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葡萄浆果内坏死病毒RT-q PCR检测技术建立及其在葡萄砧木中的时空分布规律
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作者 张英 原青云 +3 位作者 任芳 胡国君 范旭东 董雅凤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期2771-2780,共10页
【背景】葡萄浆果内坏死病毒(grapevine berry inner necrosis virus,GINV)是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒,该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GINV... 【背景】葡萄浆果内坏死病毒(grapevine berry inner necrosis virus,GINV)是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒,该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GINV逆转录实时荧光定量PCR(reverse transcription real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测体系;明确不同葡萄砧木对GINV的敏感性;明确GINV在寄主植株中的时空分布规律,为该病毒的监测预警提供技术支撑。【方法】根据GenBank已登录GINV的复制酶(replicase,RP)、移动蛋白(movement protein,MP)和外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计6套引物,通过常规RT-PCR和RT-qPCR筛选特异性强、扩增效果好的引物。再通过对退火温度和引物浓度等反应条件的优化建立GINV的SYBR Green I染料法RT-qPCR检测体系,并进一步对该技术的灵敏度、特异性和田间适用性进行评价。将GINV接种到贝达、SO4、101-14、140R和1103P 5种葡萄砧木上进行症状观察和病毒检测,以筛选GINV敏感性较高的指示植物。基于所建立的RT-qPCR技术对接种GINV葡萄砧木的不同生长时期、不同部位样品进行GINV检测,从而明确GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。【结果】建立了GINV SYBR Green I染料法RT-qPCR检测技术体系,其最佳引物为GINVRPYGF2/R2,最佳引物浓度为300 nmol·L^(-1),最佳退火温度为58.4℃。该技术对GINV的检测特异性强,其检测灵敏度达常规RT-PCR的1 000倍。症状观察结果表明贝达感染GINV的症状最为严重,表现为叶片系统性坏死,而其他砧木叶片仅表现褪绿斑驳和环斑症状。RT-qPCR检测结果表明GINV在EL27时期(坐果期)的相对含量最高,5个品种间的病毒相对含量在EL12(花序分明期)和EL27时期间无显著差异,EL31时期(果实增大期)的贝达与SO4、101-14、140R和1103P的病毒相对含量存在显著差异;GINV的相对含量在不同组织部位存在较大差异,由高到低依次为下部叶片、上部叶片、上部茎秆、下部茎秆、根部。【结论】建立了灵敏度高、特异性强的GINV RT-qPCR检测方法,利用该方法明确了GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。 展开更多
关键词 葡萄浆果内坏死病毒 逆转录实时荧光定量PCR 葡萄砧木 时空分布
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Altered Expression of Transcription Factor Genes in Rice Flag Leaf under Low Nitrogen Stress 被引量:4
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作者 ZHAO Ming-hui ZHANG Wen-zhong +4 位作者 MA Dian-rong Xu Zheng-jin WANG Jia-yu ZHANG Li CHEN Wen-fu 《Rice science》 2012年第2期100-107,共8页
The response of transcription factor genes to low nitrogen stress was studied to provide molecular basis for improving the absorption and utilization efficiency of nitrogen fertilizer in rice. The agilent rice genome ... The response of transcription factor genes to low nitrogen stress was studied to provide molecular basis for improving the absorption and utilization efficiency of nitrogen fertilizer in rice. The agilent rice genome arrays were used to study the varied expression of transcription factor genes in two rice varieties (SN 196 and Toyonishhiki) with different chlorophyll contents under low nitrogen stress. The results showed that a total of 53 transcription factor genes (35 down-regulated and 18 up-regulated genes at the transcription level) in flag leaves of super-green rice SN196 and 27 transcription factor genes (21 down-regulated and 6 up-regulated genes at the transcription level) in flag leaves of Toyonishiki were affected by low nitrogen stress. Among those nitrogen-responsive genes, 48 transcription factor genes in SN196 and 22 in Toyonishiki were variety-specific. There were overlapped transcription factor genes responded to low nitrogen stress between SN196 and Toyonishiki, with 1 up-regulated and 4 down-regulated at the transcription level. Distributions of low nitrogen responsive genes on chromosomes were different in two rice varieties. 展开更多
