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Reverse Genetic Analysis of Transcription Factor Os Hox9, a Member of Homeobox Family, in Rice 被引量:5
1
作者 AI Li-ping SHEN Ao +4 位作者 GAO Zhi-chao LI Zheng-long SUN Qiong-lin LI Ying-ying LUAN Wei-jiang 《Rice science》 SCIE 2014年第6期312-317,共6页
Homeobox transcription factors participate in the growth and development of plants by regulating cell differentiation, morphogenesis and environmental signal response. To reveal the functions of these transcription fa... Homeobox transcription factors participate in the growth and development of plants by regulating cell differentiation, morphogenesis and environmental signal response. To reveal the functions of these transcription factors in rice, we constructed the RNAi vectors of OsHox9, a member of homeobox family, and analyzed the function of OsHox9 using reverse genetics. The plant height and tillering number of RNAi transgenic plants decreased compared with those of wild-type plants. Reverse transcdption-polymerase chain reaction analysis showed that OsHox9 expression reduced in the transgenic plants with phenotypic variance, whereas that in the transgenic plants without phenotypic variance was similar to that in the wild-type plants. This result suggests that the phenotypes of the transgenic plants were caused by RNAi effects. The tissue-specificity of OsHox9 expression indicated that it was expressed in different organs, with high expression in stem apical medstem and young panicles. Subcellular location of OsHox9 demonstrated that it was localized on the cell membrane. 展开更多
关键词 expression analysis homeobox transcription factor subcellular location reverse genetics RICE rna interference
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植物中RNA干扰技术的研究与应用 被引量:9
2
作者 陈李淼 赵琳 +1 位作者 郝迪萩 李文滨 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期122-128,共7页
RNA干扰(RNAi)是与靶基因同源的双链RNA引发的,在真菌、植物和动物中普遍存在的序列特异的转录后基因沉默(PTGS)现象。该方法的研究是目前分子生物学和基因工程领域研究的热点之一。作为反向遗传学研究的新工具,RNAi在基因功能研究、基... RNA干扰(RNAi)是与靶基因同源的双链RNA引发的,在真菌、植物和动物中普遍存在的序列特异的转录后基因沉默(PTGS)现象。该方法的研究是目前分子生物学和基因工程领域研究的热点之一。作为反向遗传学研究的新工具,RNAi在基因功能研究、基因治疗以及病毒防治等方面发挥着巨大的作用,文章将RNAi的发现、作用机理、特点、导入思路和方法及其在植物中的广泛应用进行了综述。 展开更多
关键词 rnaI 作用机理 基因沉默载体 基因功能 遗传改良 植物抗逆
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葡萄抗病毒双价RNAi植物表达载体构建及其对烟草的遗传转化 被引量:5
3
作者 田莉莉 牛良 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期997-1003,I0001,共8页
