学意义(P<0.05),风热闭肺证重于痰热闭肺证;其他指标比较无统计学意义(P>0.05)。结论发热、痰壅、恶寒、紫绀、舌象、脉率、精神的程度可作为小儿呼吸道合肥病毒性肺炎风热闭肺证、痰热闭肺证的主要鉴别指标。

呼吸道合胞病毒截短G蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性

目的构建呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)截短G蛋白的原核表达载体,并对表达、纯化后的蛋白进行免疫原性及相关免疫指标的检测。方法人工合成G蛋白基因的部分核酸序列,采用重叠PCR法将CX3C模序替换为RSV M蛋白上的CTL表位,构建原核表达载体GCX3C-pET22b和GCTL-pET22b,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE鉴定后,采用Ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白。纯化产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,免疫昆明小鼠,实验分GCX3C组(100μg GCX3C)、GCTL组(100μg GCTL)、阴性对照组(100μlPBS),分别于0、1、4周经小鼠双后侧肌肉注射免疫,经尾梢静脉取血,分离血清,检测IgG水平及嗜酸性粒细胞的数量,并通过小鼠体外淋巴细胞杀伤试验鉴定RSV特异性CTL应答。结果重组原核表达载体经双酶切及测序鉴定,证明G蛋白基因改造成功;重组蛋白的相对分子质量约14 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以可溶性形式表达;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,可与抗RSV血清发生特异性反应;小鼠血清中的特异性IgG水平随免疫次数的增加而升高(P<0.01),GCX3C蛋白和GCTL蛋白的几何平均滴度分别为1 584.89和1 995.26;GCX3C组较GCTL组小鼠血清中嗜酸性粒细胞数量明显增加(P<0.01);GCTL蛋白免疫小鼠后可产生RSV特异性的CTL应答效应。结论已成功原核表达了GCX3C蛋白和GCTL蛋白,两种蛋白均有较好的免疫原性,GCTL蛋白可消除由CX3C模序引起的嗜酸性粒细胞增多,并增强了CTL效应,G蛋白基因的改造达到了预期效果。

2012—2014年清远地区儿童呼吸道合胞病毒感染流行情况

目的调查分析2012—2014年清远市城区和阳山县儿童呼吸道合胞病毒(RSV)的感染情况以及其与患儿性别、年龄、季节等因素的关系。方法以该市人民医院和阳山县人民医院2012年8月—2014年4月期间收治的呼吸道疾病患儿共450例作为研究对象。采用实时反转氯聚和酶链的反应(real-time RT-PCR)方法对其呼吸道分泌物合胞病毒的核酸进行检测,SPSS18.0软件进行统计分析。结果该市市区儿童RSV的感染率为7.75%(22/284),显著高于阳山县的3.01%(5/166),差异有统计学意义(P<0.05)。该市区患儿RSV毒感染男女性别比为1∶1,阳山县为4∶1。病毒感染多发生于≤3岁的儿童,以冬春季节最为常见。结论该市市区和阳山县两地儿童RSV的感染情况各异,其感染与患儿性别、年龄以及季节等因素有关,可为临床诊治提供参考。