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利用反向遗传操作技术产生ZJI株鹅源新城疫病毒
被引量:
13
1
作者
刘玉良
张艳梅
+6 位作者
胡顺林
吴艳涛
刘秀梵
龙进学
石火英
张小荣
张如宽
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期780-783,共4页
利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIne...
利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIneoNP、pCIneoP与pCIneoL)进行共转染。通过间接免疫荧光实验(Indiectimmunofluorescence assay,IFA)以及接种鸡胚后进行血凝(Hemagglutinin,HA)与血凝抑制(Hemagglutinininhibition,HI)试验、RT-PCR扩增和电镜观察,结果均证实全基因组cDNA克隆NDV3GM122与La Sota毒株表达载体共转染组产生了有血凝性的鹅源新城疫病毒,而NDV3GM122与ZJI株表达载体共转染组暂未检测到有血凝性的病毒。ZJI株鹅源新城疫病毒的拯救成功为对该病毒进行功能基因组研究和疫苗的研制等后续工作打下了基础。
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关键词
反向遗传操作技术
鹅源新城疫病毒
鹅
病毒拯救
下载PDF
职称材料
新城疫病毒基因Ⅲ型强毒JS/7/05/Ch的拯救
2
作者
宋庆庆
朱杰
+4 位作者
丁平云
段志强
屠颉
刘晓文
刘秀梵
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第10期37-41,共5页
新城疫病毒Ⅰ系苗Mukteswar株为中等毒力,野外分离株JS/7/05/Ch的基因组核苷酸与其具有高于99%的相似性,但其毒力却明显强于前者。为了给基因Ⅲ型NDV的遗传进化机制研究提供基础,本研究成功构建了JS/7/05/Ch株的反向遗传平台。首先根据G...
新城疫病毒Ⅰ系苗Mukteswar株为中等毒力,野外分离株JS/7/05/Ch的基因组核苷酸与其具有高于99%的相似性,但其毒力却明显强于前者。为了给基因Ⅲ型NDV的遗传进化机制研究提供基础,本研究成功构建了JS/7/05/Ch株的反向遗传平台。首先根据GenBank上公布的基因Ⅲ型新城疫病毒JS/7/05/Ch株基因组全序列设计并合成8对引物,RT-PCR扩增目的片段后,分别依次亚克隆至pCR2.1载体中构建含有JS/7/05/Ch全长基因组cDNA的克隆质粒pJS/7/05/Ch,然后再通过特异性酶切位点将JS/7/05株全长基因组cDNA转移到TVT7R(0.0)转录载体中,成功构建出含JS/7/05/Ch株基因组全长cDNA的转录质粒pTVT/JS705。然后将该质粒与3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,转染60h后将该细胞及其上清接种鸡胚;血凝(HA)试验和RT-PCR结果表明JS/7/05/Ch株新城疫病毒被成功拯救。
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关键词
新城疫病毒
基因Ⅲ型
反向遗传技术
拯救
下载PDF
职称材料
题名
利用反向遗传操作技术产生ZJI株鹅源新城疫病毒
被引量:
13
1
作者
刘玉良
张艳梅
胡顺林
吴艳涛
刘秀梵
龙进学
石火英
张小荣
张如宽
机构
扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期780-783,共4页
基金
国家"973项目"(G19990199)
国家自然科学基金项目(39893290)
国家科技攻关项目(2004BA519A44)~~
文摘
利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIneoNP、pCIneoP与pCIneoL)进行共转染。通过间接免疫荧光实验(Indiectimmunofluorescence assay,IFA)以及接种鸡胚后进行血凝(Hemagglutinin,HA)与血凝抑制(Hemagglutinininhibition,HI)试验、RT-PCR扩增和电镜观察,结果均证实全基因组cDNA克隆NDV3GM122与La Sota毒株表达载体共转染组产生了有血凝性的鹅源新城疫病毒,而NDV3GM122与ZJI株表达载体共转染组暂未检测到有血凝性的病毒。ZJI株鹅源新城疫病毒的拯救成功为对该病毒进行功能基因组研究和疫苗的研制等后续工作打下了基础。
关键词
反向遗传操作技术
鹅源新城疫病毒
鹅
病毒拯救
Keywords
reverse genetics technique
,
newcastle disease virus of goose origin
,
goose
,
rescue of virus
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
新城疫病毒基因Ⅲ型强毒JS/7/05/Ch的拯救
2
作者
宋庆庆
朱杰
丁平云
段志强
屠颉
刘晓文
刘秀梵
机构
扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第10期37-41,共5页
基金
国家自然科学基金(31172338)
现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-41-G07)
公益性行业(农业)专项经费(201003012)
文摘
新城疫病毒Ⅰ系苗Mukteswar株为中等毒力,野外分离株JS/7/05/Ch的基因组核苷酸与其具有高于99%的相似性,但其毒力却明显强于前者。为了给基因Ⅲ型NDV的遗传进化机制研究提供基础,本研究成功构建了JS/7/05/Ch株的反向遗传平台。首先根据GenBank上公布的基因Ⅲ型新城疫病毒JS/7/05/Ch株基因组全序列设计并合成8对引物,RT-PCR扩增目的片段后,分别依次亚克隆至pCR2.1载体中构建含有JS/7/05/Ch全长基因组cDNA的克隆质粒pJS/7/05/Ch,然后再通过特异性酶切位点将JS/7/05株全长基因组cDNA转移到TVT7R(0.0)转录载体中,成功构建出含JS/7/05/Ch株基因组全长cDNA的转录质粒pTVT/JS705。然后将该质粒与3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,转染60h后将该细胞及其上清接种鸡胚;血凝(HA)试验和RT-PCR结果表明JS/7/05/Ch株新城疫病毒被成功拯救。
关键词
新城疫病毒
基因Ⅲ型
反向遗传技术
拯救
Keywords
newcastle
disease
virus
genotype Ⅲ
reverse genetics technique
rescue
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用反向遗传操作技术产生ZJI株鹅源新城疫病毒
刘玉良
张艳梅
胡顺林
吴艳涛
刘秀梵
龙进学
石火英
张小荣
张如宽
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
13
下载PDF
职称材料
2
新城疫病毒基因Ⅲ型强毒JS/7/05/Ch的拯救
宋庆庆
朱杰
丁平云
段志强
屠颉
刘晓文
刘秀梵
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013
0
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