微乳头型肺腺癌类器官的构建及其靶向药物的筛选

目的建立微乳头型肺腺癌类器官的培养方法,并开展靶向药物的筛选。方法自确诊为微乳头型肺腺癌患者手术组织样本中提取和培养原代肺癌类器官,动态观察和记录肺癌类器官生长情况;苏木精-伊红(HE)染色法及免疫组化染色法比较肺癌类器官与亲本组织间肿瘤细胞形态及蛋白表达特征;实时荧光定量聚核酶链反应检测肺癌亲本组织和类器官中基因突变情况;基于基因检测结果挑选靶向药物并验证其体外抑瘤效果。结果成功从微乳头型肺腺癌组织中培养出类球形肿瘤类器官,可传代至少3代。HE染色结果可见类器官中肿瘤细胞形态与亲本组织细胞基本一致;免疫组化染色结果显示肺癌类器官与亲本组织中各基因的蛋白表达水平大致相同;基因突变分析结果显示,肺癌亲本组织和类器官的突变基因结果一致,均体现为原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体Ret(RET)融合突变。基于肺癌类器官的靶向药物筛选结果显示,凡德他尼的体外抑瘤效果最佳。结论基于微乳头型肺腺癌类器官的药筛实验可在短时间内筛选出高效靶向药物,可使微乳头型肺腺癌患者从中获益。

类器官在癌症基础研究和临床转化中的应用

类器官是成体干细胞或多能干细胞体外三维培养形成具有特定结构的组织类似物,与对应的器官具有高度相似的组织特性和生理功能。肿瘤类器官能够很好地保留癌症患者体内肿瘤的组织学和突变特征,在构建肿瘤类器官样本库、重建肿瘤微环境、研究肿瘤的发生发展机制以及制定个性化治疗方案和药物筛选等方面发挥了重要的作用,但目前仍存在着一些因素限制了肿瘤类器官的进一步发展。综述类器官技术在肿瘤基础研究和临床转化中的应用及面临的挑战,并对未来肿瘤类器官的发展方向予以展望。

非劣效抗肿瘤药物临床试验样本量的估算

非劣效抗肿瘤药物临床试验在新药的开发和临床推广应用中具有重要作用,其样本量的估算是临床试验的关键环节。本研究中,结合相关文献,按不同的分析和评价指标(计量指标、计数指标、生存分析),结合实例探讨需要考虑的效应量和统计特征,以及样本量的估算过程。非劣效抗肿瘤药物临床试验样本量的估算,首先要明确非劣效界值,然后根据临床试验涉及的不同分析和评价指标确定相应的效应量,选择相匹配的统计特征,才能准确估算样本量。临床试验中,足够的样本量是提高试验科学性和研究结果准确性的重要条件之一。

肿瘤患者个体化治疗药物筛选技术研究进展

目前,我国肿瘤发病率逐年攀升,每年新发肿瘤患者数目已居世界首位。现今肿瘤常规治疗方法为手术联合放化疗、靶向治疗和免疫治疗,但不同肿瘤患者对化疗药物敏感性存在巨大差异,故通过体外药物敏感性筛选技术筛选患者最为敏感的药物,从而指导患者个体化用药尤为重要。目前肿瘤患者个体化用药筛选技术较多,每项技术各有优缺点,本文对常用的几种技术的应用进行综述,为肿瘤患者个体化用药技术的筛选提供参考。

肝癌体外药物敏感性试验

目的 通过测定肝癌对阿霉素 (ADM)、顺铂(DDP)、氟尿嘧啶 (FU)、长春新碱 (VCR)、丝裂霉素 C(MMC)及噻替哌 (TSPA)的体外药物敏感性 ,为肝癌化疗用药提供参考依据。方法 采用滤纸支持组织块培养 - MTT终点 -计算机图像分析体外药物敏感性试验法。结果 在 1倍血浆峰浓度 (1PPC)时作用最强的药物为 MMC,其抑制率中位数 (MIR)为 2 6 .5 % ,其次是 ADM为 13.0 % ,DDP、TSPA、5 - FU和 VCR为 4.0～ 8.5 %。在 5倍血浆峰浓度 (5PPC)时作用最强的药物亦为 MMC,其 MIR为 92 .0 % ,次为 ADM、DDP和 TSPA为 41～ 5 0 % ,5 - FU和 VCR为 16 .0～ 17.0 % ,DDP和 TSPA在 5 PPC的 MIR比在 1PPC时大5 .0和 5 .8倍以上 ,MMC、ADM和 VCR则大 2～ 3.5倍 ,5 -FU只增大 1倍左右。结论 结果提示 MMC对肝癌抑制作用较强 ,DDP和 TSPA剂量增加与疗效提高可能有较大的关系。天然来源的药物 ADM、MMC和 VCR之间 ,无论在 1PPC或 5 PPC水平 ,其相关系数均较大 (r=0 .5 5 39～0 .72 0 8) 。