【目的】为获得兼抗2种葡萄病毒的抗病植物新材料,【方法】利用Gateway技术成功构建了葡萄抗病毒双价RNAi表达载体。先采用RT-PCR分别克隆获得了葡萄卷叶病毒(GLRaV-3)和扇叶病毒(GFLV)外壳蛋白基因保守区段,用重叠延伸PCR方法串联获得... 【目的】为获得兼抗2种葡萄病毒的抗病植物新材料,【方法】利用Gateway技术成功构建了葡萄抗病毒双价RNAi表达载体。先采用RT-PCR分别克隆获得了葡萄卷叶病毒(GLRaV-3)和扇叶病毒(GFLV)外壳蛋白基因保守区段,用重叠延伸PCR方法串联获得了干扰片段GLRaV-GFLV(508 bp);通过TOPO克隆将该片段克隆入载体pENTR/SD/D构建了入门克隆载体pENTR/SD/D-GLRaV-GFLV;再经过LR反应使入门克隆载体pENTR/SD/D-GLRaV-GFLV上的干扰片段GLRaV-GFLV替换目标载体pH7GWIWG2(Ⅰ)上的ccdB基因,形成了含2种葡萄病毒基因片段的RNAi表达载体pH7GWIWG2(Ⅰ)-GLRaV-GFLV,用冻融法将其转入农杆菌菌株EHA105,以此作为工程菌进行转化烟草,【结果】经PCR鉴定证明目的片段已成功转入烟草中。【结论】研究基于Gateway技术的RNAi植物表达载体的构建和对烟草的遗传转化,为诱导转基因植物转录后基因沉默、获得抗2种病毒病的植物新材料提供了可能。 展开更多
关键词 葡萄 抗病毒 rnai植物表达载体 烟草 遗传转化
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番木瓜β-Gal基因RNAi双T-DNA植物表达载体的构建及其遗传转化的初步研究 被引量:2
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作者 何玮毅 陈晓静 +2 位作者 申艳红 卢秉国 潘东明 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期556-561,共6页
克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA1300上hptⅡ基因,构建中间表达载体p130... 克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA1300上hptⅡ基因,构建中间表达载体p1300-/MFRG,分离单T-DNA区段,与载体pCAMBIA2301构建RNAi双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG。酶切分析和PCR检测表明,p2301/TTRG已被成功导入农杆菌EHA105。通过遗传转化,初步获得了GUS染色呈阳性且具Kan抗性的番木瓜胚性愈伤组织。 展开更多
关键词 番木瓜 Β-半乳糖苷酶 rna干扰 双T—DNA植物表达载体 遗传转化
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苹果抗病毒RNAi表达载体构建及转化烟草研究 被引量:4
5
作者 田莉莉 牛良 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期783-789,共7页
病毒病严重影响中国苹果生产。为创制抗病毒植物新材料,本研究采用Gateway技术构建了含3种苹果潜隐性病毒CP基因片段的RNAi植物表达载体,并对烟草进行了遗传转化。采用RT-PCR分别克隆获得了苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎沟病毒和苹果茎痘病... 病毒病严重影响中国苹果生产。为创制抗病毒植物新材料,本研究采用Gateway技术构建了含3种苹果潜隐性病毒CP基因片段的RNAi植物表达载体,并对烟草进行了遗传转化。采用RT-PCR分别克隆获得了苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎沟病毒和苹果茎痘病毒的CP基因保守区段,用重叠延伸PCR方法串联获得了902 bp的大片段ALV用作干扰片段。先通过TOPO克隆将该片段克隆入载体pENTR/SD/D,构建了入门载体pENTR-ALV,再经LR反应使干扰片段ALV替换目标载体pHELLSGATE12上的ccdB基因,形成了同时含3种病毒CP基因片段的RNAi表达载体PH12-ALV。用冻融法将其转入根癌农杆菌菌株EHA105,并用叶盘法遗传转化烟草品种本氏烟,经PCR鉴定,结果表明目的基因片段已成功转入烟草中。 展开更多
关键词 苹果 抗病毒 rnai表达载体 烟草 遗传转化
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RNA干扰技术及其在神经科学研究中的应用 被引量:1
6
作者 王汉森 张玉稚 +1 位作者 潘虹 吴希如 《中国神经科学杂志》 CSCD 2003年第5期332-336,共5页
RNA干扰 (RNAi)是指生物体内由双链RNA介导同源序列mRNA的特异性降解 ,从而导致基因沉默的现象。近年来 ,随着对RNAi研究的不断深入 ,其作用机制正在逐步被阐明 ;同时作为阻断基因表达的新手段 ,RNAi技术也日趋完善和成熟。以其高效性... RNA干扰 (RNAi)是指生物体内由双链RNA介导同源序列mRNA的特异性降解 ,从而导致基因沉默的现象。近年来 ,随着对RNAi研究的不断深入 ,其作用机制正在逐步被阐明 ;同时作为阻断基因表达的新手段 ,RNAi技术也日趋完善和成熟。以其高效性和特异性 ,RNAi为反向遗传学在神经科学研究中的应用提供了有力的工具。本文仅就RNAi技术的有关研究进展及其在神经科学研究中的应用作一概述。 展开更多
关键词 rna干扰技术 神经元 神经科学 临床应用 反向遗传学 研究进展
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RNA干扰技术及其在植物上的应用前景 被引量:1
