白藜芦醇对UVA照射HaCaT细胞的防护效应及其机制

采用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HaCaT细胞的增殖水平。Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡率和死亡率。单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine,MDC)荧光染色和二氯荧光黄二乙酸酯(Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针标记后,用激光共聚焦显微镜进行扫描,分别检测HaCaT细胞内自噬体和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化。Western blot检测HaCaT细胞内LC3B-II、磷酸化AKT(p-AKT)和总AKT蛋白表达变化。结果显示:经10~80 J/cm^2 UVA照射后,HaCaT细胞的增殖水平随受照剂量的增加逐渐降低(p<0.05);白藜芦醇预处理能显著促进UVA照射后HaCaT细胞增殖(p<0.01),降低其凋亡率和死亡率(p<0.05);经20 J/cm^2 UVA照射后3~24 h,HaCaT细胞内LC3B-II蛋白表达增强(p<0.01);白藜芦醇预处理能使UVA照射后HaCaT细胞内自噬增强(p<0.01),ROS水平降低(p<0.01),p-AKT蛋白表达增强(p<0.01)。提示白藜芦醇可能通过促进细胞自噬和AKT蛋白磷酸化,以及降低细胞内ROS水平,拮抗UVA导致的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡。

软枣猕猴桃黄酮对过氧化氢诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

研究软枣猕猴桃中黄酮类化合物对过氧化氢(H_2O_2)损伤人永生化表皮细胞(HaCaT细胞)的保护作用。以湖南省浏阳市大围山软枣猕猴桃为实验材料,以体外培养的HaCaT细胞为实验对象。实验分为空白对照组、H_2O_2模型组、阳性对照组(VC组)和黄酮处理组(软枣猕猴桃黄酮0.1~1.0 mg/mL预处理),以细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平为综合评价指标,并以VC作为阳性对照评价其抗氧化活性。实验结果表明:当H_2O_2浓度为30μmol/L时,细胞相对存活率为40%左右,较好地诱导了HaCaT细胞氧化损伤模型。当加入黄酮类化合物对细胞进行预保护后,质量浓度0.3、0.6 mg/mL的黄酮处理组细胞相对存活率为60%左右,较模型组均提高了20%左右。0.3 mg/mL黄酮处理组细胞内SOD活力(6.33 U/mg)较模型组升高了约1倍,且存在明显差异(P<0.05);ROS水平显著下降,与模型组(677.80)相比下降了13%左右。说明软枣猕猴桃中黄酮类化合物对H_2O_2造成的氧化损伤具有一定的预保护作用,可进一步将其开发成相应的天然抗氧化剂产品投入市场。

玉竹对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

目的:探讨玉竹水提液对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:用64mJ.cm-2的UVB照射人皮肤角质形成细胞建立光老化细胞模型,以不同浓度玉竹提取物处理光老化细胞,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌量。结果:UVB照射角质形成细胞后,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高,TNF-α、IL-6分泌量增加(P<0.01),玉竹水提液中(100μg.ml-1)、高(200μg.ml-1)剂量组能显著提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少TNF-α、I L-6分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:玉竹水提液可在一定程度上减轻UVB对角质形成细胞的损伤,其机制可能与其抑制氧化损伤,增强细胞抗氧化能力,减少炎症细胞因子分泌有关。

荔枝果壳原花青素对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

为评价荔枝果壳原花青素对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)(波长280~320 nm)诱导人永生化角质形成细胞(HaCaT)氧化损伤的保护作用。构建UVB辐射HaCaT细胞氧化损伤模型,研究荔枝果壳低聚原花青素(litchi pericarp oligomolymeric procyanidins,LPOPC)及从中分离鉴定的6种单体化合物对HaCaT细胞氧化损伤的保护作用。实验分为对照组、UVB照射组、实验组(阳性对照对氨基苯甲酸(para-aminobenzoic acid,PABA)、LPOPC及6种单体化合物),以CCK-8法测定各组细胞活力,采用试剂盒检测各组细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)相对含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果表明:LPOPC及6种单体化合物的干预处理均可明显提高UVB诱导氧化损伤的HaCaT细胞活力,减少细胞内ROS和MDA的生成,增加SOD、CAT、GSH-Px的活力和GSH水平。6种单体化合物中,原花青素A_(2)的保护作用最明显,与阳性药物PABA的效果相当。结论:LPOPC及6种单体化合物均可通过增强细胞内抗氧化能力、抑制脂质过氧化来明显改善受损细胞氧化应激损伤,对UVB诱导氧化损伤的HaCaT细胞具有良好的保护作用,提示原花青素A_(2)是荔枝果壳原花青素中对氧化应激损伤防护作用最强的活性组分。