麒麟菜中蕨藻红素抗肿瘤活性研究

目的 :探讨把蕨红藻素 (caulerpin)发展成为抗肿瘤药物的可能性。方法 :检测caulerpin对细胞株HL6 0的细胞毒作用及诱导细胞凋亡作用。结果 :Caulerpin对HL6 0细胞有一定的细胞毒和细胞诱导凋亡作用。结论

脑胶质瘤组织培养化疗药物敏感性的研究

目的建立脑胶质瘤的组织培养药敏检测法,用于筛选化疗药物及指导临床个体化化疗。方法应用组织培养药敏检测法对69例人脑胶质瘤标本进行化疗药物敏感性测定,所测药物为脑肿瘤常用化疗药物顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)、替尼泊甙(VM26)、尼莫司汀(ACNU)、替莫唑胺(TMZ)及DDP+VM26组合。比较6组化疗药物体外抗肿瘤作用的差异,并分析药物敏感性与病人临床资料之间的相关性。结果DDP+VM26组合用药的敏感性与VM26单独用药比较,差异无统计学意义,但明显优于其他4种单药。病人性别、年龄、肿瘤初发或复发均对药物敏感性无显著性影响;除组合用药DDP+VM26外,其他药物的敏感性与病理分级无显著相关性。结论胶质瘤标本不同个体对同一药物及同一个体对不同药物的敏感性差异很大,脑胶质瘤化疗应优先选择以VM26为主的联合用药。

口腔颌面癌肿化疗药物敏感性检测对临床化疗的指导价值

目的 本研究目的是评价口腔颌面癌肿活检标本体外化疗药敏检测结果对临床化疗效果和个体化疗方案制定的指导意义。方法 6 3例口腔颌面肿瘤病人纳入研究 ;化疗前活检切取肿瘤标本 ,用改良MTT法进行 8种常用化疗药物顺铂 (cis platin ,CDDP)、表阿霉素 (epi adriamycin ,E ADM )、长春地辛 (vindesin ,VDS)、5 氟尿嘧啶 (5 fluorouracil,5 FU)、平阳霉素(pingyangmycin ,PYM)、氨甲喋呤 (methortrexatum ,MTX)和紫杉醇 (paclitaxel,Taxol) .、替尼泊甙 (teniposide,Vm 2 6 )的药敏检测 ,6 3例病人接受不同方案的化学治疗 ,并对化疗近期疗效进行了评价。结果 应用各药物的 5倍峰血浆浓度得到 8种药物对 6 3例标本肿瘤细胞体外生长抑制率。化疗方案所用药物对肿瘤细胞的平均生长抑制率超过 5 0 %的有 16例病人 ,临床化疗结果全部有效 ;平均生长抑制率超过 30 %而 <5 0 %的有 2 7例病人 ,临床化疗 2 2例有效 ;而生长抑制率 <30 %的 2 0例病人 ,化疗结果仅 7例有效。结论 化疗药物对肿瘤细胞的体外平均生长抑制率和临床化疗有效率呈明显正相关 ,采用改良MTT法完成的化疗药敏检测对临床选择有效的化疗药物具有指导意义 ,提示体外药敏检测可用于口腔颌面癌肿的“个体化”化疗方案设计。

白芍苷R1体外抗细胞增殖活性初步研究

[目的]观察白芍苷R1的体外抗细胞增殖药理活性。[方法]采用HeLa、K562两种癌细胞株以及小鼠巨噬细胞株J774体外培养进行细胞增殖实验,对白芍苷R1的体外药理活性进行观察。[结果]白芍苷R1对两种癌细胞株的增殖均有一定的抑制作用,对J774巨噬细胞增殖有较强的抑制作用。[结论]白芍苷R1可能具有一定的抗肿瘤和抗炎免疫抑制活性。