关键词 RICE flag leaf MICROARRAY real-time quantitative PCR transcription factor low nitrogen stress
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Sequence Analysis and Quantitative Detection of Norwalk-like Viruses in Cultured Oysters of China
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作者 WANG Jun TANG Qingjuan +3 位作者 YUE Zhiqin LI Zhaojie ZHANG Jin XUE Changhu 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2008年第2期223-227,共5页
We isolated 4 Norwalk-like viruses (NLVs) contaminated oysters from 33 Chinese oysters collected from local commercial sources of Shandong Province. After amplification of the RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) r... We isolated 4 Norwalk-like viruses (NLVs) contaminated oysters from 33 Chinese oysters collected from local commercial sources of Shandong Province. After amplification of the RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) region of NLVs genomes with RT-PCR, the open reading frame 1 (ORF 1) of the RdRp was sequenced and subjected to multiple-sequence alignment. The results showed that NLVs in the four isolates belong to genogroup Ⅱ. The sequence comparison showed that the similarity between four Chinese oyster isolates were higher than 99.0%, which indicated that NLVs prevalent in close areas have high homogeneity in genome sequences. In addition, the most conserved sequences between diverse NLVs were used to design primers and TaqMan probes, then the real-time quantitative PCR assay was performed. According to the standard curve of GII NLVs, the original amounts (copies) of NLVs in positive patient's fecal isolate, positive Japanese oyster isolate, and the Chinese oyster isolate were 8.9× 10^8, 1.25× 10^8 and 4.7× 10^1 respectively. The detecting limit of NLVs was 1 × 10^1 copies. This study will be helpful for routine diagnosis of NLVs pathogens in foods and thus for avoiding food poisoning in the future. 展开更多
关键词 OYSTERS Norwalk-like viruses (NLVs) reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) sequence analysis real time quantitative PCR
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齿兰环斑病毒RT-qPCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 徐匆 黄皓 +3 位作者 黄晓彦 陈彦 李昀哲 郑芝波 《贵州农业科学》 CAS 2023年第4期86-92,共7页
【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序... 【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序列保守区,使用Primer Premier 5.0设计反转录荧光定量PCR引物及TaqMan荧光探针,建立检测齿兰环斑病毒的一步法RT-qPCR。构建齿兰环斑病毒cp基因克隆质粒,并以该质粒作为标准品进行荧光定量PCR标准曲线测定;以齿兰环斑病毒、建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的病毒RNA为模板进行一步法RT-qPCR特异性检测;以10倍倍比稀释的cp基因质粒为模板进行灵敏性检测;用该法对大田18个兰花样品进行齿兰环斑病毒感染情况监测。【结果】齿兰环斑病毒一步法RT-qPCR检测法仅检出齿兰环斑病毒阳性模板,其余模板检测结果为阴性,说明检测方法具有特异性;该方法能够检测到的齿兰环斑病毒cp基因最低拷贝数为130;大田兰花样品感染齿兰环斑病毒的检出率为100%。【结论】一步法RT-qPCR是一种特异性强、灵敏度高,且适合监测实际生产过程中兰花感染齿兰环斑病毒情况的检测方法。 展开更多