7
作者 苏丹 《内蒙古煤炭经济》 2006年第6期100-102,共3页
本文介绍了RNA干扰,即RNAi(RNA interference)。对RNAi的发现和发生的可能进行了阐述,并提出了其在植物中的应用前景,主要包括植物功能基因组研究和植物遗传改良中的应用。
关键词 rna干扰 植物功能基因组研究 植物遗传改良 应用前景
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siRNA干涉技术在黄曲霉毒素抑制中的研究
8
作者 焦健 杜鹏 《中国农学通报》 2020年第5期30-36,共7页
构建真菌基因敲除突变体的传统方法周期较长,为了快速检测和高通量筛选具有特定功能的目标基因,本研究利用小分子RNA干涉技术,沉默了黄曲霉毒素生物合成关键基因,有效降低了黄曲霉毒素B1(AFB1)的生物合成。通过设计合成人工小干涉RNA(ar... 构建真菌基因敲除突变体的传统方法周期较长,为了快速检测和高通量筛选具有特定功能的目标基因,本研究利用小分子RNA干涉技术,沉默了黄曲霉毒素生物合成关键基因,有效降低了黄曲霉毒素B1(AFB1)的生物合成。通过设计合成人工小干涉RNA(artificial siRNA),特异靶向黄曲霉毒素合成路径的关键基因aflR,将siRNA直接转化黄曲霉原生质体,有效沉默了黄曲霉毒素合成的关键调控基因aflR,并导致AFB1的合成明显减少。利用特异靶向黄曲霉毒素合成路径中其他11个靶标基因的siRNAs,通过原生质体转化方法可直接沉默这些基因,沉默后这些基因的转录水平均显著降低,其中hypC和aflW两个基因沉默后AFB1的生物合成量与对照相比下降显著。此外,利用特异靶向黄曲霉毒素合成基因簇外基因的siRNA,如pks-nrps基因,通过siRNA干涉技术沉默该基因同样可显著降低AFB1的合成。因此,本研究借助小分子RNA干涉技术,建立了一种快速检测和高通量筛选黄曲霉毒素生物合成路径相关基因的反向遗传学方法。 展开更多
关键词 小分子rna 基因沉默 黄曲霉毒素 rna干涉 反向遗传学技术
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反向遗传学在现代生物学领域中的应用 被引量:7
9
作者 杨宇 王丹 李浩戈 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期43-45,54,共4页
反向遗传学是一种新兴的分子生物学技术。主要从反向遗传学的含义、研究方法及应用等角度进行综述,并介绍有关反向遗传学研究的最新进展。
关键词 反向遗传学 植物抗病毒 rna干扰
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植物负链RNA病毒反向遗传学体系前沿研究进展 被引量:1
10
作者 冯明峰 冯致科 +2 位作者 李正和 王献兵 陶小荣 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第35期4073-4083,共11页
负链RNA病毒是一类动植物上的重要病原,不仅危害人类、哺乳动物的健康,而且严重威胁家禽和农作物的安全生产.病毒反向遗传学体系是一种从cDNA克隆拯救病毒的现代病毒学分子操作技术,对于研究病毒侵染循环、致病机制和寄主相互作用至关重... 负链RNA病毒是一类动植物上的重要病原,不仅危害人类、哺乳动物的健康,而且严重威胁家禽和农作物的安全生产.病毒反向遗传学体系是一种从cDNA克隆拯救病毒的现代病毒学分子操作技术,对于研究病毒侵染循环、致病机制和寄主相互作用至关重要.尽管动物负链RNA病毒反向遗传学体系的构建在20多年前就已取得成功,但植物负链RNA病毒的反向遗传学体系直到近年才有所突破.我国和美国科学家通过各种创新手段,相继成功构建了多种不分节段和分节段植物负链RNA病毒的反向遗传学体系,为植物负链RNA病毒的进一步深入研究提供了关键的技术体系,开启了植物负链RNA病毒研究的新时代.本文系统地回顾了植物负链RNA病毒反向遗传学体系的发展现状和最新研究进展,并对该领域未来发展方向和应用前景进行了探讨. 展开更多
关键词 植物负链rna病毒 反向遗传学体系 病毒侵染性克隆 病毒拯救
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甲型H1N1流感减毒活疫苗制备原理研究进展
11
作者 谭鸣鸣 孙文逵 施毅 《国际呼吸杂志》 2015年第14期1086-1089,共4页
流感是由流感病毒引起的一种以侵害呼吸系统为主的疾病,在世界各国广泛流行。其中甲型H1N1流感病毒以其高易感性、快传播性威胁着公共卫生健康,冲击着社会经济发展。相较于目前应用的甲型H1N1三联灭活疫苗生产过程复杂,周期长,减毒... 流感是由流感病毒引起的一种以侵害呼吸系统为主的疾病,在世界各国广泛流行。其中甲型H1N1流感病毒以其高易感性、快传播性威胁着公共卫生健康,冲击着社会经济发展。相较于目前应用的甲型H1N1三联灭活疫苗生产过程复杂,周期长,减毒活疫苗有许多优势。传统的冷适应技术开创了减毒活疫苗的历史先河,目前流行的反向遗传技术打破了减毒活疫苗的发展瓶颈。然而,病毒抗原的高频变异使得疫苗的研发总是远远滞后于新型病毒株的出现,miRNA介导的RNA干扰为缩短疫苗研制周期,快速构建新型疫苗提供了新思路。本文主要对甲型H1N1减毒活疫苗制备原理的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 甲型H1N1 减毒活疫苗 冷适应技术 反向遗传技术 rna干扰
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