富硒油茶籽油对H_2O_2诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用研究

探究油茶籽油对过氧化氢诱导人永生化表皮细胞(HaCaT)氧化损伤的保护作用。以油茶果经物理压榨所得油茶籽油为材料,以体外培养的HaCaT细胞为试验对象,试验分为空白对照组、过氧化氢(H_2O_2)模型损伤组、阳性对照组(VC)、处理组(油茶籽油5～500μg/m L预处理),以细胞内细胞存活率(凋亡率)、SOD、GSH-PX、ROS及其Nrf2基因表达水平为综合评价指标,评价油茶籽油的抗氧化性。结果表明:当加入油茶籽油对细胞进行预保护后,质量浓度50～200μg/m L的油茶籽油对损伤细胞的存活率在70%～82%之间,较H_2O_2模型损伤组的高。50μg/m L油茶籽油处理组细胞凋亡率为4. 49%,较H_2O_2模型损伤组降低了44. 77%;细胞内SOD水平(22. 09 U/mg)、GSH-PX水平(64. 50 U/mg)较H_2O_2模型损伤组升高了46. 68%、63. 66%,且存在明显差异(P <0. 05);而ROS水平显著下降,与H_2O_2模型损伤组(88. 27)相比细胞内平均荧光强度下降了37. 66%;此时Nrf2基因相对表达量为1. 13,较模型组提高了101. 78%;各指标均较优于阳性对照50μg/m L VC处理组的效果。说明油茶籽油对H_2O_2造成的氧化损伤具有一定的预保护作用,且好于相同质量浓度的VC处理效果,可进一步将其开发成相应的天然有效抗氧化剂产品。

康复新液对光老化HaCaT细胞保护作用的研究

目的:观察康复新液对中波紫外线(UVB)照射损伤后皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)的影响,初步探讨其作用机制。方法:采用UVB辐射HaCaT细胞进行造模,分为空白组、模型组、药物组。空白组不给予处理,模型组、药物组分别予不同剂量UVB辐射,药物组在模型组基础上给予康复新液。以CCK8法测定细胞增殖活力,酶生化法测定过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶含量。结果:与模型组比较,同等UVB剂量下药物组乳酸脱氢酶含量下降(P<0.01),超氧化物歧化酶含量及细胞增殖活力升高(P<0.01)。结论:康复新液可通过减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损伤,从而达到对HaCaT细胞的保护作用。

水解驴胎盘提取物对UV诱导皮肤细胞损伤的保护作用

[目的]探究水解驴胎盘提取物防护光损伤的效果与作用机制,旨在填补水解驴胎盘提取物在防护UV光损伤方面的研究空白,实现驴胎盘的高值化利用。[方法]采用CCK-8方法探究水解驴胎盘提取物对HS68和HaCaT细胞增殖率的影响,利用UVA和UVB分别诱导HS68和HaCaT细胞建立体外光损伤模型,研究水解驴胎盘提取物对UV损伤HS68和HaCaT细胞的保护作用。[结果]0.10%~10.00%(V/V)的水解驴胎盘提取物可显著促进HS68和HaCaT细胞生长;1.00%和0.50%(V/V)水解驴胎盘提取物可显著减弱UVB对HaCaT细胞的损伤,显著减少细胞内ROS的产生和MDA的分泌,显著增加细胞内SOD活性;1.00%(V/V)水解驴胎盘提取物可显著降低UVA辐射HS68细胞造成的MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达上升,但不能改善COLⅠ和COLⅢmRNA表达的减少。[结论]水解驴胎盘提取物能够防护UVA和UVB造成的皮肤光损伤,可能与提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化程度、抑制金属蛋白酶的异常分泌有关。