关键词 兰花 齿兰环斑病毒(ORSV) 反转录-荧光定量PCR(RT-qPCR) 外壳蛋白(cp)基因
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樱桃病毒A实时荧光定量PCR检测技术的建立与应用 被引量:1
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作者 刘欢 刘格 李锐 《湖北农业科学》 2023年第7期163-169,共7页
在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特... 在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特异性强的引物(CVA-dF2、CVA-dR2),基于SYBR Green I荧光染料建立反转录实时荧光定量PCR检测CVA的方法。该方法重复性好、灵敏度高,无需借助内参基因即可准确检测目的病毒载量,绝对定量标准曲线斜率为-3.5746,决定系数R2为0.9986,扩增效率为0.9044,比常规RT-PCR检测灵敏度高10倍。该方法的建立为CVA定量研究提供了有力工具,可用于果树中CVA批量检测或低丰度病毒样品检测。 展开更多
关键词 樱桃病毒A(CVA) 反转录实时荧光定量PCR 快速检测
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不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测
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作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-17,共7页
为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感... 为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 排毒规律 反转录PCR(RT-PCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) 间接免疫荧光试验(IFA)
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植物实时荧光定量PCR内参基因的选择 被引量:72
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作者 胡瑞波 范成明 傅永福 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第6期30-36,共7页
实时荧光定量RT-PCR(real-tim e quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)具有定量准确、灵敏度高和高通量等特点,已被广泛应用于基因的表达分析。常规qRT-PCR采用相对定量进行分析,其关键步骤是选择合适的稳定内参基因进行校... 实时荧光定量RT-PCR(real-tim e quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)具有定量准确、灵敏度高和高通量等特点,已被广泛应用于基因的表达分析。常规qRT-PCR采用相对定量进行分析,其关键步骤是选择合适的稳定内参基因进行校正和标准化。持家基因被广泛用作内参基因,但在所有生理条件下均稳定表达的理想内参基因并不存在。大多数传统内参基因已不能满足qRT-PCR准确定量的要求。基于基因芯片表达数据和EST数据库并结合qRT-PCR,可以筛选稳定性好的新的内参基因。简要综述了植物qRT-PCR内参基因的研究进展,并就内参基因的选择中应注意的问题进行了探讨。 展开更多
关键词 实时荧光定量RT-PCR 内参基因 GENORM 基因表达
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‘琯溪蜜柚’荧光定量PCR内参基因的筛选 被引量:15
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作者 王梨嬛 潘永娟 +2 位作者 杨莉 蔡盛华 黄新忠 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-54,共7页
【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin ... 【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin 5个管家基因在不同材料中的表达情况,并结合geNorm、NormFinder﹑comparative Delta-CT和BestKeeper 4种评估方法进行稳定性分析。【结果】结果表明,actin1和β-tubulin是‘琯溪蜜柚’果实发育进程中较为稳定的内参基因,而EF1-α和β-tubulin则是研究不同组织特定靶基因表达中稳定的内参基因。【结论】筛选出了‘琯溪蜜柚’最佳的内参基因β-tubulin,为今后目的基因的表达分析奠定了基础。 展开更多
关键词 '琯溪蜜柚’ 荧光定量PCR 内参基因
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应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA 被引量:3
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作者 陈燃 伍迪 +2 位作者 唐榕 汪进 毛裕民 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期266-269,共4页
循环逆转录 (circulatoryreversetranscription ,CRT)是线性增长逆转录cDNA产量的一种新技术。为了将该技术用于检测HCVRNA ,通过改变CRT的循环次数 ,结合竞争PCR ,作出标准曲线。采用 16次CRT加 34次循环PCR检测了 136例HCVELISA阳性、... 循环逆转录 (circulatoryreversetranscription ,CRT)是线性增长逆转录cDNA产量的一种新技术。为了将该技术用于检测HCVRNA ,通过改变CRT的循环次数 ,结合竞争PCR ,作出标准曲线。采用 16次CRT加 34次循环PCR检测了 136例HCVELISA阳性、5 4例HCVELISA阴性和 10 8例临床可疑病人全血标本 ,并与逆转录PCR(RT -PCR)和巢式PCR (NT -PCR)的检测结果相比较 ,显示HCVRNA总检出率分别为 :5 7 9%、35 6 %、5 8 6 %。结果提示 ,CRT -PCR是一种简便有效的提高RNA检测灵敏度的方法 。 展开更多