恶性胸腔和腹腔积液中ERCC1和BRCA1 mRNA的表达水平与顺铂敏感性的关系

目的:本研究旨在探讨肿瘤特殊转移灶恶性胸腔/腹腔积液中核苷酸切除修复交叉互补组1(excision repair cross-complementing group 1,ERCC1)基因和乳腺癌易感基因1(breast cancer 1,BRCA1)的表达水平与顺铂体外药物敏感性之间的关系。方法:前瞻性收集46例Ⅳ期恶性肿瘤患者的恶性胸腔/腹腔积液,分离出肿瘤细胞后,采用体外药敏试验三磷酸腺苷生物荧光法检测(adenosine triphosphate-bioluminescence assay,ATP-TCA)法检测肿瘤细胞对顺铂的药物敏感性,实时荧光定量PCR检测ERCC1和BRCA1 mRNA的相对表达水平。结果:在非小细胞肺癌患者的恶性胸腔/腹腔积液中,肿瘤细胞的ERCC1 mRNA相对表达水平与顺铂抗药性呈正相关(P=0.001,r=0.685)。非小细胞肺癌患者(P=0.014,r=0.541)和胃癌患者(P=0.002,r=0.625)恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞的BRCA 1 mRNA相对表达水平与顺铂抗药性呈正相关。ERCC1和BRCA1对顺铂药物敏感性的影响存在交互作用(所有患者P=0.010;胃癌患者P=0.027)。结论:恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞的ERCC1和BRCA1 mRNA的相对表达水平与顺铂体外药物敏感性相关。联合检测ERCC1和BRCA1这2种基因较只采用其中一种基因在预测顺铂药物敏感性方面的价值更大。

蜂胶超临界CO_2萃取物的体外抗肿瘤试验研究

目的研究蜂胶的超临界CO2萃取物的体外抗肿瘤作用。方法以蜂胶的超临界CO2萃取物(SE-P)为原料,采用MTT法研究其对U937、95D、SGC-7901和TE-1共4株肿瘤细胞的体外抑制作用,并与市售蜂胶乙醇提取物(ME-P)和蜂胶超临界CO2萃余物95%乙醇提取物(RE-P)的抗肿瘤活性进行对比。结果SE-P在体外对肿瘤细胞U937、95D、SGC-7901和TE-1具有较强的抑制作用,IC50分别为117.42μg/mL、138.92μg/mL、37.76μg/mL和67.89μg/mL。除95D细胞外,SE-P对其他3株肿瘤细胞的最高抑制率均高于ME-P和RE-P。结论蜂胶的超临界CO2萃取物(SE-P)对体外培养的肿瘤细胞有较强的生长抑制作用。

抗癌药物对体外胃癌细胞生长的抑制作用

目的探讨 8种抗癌药物对体外胃癌细胞株的抑制作用。方法选用不同剂量的抗癌药物与胃癌细胞株BGC 82 3孵育不同时间后 ,用MTT法测定其细胞增长抑制率。结果 8种抗癌药物对细胞抑制率顺序 :顺铂(diamminedichloroplatinum ,DDP) ,足叶乙甙 (etoposide,VP 16 ) ,5 氟脲嘧啶 (5 fluorouracilum ,5 Fu) ,长春新碱(vincristin ,VCR) ,阿霉素 (adriamycin ,ADM) ,丝裂霉素 (mitomycin ,MMC) ,阿糖胞苷 (arabinosylcytosine ,Ara c) ;对氨甲喋呤 (methotrexate,MTX)不敏感。其抑制率有随药物浓度增加、作用时间延长而增高的趋势。结论 8种抗癌药物除MTX外 ,对BGC 82 3细胞均有明显的抑制作用 ,但存在一定差异 ;从本实验条件看 ,以中等浓度。