乙酰化白藜芦醇对长波紫外线照射后HaCaT细胞内NRF2活化及活性氧水平的影响

目的探讨乙酰化白藜芦醇对长波紫外线(UVA)照射后人永生化角质形成细胞HaCaT内核转录相关因子NRF2(NF-E2-related factors 2)活化和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法用CCK-8试剂盒检测不同剂量(0、5、10、20、30、40、60、80 J/cm^2)UVA照射后24 h,及不同浓度(0、0.5、1、2μmol/L)乙酰化白藜芦醇干预24 h后再经20 J/cm^2 UVA照射后24 h HaCaT细胞的存活率;Western blot检测20 J/cm^2 UVA照射HaCaT细胞后不同时间点(0、3、6、12、24、48 h)及2μmol/L乙酰化白藜芦醇干预24 h后再经20 J/cm^2 UVA照射后6 h细胞核内NRF2蛋白表达的变化;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测2μmol/L乙酰化白藜芦醇干预HaCaT细胞24 h后再经20 J/cm^2 UVA照射后24 h细胞的凋亡率和死亡率;二氯荧光黄二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记细胞检测HaCaT细胞中ROS水平的变化。结果 10~80 J/cm^2 UVA照射后24 h,HaCaT细胞存活率随照射剂量的增加逐渐降低(P<0.05);20 J/cm^2 UVA照射HaCaT细胞后0 h,细胞核内NRF2的表达急剧增强(P<0.01),照射后3~48 h又逐渐减弱(P<0.05)。乙酰化白藜芦醇预处理能显著提高UVA照射后细胞的存活率(P<0.05),降低其凋亡率和死亡率(P<0.05),促进细胞核内NRF2蛋白的表达(P<0.01),并降低细胞内ROS水平(P<0.01)。结论乙酰化白藜芦醇能减轻UVA照射引起的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡,其机制可能与其促进NRF2蛋白活化,降低细胞内ROS水平,从而减轻UVA照射对细胞的氧化损伤有关。

铁皮石斛多糖对H_(2)O_(2)损伤HaCaT细胞的保护作用

目的考察铁皮石斛多糖对表皮角质细胞氧化损伤的保护作用及机理,为铁皮石斛多糖的有效应用提供参考。方法筛选出不影响HaCaT细胞正常生长的铁皮石斛多糖浓度,以及有效损伤HaCaT细胞的H_(2)O_(2)浓度,观察H_(2)O_(2)对HaCaT细胞存活率和抗氧化相关酶的影响。结果 500μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)孵育HaCaT细胞2 h,细胞相对存活率为67.25%,50μg·mL^(-1)的铁皮石斛多糖能让HaCaT细胞的相对存活率恢复至90.14%;铁皮石斛多糖可以通过提高HaCaT细胞SOD、CAT活性及GSH含量,降低MDA含量,从而减轻H_(2)O_(2)对HaCaT细胞的氧化损伤作用。结论铁皮石斛多糖对H_(2)O_(2)损伤HaCaT细胞的保护作用可能通过提高HaCaT细胞相关抗氧化酶的活性、降低细胞脂质过氧化程度来实现。

白藜芦醇对慢性肝损伤模型小鼠的肝保护作用研究

目的:研究白藜芦醇对慢性肝损伤模型小鼠的肝保护作用及内毒素(Lps)刺激引起肝脏枯否细胞(KCs)分泌细胞因子的变化。方法:取小鼠36只随机均分为正常对照组(正常饮食)、模型组(高脂饮食)、药物组(高脂饮食,0.5%白藜芦醇10mL·kg-1)、阳性对照组(高脂饮食,联苯双酯150mg·kg-1),每隔1日灌胃给药1次,10周后每组抽取7只小鼠,腹主动脉采血测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;分离培养肝脏KCs,检测在Lps刺激下KCs上清液中IL-6、IL-10、TNF-α的水平。结果:与模型组比较,药物组和阳性对照组小鼠血浆中ALT、IL-6水平明显降低(P<0.05),IL-10、TNF-α无明显变化;小鼠肝脏KCs上清液中IL-6、TNF-α水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:白藜芦醇可能通过降低KCs对促炎因子(IL-6、TNF-α)的表达,提高KCs对抑炎因子(IL-10)的表达,来实现其肝脏保护作用。