关键词 循环逆转录 RT-PCR HCV 竞争定量PCR 丙型肝炎病
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金魁猕猴桃RT-qPCR内参基因的筛选 被引量:6
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作者 张计育 黄胜男 +3 位作者 王涛 潘德林 翟敏 郭忠仁 《上海农业学报》 CSCD 2018年第1期84-88,共5页
以'金魁'猕猴桃(Actinidia deliciosa)根、茎、叶、花瓣、花萼、雌蕊、子房、幼果为材料,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析了ACT、CYP2、RP2、GAPDH、TUB和TUA 6个常用内参基因在猕猴桃不同器官组织中的表达情况,并利用GeN... 以'金魁'猕猴桃(Actinidia deliciosa)根、茎、叶、花瓣、花萼、雌蕊、子房、幼果为材料,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析了ACT、CYP2、RP2、GAPDH、TUB和TUA 6个常用内参基因在猕猴桃不同器官组织中的表达情况,并利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件对候选内参基因的稳定性进行了评价。结果表明:ACT和TUA基因在各组织中的表达量差异较小,表达相对稳定;在利用RT-qPCR分析比较猕猴桃不同器官组织中的基因表达差异时,可选择ACT作为内参基因。 展开更多
关键词 猕猴桃 内参基因 实时荧光定量PCR
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检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法 被引量:3
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作者 张永宁 吴绍强 +5 位作者 吕继洲 冯春燕 王彩霞 邓俊花 袁向芬 林祥梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1824-1829,共6页
根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件,该方法对101~107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系。利... 根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件,该方法对101~107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系。利用德国FLI制备和保存的SBV核酸阳性(n=140)、SBV核酸阴性(n=132)和辛波血清群相关病毒核酸样品(n=16),对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证。结果表明,所建立方法与FLI研制的SBV荧光定量RT-PCR具有相近的敏感性,两者对140份SBV核酸阳性样品的检测符合率达96.4%(135/140);可灵敏地检测出1TCID50的SBV RNA,并具有良好的重复性;除道格拉斯病毒(Douglas virus)外,与辛波血清群相关病毒核酸无交叉反应。用该方法对采自内蒙古呼和浩特市某养殖场的绵羊血清(n=47)和澳大利亚进口绵羊血清(n=47)的RNA进行了检测,结果未发现SBV核酸阳性样品。SBV荧光定量RTPCR检测方法的建立为应对施马伦贝格病提供了有效的检测手段。 展开更多
关键词 施马伦贝格病毒 核酸 引物 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR
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采用荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCR alpha链CDR3谱系漂移技术的初步探讨 被引量:6
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作者 汤贤英 孙永苹 +4 位作者 马锐 朱红倩 田祖国 孙万邦 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期727-730,共4页
目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上... 目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRalpha胚系链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果:正常人外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的溶解曲线谱型图(melting curve spectratyping)呈现熔点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布,2例淋巴瘤型白血病患者外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论:荧光定量PCR溶解曲线分析TCRalpha链CDR3谱系漂移技术方法稳定简便,能较好地监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。 展开更多
关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 荧光定量PCR 溶解曲线
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体外转录法制备新城疫病毒荧光定量RT-PCR标准阳性模板 被引量:4
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作者 孙军峰 刘华雷 +1 位作者 张维 王志亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期43-46,共4页