人肺腺癌干细胞对顺铂和卡铂的药物敏感度分析

目的:分析人肺腺癌干细胞(lung adenocarcinoma stem cell,LASC)对顺铂(cisplatin,DDP)和卡铂(carboplatin,CBP)的药物敏感度。方法:人肺腺癌细胞SPC-A1、AG及CPA-Y2经DDP和CBP作用后,应用CCK-8(cell countingkit-8)比色法检测细胞存活率,应用免疫荧光检测法测定药物生存细胞(drug surviving cell,DSC)的表型特征。通过磁性细胞分选技术分离肺腺癌干细胞,应用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)示踪技术检测DSC中的肿瘤干细胞,分析DSC对DDP和CBP的药物敏感度。结果:LASC具有细支气管肺泡干细胞(bronchioalveolar stem cell,BASC)表型(OCT4+CCSP+SP-C+)。将此类癌干细胞(CD221+)与肺腺癌分化细胞(CD221-)混合后检测DSC发现,后者具有OCT4+BASC表型。DSC对铂类药物具有显著抗性。结论:肺腺癌干细胞对DDP和CBP具有显著耐药性,可能是化疗后肿瘤复发的根源。

肿瘤新药Ⅱ期临床试验中的多阶段设计

在肿瘤新药Ⅱ期临床试验中,往往要对多个瘤种、多种剂量或用法进行探讨,目的是淘汰无效剂量、筛选敏感瘤种,以便进一步深入研究。当某试验组疗效未达到预期效果时,研究者希望尽可能早地终止该试验组的研究,避免更多的受试者接受无效的治疗。本文介绍多阶段设计,包括单阶段设计、二阶段设计和三阶段设计的统计学原理和设计思路,并提供各阶段设计所需样本含量和早期终止的价值,并以实例说明。

脑胶质瘤体外化疗药物敏感性试验与耐药基因蛋白表达的相关性研究

目的研究脑胶质瘤耐药相关基因蛋白的表达情况,分析其与化疗药物体外敏感性之间的相关性。方法采用组织培养药敏检测法测定50例脑胶质瘤标本对五种不同类型化疗药物:顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、替尼泊甙(teniposide,VM26)、尼莫司汀(nimustine,ACNU)和替莫唑胺(temozolomide,TMZ)的体外敏感性(通过计算体外抑制率);同时在组织芯片平台上,运用免疫组织化学法检测耐药相关蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、P-170、TopoⅡ、谷胱苷肽-S-转移酶π(GST-π)的表达,并用免疫组织化学法和原位杂交法检测P53蛋白及p53基因的表达。结果①ACNU体外抑制率与GST-π表达水平之间呈显著性负相关(r=-0.318,P<0.05)。②耐药相关蛋白GST-π与P-170、TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关(r分别为0.317和-0.298,P<0.05)。③突变型P53蛋白与野生型p53mRNA之间呈显著性负相关(r=-0.806,P<0.001)。④突变型P53蛋白与TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关(r=0.401,P<0.01)。结论肿瘤体外药敏试验结合耐药相关基因蛋白的检测,对于胶质瘤个体化化疗方案的制定及临床化疗疗效的预测等具有重要意义。

光合细菌制剂对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用

目的 观察两种光合细菌制剂对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用。方法 以荷S180 实体瘤小鼠为模型 ,灌胃给药 ,连续 10d ,计算抑瘤率 ,测定小鼠脾、胸腺指数 ,中性红比色法测定腹腔巨噬细胞吞噬功能。结果 光合细菌制剂可促进小鼠脾及胸腺增殖 ,提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能 ,并对S180 有一定的抑制作用 ,抑瘤率平均分别为 36 .1%和 4 2 .7%。

RUNX3基因对人乳腺癌细胞BCAP-37药物敏感性作用的实验研究

目的:探讨RUNX3基因对人乳腺癌细胞BCAP-37的药物敏感性的调节作用。方法:构建RUNX3基因的小干扰RNA载体并将其转导入BCAP-37细胞,获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和Western blot进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后药物敏感性的变化;流式细胞仪检测细胞转染前后对多柔比星的蓄积浓度的变化;DNALadder法和流式细胞仪检测细胞转染前后对DDP诱导的凋亡的变化;RT-PCR和Western blot检测耐药相关蛋白P-gp和MRP,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。结果:成功构建了RUNX3的小干扰RNA载体;成功建立了稳定的RUNX3低表达的乳腺癌细胞模型;下调RUNX3的表达能够显著降低BCAP-37细胞对长春新碱(P=0.011)、多柔比星(P=0.0004)5-FU(P=0.005)和DDP(P=0.0002)的敏感性,减少细胞内多柔比星的蓄积;转染RUNX3小干扰RNA后的细胞的抗凋亡能力明显增强,且高表达P-gp和Bcl-2,而Bax和MRP基因表达未见明显变化。结论:下调Runx3基因能够降低乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性,提示RUNX3在乳腺癌的发生和发展中可能扮演重要角色。

