逆转录病毒的高效包装及转基因鸡技术平台的建立

转基因鸡及输卵管生物反应器正日益成为生物领域研究的热点之一,当前研究转基因鸡最成功的方法即为逆转录病毒介导法,但目前国内尚无系统报道逆转录病毒法制备转基因鸡的平台技术。为加快国内这一领域的研究步伐,本文较详尽的介绍了从逆转录病毒包装、竞争法包装泛嗜性VSV-G病毒、病毒包装条件的优化、病毒的浓缩、辅助病毒检测、鸡胚盘下腔注射等方法技术,并分别在体外鸡胚胎原代成肌细胞(CFM)和体内鸡胚中检测目的标记基因GFP的病毒感染整合效率,为今后转基因鸡的研究提供了一个实用的技术平台。

逆转录病毒法制备转基因鸡的方法分析

随着生物制药业的迅速发展,转基因鸡已逐渐成为生物领域研究的热点之一。为建立和优化逆转录病毒法制备转基因鸡技术平台,以pHIT-Myc3为载体,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记基因,采用共转染法包装泛嗜性VSV-G假逆转录病毒,浓缩后分别体外侵染鸡胚胎成肌细胞和体内胚盘下腔接种新生种蛋并孵化出雏。分别抽提成肌细胞、孵化5d的全胚和新生雏鸡不同脏器的基因组DNA进行PCR鉴定分析,结果分别在细胞和5d全胚胎及新生雏鸡的胸腺和皮肤中检测到了标记基因EGFP的存在,表明逆转录病毒法成功制备出转基因鸡,同时转基因鸡技术平台中的方法技术条件也得到了有效优化,为转基因鸡的进一步研究提供参考。