本研究针对新城疫病毒M基因设计了1对荧光定量RT-PCR引物和Taqman探针,在上游引物的5′端引入T7启动子,采用RT-PCR方法获得了体外转录模板,并对转录产物RNA的浓度及D值进行了测定。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性... 本研究针对新城疫病毒M基因设计了1对荧光定量RT-PCR引物和Taqman探针,在上游引物的5′端引入T7启动子,采用RT-PCR方法获得了体外转录模板,并对转录产物RNA的浓度及D值进行了测定。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性范围和特异性,模板稀释度为2.95×104~2.95×108拷贝/L时,相关系数为0.998。该模板稳定性好,-80℃保存30 d后无显著变化。浓度为2.95×104~2.95×108拷贝/μL的标准品的变异系数分别为0.20%、0.28%、1.00%、0.54%、0.52%,表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 体外转录 一步法荧光定量RT-PCR
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实时荧光定量PCR检测宫颈癌组织中HGF mRNA和c-Met mRNA的表达 被引量:2
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作者 张咏梅 张雪玉 +2 位作者 刘莉莉 吴蔚 马文娟 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期234-237,共4页
目的检测宫颈癌组织中肝细胞生长因子(HGF)及其受体原癌基因c-Met的分子表达水平,并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术检测43例宫颈癌,30例宫颈上皮内瘤变Ⅲ和27例正常宫颈组织标本中HGF和c-Met的分子表达水平。结... 目的检测宫颈癌组织中肝细胞生长因子(HGF)及其受体原癌基因c-Met的分子表达水平,并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术检测43例宫颈癌,30例宫颈上皮内瘤变Ⅲ和27例正常宫颈组织标本中HGF和c-Met的分子表达水平。结果 HGF mRNA和c-Met mRNA在宫颈癌组织中均呈高表达,其与宫颈癌患者临床分期、肿瘤直径大小、浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与肿瘤的分化程度无关(P>0.05)。HGF mRNA和c-Met mRNA之间存在正相关(r=0.666,P<0.01)。结论 QRT-PCR技术可对宫颈癌组织中的HGF mRNA和c-Met mRNA表达进行定量检测;HGF mRNA和c-Met mRNA的高表达与宫颈癌的侵袭转移有关。两者联合监测有利于早期诊断宫颈癌,为宫颈癌的治疗和预后提供参考。 展开更多
关键词 宫颈癌 肝细胞生长因子 原癌基因C-MET 实时荧光定量PCR
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蓝光调控生物膜关键基因提高大肠杆菌耐酸性
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作者 吴建菊 冯守帅 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期1-7,共7页
发酵过程中的酸胁迫限制了工业微生物的发展,精细调控生物膜形成是提升大肠杆菌耐酸性的有效策略。研究基于EL222蓝光诱导蛋白开发了具有8.6倍调控效率的双质粒调控系统,用于调节生物膜形成关键因子CsgD和二鸟苷酸环化酶M(diguanylate c... 发酵过程中的酸胁迫限制了工业微生物的发展,精细调控生物膜形成是提升大肠杆菌耐酸性的有效策略。研究基于EL222蓝光诱导蛋白开发了具有8.6倍调控效率的双质粒调控系统,用于调节生物膜形成关键因子CsgD和二鸟苷酸环化酶M(diguanylate cyclase,DgcM)的表达。结果表明,在pH 5.0和15 mW/cm^(2)蓝光照射条件下,CsgD和DgcM过表达菌株耐酸性分别提高了22.3%和16.4%,生物膜含量分别增加了2.7倍和3.4倍。生物膜组成分析显示,酸性环境下多糖和蛋白质的增加以及可溶性微生物代谢产物的减少促进了细菌聚集,有助于形成更稳定的生物膜结构。实时荧光定量逆转录PCR结果证实生物膜形成相关基因转录水平显著提升。本研究构建的蓝光调控系统通过调控生物膜形成关键基因成功提高了大肠杆菌的耐酸性,这将为微生物的有机酸发酵提供参考和借鉴。 展开更多
关键词 大肠杆菌 蓝光调控 生物膜 耐酸性 实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)
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针对Asia-1型FMDV的qRT-PCR终点法中和试验的建立及初步研究 被引量:2
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作者 宋一鸣 杨洋 张志东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期42-47,共6页
为了缩短病毒中和试验(VNT)在口蹄疫病毒(FMDV)疫苗毒株选择以及病原检测中的时间,减少结果判断时人为因素的影响,试验采用qRT-PCR方法改进了传统的VNT,首先建立基于FMDV 3D序列的Taqman探针法qRT-PCR,之后使用FMDV Asia-1/JSL/06毒株感... 为了缩短病毒中和试验(VNT)在口蹄疫病毒(FMDV)疫苗毒株选择以及病原检测中的时间,减少结果判断时人为因素的影响,试验采用qRT-PCR方法改进了传统的VNT,首先建立基于FMDV 3D序列的Taqman探针法qRT-PCR,之后使用FMDV Asia-1/JSL/06毒株感染IBRS-2细胞,提取不同时间收集的细胞病毒混合物的RNA进行qRT-PCR定量检测,获得FMDV Asia-1/JSL/06毒株在IBRS-2细胞中的病毒复制曲线,确定病毒复制的终点时间,即病毒中和试验中加入细胞维持液之后的第20小时,此时使用TRIzol裂解细胞并提取RNA进行qRT-PCR定量检测。以6作为拷贝浓度对数的临界值,拷贝浓度对数大于6的最低稀释度作为终点稀释度,建立了qRTPCR-VNT方法的终点稀释度判断标准,并应用该方法对19份阴性血清以及4份阳性血清进行qRT-PCR-VNT检测。结果表明:该方法获得的阴性、阳性结果与传统VNT检测获得的结果完全相符。说明该方法具有快速、有效、重复性好等优点,具有代替传统VNT的潜能。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR) 病毒复制曲线 病毒中和试验 终点法