喜树碱衍生物抗肿瘤活性的初步筛选及部分作用机制

目的通过体内、外实验筛选喜树碱衍生物Ⅰ-Ⅻ的抗肿瘤活性并初步探讨其作用机制。方法四甲基偶氮唑法（MTT）检测喜树碱衍生物对多种肿瘤细胞的抑制率;建立荷瘤小鼠模型测定抑瘤率;采用脾细胞增殖法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞生成白介素2（IL-2）的含量,Griess法检测荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞生成一氧化氮（NO）的含量,放免法测定荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞生成肿瘤坏死因子α（TNFα-）的含量。结果衍生物Ⅶ、Ⅷ体外能明显抑制肿瘤细胞增殖,衍生物Ⅷ对荷瘤小鼠具有较强的抑瘤作用,衍生物Ⅶ、Ⅷ可降低荷瘤小鼠NO,升高TNFα-和IL-2,并且衍生物Ⅷ呈明显的剂量依赖关系。结论通过体内外的初步筛选得到的衍生物Ⅷ能高效杀伤肿瘤细胞,具有进一步研究开发前景。

阿霉素前体脂质体对大鼠心肝毒性及对实验性肿瘤的作用

目的：研究阿霉素前体脂质体［ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ（ＤＲ），ｐｒｏｌｉｐｏｓｏｍｅ（ＰＬ），ＤＲＰＬ］对大鼠心肝毒性及对荷瘤小鼠的抗肿瘤活性。方法：以酶活性变化为指标，结合病理组织学检查，观察药物对大鼠的心肝毒性及荷瘤小鼠的生命延长率和药物的抗肿瘤活性。实验动物分为ＤＲＰＬ组和ＤＲ组，其中２．００，１４０，０９８ｍｇ·ｋｇ１对应剂量观察药物对大鼠的毒性；４，２，１ｍｇ·ｋｇ１对应剂量观察药物的抗肿瘤活性。结果：与ＤＲＰＬ相比，ＤＲ可明显增加大鼠血清ＬＤＨ、ＣＫ、ＧＰＴ及ＧＯＴ的活性，ＤＲＰＬ对大鼠心肌细胞的损伤明显小于ＤＲ。相同剂量间相比ＤＲＰＬ延长腹水型小鼠移植瘤ＥＡＣ、Ｈｅｐｓ的存活天数明显高于ＤＲ。结论：ＤＲＰＬ对大鼠心肝毒性明显小于相同剂量的ＤＲ，ＤＲＰＬ不但保持了ＤＲ的抗肿瘤活性，而且有明显增效作用。

老年胃癌原发灶与淋巴结转移灶体外化疗药敏性的差异及意义

目的比较老年胃癌原发灶与淋巴结转移灶体外化疗药敏性的差异并探讨其意义。方法对35例伴淋巴结转移的老年胃癌患者(≥60岁)和31例对照组胃癌患者(<60岁)的肿瘤原发灶、淋巴结转移灶进行MTT法原代细胞培养化疗药敏性实验,比较不同病灶肿瘤细胞对11种化疗药物敏感性的差异。结果老年组患者有6/11种化疗药物对原发灶、淋巴结转移灶的肿瘤细胞抑制率不同(均P<0.05),其中L-OHP、CDDP、MMC、THP对转移淋巴结肿瘤细胞抑制率明显低于原发灶(均P<0.05),PTX、EPI对原发灶肿瘤细胞抑制率明显低于淋巴结转移灶(均P<0.05)。与对照组比较,原发灶5-FU、PTX、EPI、MMC、MTX对老年患者肿瘤细胞抑制率低于对照组(均P<0.05);转移灶中5-FU、L-OHP、CDDP对老年患者肿瘤细胞抑制率较对照组降低(均P<0.05)。结论老年胃癌淋巴结转移灶对化疗药物敏感性与原发灶及对照组比较均存在异质性;老年肿瘤原发灶的化疗药敏性结果不能准确反映转移淋巴结的耐药性。