维甲酸调控IGF-2基因对软骨细胞促凋亡的作用

目的探讨维甲酸对软骨细胞凋亡的影响及细胞内IGF-2的表达规律。方法1月龄雄性中国白兔1只,体重约500g。取兔双膝关节股骨髁软骨,采用胰酶消化法体外培养白兔软骨细胞。取第2代软骨细胞,培养液内加入终浓度为1×10-6mol/L的全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)25μL(实验组),作用24h;对照组加入25μLDMEM液作为对照。采用细胞免疫组织化学法观察软骨细胞中Ⅱ型胶原的分泌变化,流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率,RT-PCR半定量分析软骨细胞中IGF-2mRNA的表达,Western blot印迹杂交鉴定软骨细胞中IGF-2蛋白质表达。结果实验组ATRA抑制了软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达。流式细胞仪检测实验组软骨细胞凋亡率为21%±2%,较对照组(5%±1%)增加了5倍;RT-PCR检测实验组IGF-2mRNA的表达为0.2±0.1,较对照组(0.8±0.2)降低75%;Western blot印迹杂交分析发现,实验组软骨细胞IGF-2的表达为0.3±0.1,较对照组(0.7±0.2)降低了57%;各指标组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论维甲酸可能通过抑制软骨细胞靶基因IGF-2的表达,负性调节软骨细胞分泌和增殖功能,促进软骨细胞凋亡。

维甲酸对软骨细胞的凋亡及其IGFBP-6表达的影响

目的探讨维甲酸对软骨细胞凋亡功能的影响及细胞内胰岛素样生长因子结合蛋白6(insulin-like growthfactor binding protein 6,IGFBP-6)的表达规律。方法胰酶消化法体外培养兔的软骨细胞;全反式维甲酸(ATRA)作用软骨细胞株;细胞免疫化学观察软骨细胞中Ⅱ型胶原的合成和分泌变化;流式细胞仪检测软骨细胞株细胞凋亡率;采用RT-PCR半定量分析软骨细胞中IGFBP-6 mRNA的表达;应用Western印迹杂交鉴定软骨细胞中IGFBP-6蛋白质的表达。结果1×10-6mol/L剂量的ATRA作用软骨细胞24 h,ATRA抑制了软骨细胞中Ⅱ型胶原的分泌;1×10-6mol/L剂量的ATRA使软骨细胞凋亡率增加250%,出现明显亚二倍体峰(凋亡细胞峰),差异有统计学意义(P<0.05);ATRA使软骨细胞中IGFBP-6 mRNA和蛋白质的表达分别增加了128%和195%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论维甲酸负性调节软骨细胞分泌功能,促进软骨细胞凋亡;维甲酸可能通过调控靶基因IGFBP-6的基因转录和翻译,发挥对软骨细胞的促凋亡作用。