双转基因小鼠模型中microRNA-153对RTN4的表达调控

目的探讨mir-153在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法通过microRNA芯片及Real-timePCR检测APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达;构建高表达mir-153的稳转细胞系,通过western-blot检测稳转细胞系内RTN4的蛋白表达;构建野生型及突变型RTN4的3’UTR荧光素酶报告载体,分别将其与mir-153表达载体或microRNA阴性对照载体共转染入293T细胞内,检测海肾荧光素酶的相对活性以验证mir-153对RTN4 mRNA的作用靶点。结果 microRNA芯片及Real-time PCR检测均证实3月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达较同龄野生对照显著降低;在高表达mir-153的稳转细胞系内RTN4的蛋白水平明显降低;共转染野生型RTN4的3’UTR/mir-153表达载体可使海肾荧光素酶相对活性较共转染野生型RTN4的3’UTR/miRNA阴性对照质粒组显著降低(P<0.05),而共转染突变型RTN4的3’UTR/mir-153表达载体组则较之无明显差异。结论在3月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内存在mir-153的异常表达;mir-153可调控RTN4的蛋白表达;mir-153对RTN4的表达调控是通过结合RTN4 3’UTR 839-845碱基处的作用位点而实现的。

人 reticulon 4c(RTN4c)的cDNA克隆与组织表达谱分析

ＲＴＮｓ（ｒｅｔｉｃｕｌｏｎｓ）是一个与神经内分泌细胞生长、分化有关联的基因家族，迄今已发现了ＲＴＮ１，ＲＴＮ２和ＲＴＮ３等３个成员，其中ＲＴＮ１和ＲＴＮ２已被证明分别具有３种不同长度的转录本以一个与小细胞肺癌发病机制有关的 ＲＴＮ１ｃ ｃＤＮＡ为信息探针，通过电子杂交辅助的新基因克隆技术，从人脑ｃＤＮＡ文库中分离到一个长 １６７７ｂｐ的 ｃＤＮＡ，它含有一个编码１９９个氨基酸残基的完整开放阅读框．它的推导蛋白质序列与 ＲＴＮ１Ｃ， ＲＴＮ２Ｃ和 ＲＴＮ３高度同源，同源度分别为６４．４％， ４５．８％和 ５０．０％，故将其命名为 ＲＴＮ４ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ注册号为 ＡＦ０８７９０１）． Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示， ＲＴＮ４ｃ基因的转录本长约 １．８ ｋｂ，它在心、胎盘、肺、脾、胸腺、睾丸、卵巢、小肠和白细胞等组织中几乎不表达，在胰腺、前列腺和结肠中仅有极少量表达，但在骨骼肌、脑、肝、肾中大量表达．此外，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ结果还显示，在除肝脏和骨骼肌之外的１４种组织中均存在另一种约２．３ ｋｂ的转录本；在脑、骨骼肌和睾丸组织中则还存在一种约 ５．０ ｋｂ的转录本．通过电子杂交步移，发现了两个与上述５．０和 ２．３ ｋｂ转录本长?