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逆转录实时荧光定量PCR检测p73 mRNA在结肠癌的表达 被引量:1
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作者 郭玮 莫惠芳 +2 位作者 周琰 赵瀛 潘柏申 《中国临床医学》 北大核心 2005年第3期520-521,共2页
目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于... 目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度、分化及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:p73的高表达可能与结肠癌的发生、发展及预后有联系。 展开更多
关键词 结肠癌 逆转录实时荧光定量PCR
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实时定量PCR分析ST13基因在肿瘤细胞株中的表达 被引量:5
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作者 陈功星 张佳炜 +2 位作者 董庆华 丁佳逸 郑树 《国外医学(临床生物化学与检验学分册)》 2004年第4期301-302,305,共3页
目的 利用实时定量PCR(real timequantitativePCR)相对定量ST1 3基因在不同肿瘤细胞株的表达情况。方法 提取肿瘤细胞株SW 6 2 0、A5 4 9、Bxpc 3、SMMC 772 1、RKO和Bcap 37细胞总RNA ,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录 ,实时定量PCR扩增 ,... 目的 利用实时定量PCR(real timequantitativePCR)相对定量ST1 3基因在不同肿瘤细胞株的表达情况。方法 提取肿瘤细胞株SW 6 2 0、A5 4 9、Bxpc 3、SMMC 772 1、RKO和Bcap 37细胞总RNA ,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录 ,实时定量PCR扩增 ,针对内参照GAPDH基因相对定量ST1 3基因的表达 ,比较ST1 3基因在不同组织癌细胞株中的表达。结果 ST1 3基因在 6种肿瘤细胞株中表达高 ,相当于GAPDH基因表达的 1 %~ 2 0 % ,细胞株之间ST1 3基因表达量分高、中、低三类 (P <0 .0 5 ) ,呈现Bcap 37、RKO >SMMC 772 1和Bxpc 3>A5 4 9、SW6 2 0。 结论 本方法简便、快速、高效地反映了ST1 3基因在细胞株中的表达情况 。 展开更多
关键词 实时定量 PCR分析 STL 3基因 肿瘤细胞株 基因表达 GAPDH 逆转录
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口蹄疫病毒链特异性荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 王洪梅 贾春涛 +4 位作者 胡桂学 夏咸柱 于力 刘文浩 何洪彬 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第11期159-163,共5页
为了定量检测口蹄疫病毒(FMDV)的正链和负链RNA,揭示FMDV复制的分子机制,试验采用链特异性荧光定量RT-PCR(ssqRT-PCR)方法提取了FMDV的RNA,在FMDV链特异性反转录引物的5'端引入非病毒基因序列标签进行反转录,再经链特异性ssqRT-PCR... 为了定量检测口蹄疫病毒(FMDV)的正链和负链RNA,揭示FMDV复制的分子机制,试验采用链特异性荧光定量RT-PCR(ssqRT-PCR)方法提取了FMDV的RNA,在FMDV链特异性反转录引物的5'端引入非病毒基因序列标签进行反转录,再经链特异性ssqRT-PCR扩增进行灵敏性、特异性、重复性检测。结果表明:FMDV基因组正链、负链RNA的链特异性ssqRT-PCR方法构建成功,该方法对FMDV正链和负链RNA检测的灵敏度达到1×101拷贝,具有较好的重复性和特异性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒(FMDV) 链特异性 非病毒基因序列标签 荧光定量RT-PCR(ssqRT-PCR) 基因组RNA 检测方法
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FQ-PCR溶解曲线技术分析白血病患者PBMC中T细胞TCRα/βCDR3谱系特征 被引量:3
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作者 孙永苹 石彬 +3 位作者 朱红倩 汤贤英 马锐 姚新生 《遵义医学院学报》 2014年第1期39-47,共9页
目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的C... 目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的CDR3区,FQ-PCR溶解曲线技术分析CDR3谱系特征,并测序分析单克隆家族CDR3区氨基酸序列的组成。结果 4例健康志愿者PBMC中α/βT细胞的CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,均表现为多峰图;而15例白血病患者PBMC中α/βT细胞CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,多数患者出现寡或偏峰型图、低或无峰型图、典型的单峰型图;不同白血病患者异常峰的频率不一致;单峰型图TRAV和TRBV PCR产物基因测序,未发现不同患者存在完全相同的CDR3区。结论FQ-PCR溶解曲线技术能很好的分析白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3谱系的单、寡、多克隆性增殖;非T细胞白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3的单峰(或寡峰)家族T细胞,可能来源于机体对肿瘤应答的T细胞,而在T细胞白血病患者,可能为肿瘤T细胞或机体抗肿瘤T细胞。本实验可为进一步研究白血病的免疫应答机制和个体化治疗提供基础。 展开更多
关键词 白血病 TCR CDR3 FQ-PCR 溶解曲线
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