CHIP调节UUO再通大鼠肾组织TGF-β1/Smads信号通路的研究

目的:利用基因芯片研究Carboxyl terminus of Hsc70-interacting protein(CHIP)对肾间质纤维化TGF-β1/Smads信号通路的抑制性调节。方法:将18只SPF级SD大鼠中6只行unilateral ureteral occlusion(UUO)模型,6只植入弹性管脂肪垫加压梗阻,7天后再通定为reverse of unilateral ureteral occlusion(RUUO)组,6只UUO在7天处死留取左肾组织,另外6只为假手术组。6只RUUO大鼠在再通7天后处死,留取左侧肾组织,运用West-ern blotting检测肾组织CHIP的表达,免疫组化检测肾组织中α-SMA、CD68的阳性表达面积,定制芯片研究TGF-β1/Smads信号通路的基因变化。结果:UUO组TGF-β1、smad2、smad3、COL1a2、JunB基因显著上调,和假手术组比较上调超过1.5倍,肾组织中的α-SMA、CD68表达面积和假手术组比较有显著统计学意义P<0.01。而RUUO组CHIP表达量较UUO组更是显著增强P<0.01,TGF-β1、smad2、smad3、COL1a2、JunB基因显著下调,和UUO组比较下调超过1.5倍,肾组织中的α-SMA、CD68表达面积减小和UUO组比较有显著统计学意义P<0.01。结论:发现CHIP的过量表达能显著降低细胞内,TGF-β1、Smad2/3、COL1a2、JunB基因水平,Western blot结果也表明CHIP蛋白表达能明显降低Smads介导的基因转录活性,进一步的基因芯片结果显示CHIP蛋白能明显下调TGF-β1所诱导的下游基因JunB的表达。结果提示CHIP蛋白能抑制性调节TGF-β1/Smads信号通路,抑制肾纤维化。

单侧输尿管梗阻再通模型的研究进展

间质纤维化是肾脏疾病进展的主要因素之一。一些动物模型可作为研究肾纤维化的对象。单侧输尿管梗阻(UUO)的出现成为一个研究肾纤维化机制的重要模型,对肾纤维化进展的分子和细胞水平机制提供有价值的观点。然而,无论是对肾脏功能的测定,还是对干细胞在肾脏的影响和药物的治疗评价均存在不足。UUO再通(RUUO)模型是建立在UUO模型的基础之上,弥补了上述的不足。

输尿管梗阻再通模型进展

梗阻性肾病是临床上常见疾病,病因主要是输尿管梗阻,肾脏终末期病理主要表现为肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)病变,其发病机制仍未完全阐明。单侧输尿管梗阻再通(reversible unilateral ureteral obstruction,RUUO)模型是研究梗阻性肾病致纤维化的常用模型,制作RUUO模型的方式各异,尚无统一标准模式。本文将对当今常用的RUUO模型造模方法和其优缺点进行综合阐述,从而能更深入地了解梗阻性肾病动物模型的研究方法,为梗阻性肾病动物模型研究提供重要的实验参考。

大鼠骨髓间充质干细胞三种移植途径在急性肾梗阻模型中的归巢研究

目的对。肾动脉、尾静脉、包膜下3种间充质干细胞（MSCs）移植方式的归巢率。方法比较通过可复性左侧输尿管梗阻的大鼠模型（R—UUO）模拟临床急性肾梗阻的病变。4周龄雌性sD大鼠，无特定病原体（SPF）级，30只，随机数字表法分为3组，每组每个时间点各5只，采用经肾动脉、尾静脉、包膜下3种方式移植荧光标记的骨髓间充质干细胞[1，1’-双十八烷基-3，3，3’，3’-四甲基羰花青碘化物（DiR）．BMSCs]，结合小动物活体成像系统（IVIS）对移植后1、48h细胞在体内的归巢进行观察及分析。结果MSCs不同移植方式在梗阻侧肾脏的早期归巢率分别为：肾动脉组为（9．59×10^5±5．26×10^5）／g，包膜下组为（17．65×10^5±4．77×10^5）／g，尾静脉组为（2．18×10^5±0．45×10^5）／g，3组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论3种移植途径的早期移植效率由高到低依次为包膜下移植、肾动脉移植、尾静脉移植。实际应用中，要根据具体情况选择合理的移植方式。

套管法在小型猪可逆性单侧输尿管部分梗阻模型中的应用

目的探讨套管法在小型猪可逆性单侧输尿管部分梗阻(RPUUO)模型中应用的效果。方法2019年6月至12月,将成年健康雄性贵州小型猪9只(贵州中医药大学动物研究所提供)切除左肾,随机抽签分为3组,分别为假手术组(S组)、持续性单侧输尿管部分梗阻组(CPUUO组)和RPUUO组,每组3只。RPUUO组和CPUUO组用套管法造成右侧输尿管部分梗阻。术后第14天,RPUUO组解除梗阻,CPUUO组不解除梗阻。术前和术后第3、7、14、28天,抽血查肌酐(SCr)和尿素氮(BUN),超声扫描观察肾脏集合系统分离程度(DRCSS)。术后第28天处死全部猪,取右肾行苏木精-伊红(HE)染色,观察肾脏病理损伤,组间比较采用单因素重复测量数据的方差分析。结果RPUUO组SCr和BUN在术后第3天较术前明显升高,第14天达最高值,在第28天恢复到接近术前水平;在术后第7、14天较S组高[SCr:(133.11±14.73)μmol/L比(114.43±4.40)μmol/L、(169.13±13.68)μmol/L比(115.53±5.90)μmol/L,t=19.374、24.267,P<0.05),BUN:(5.81±0.85)mmol/L比(5.81±0.85)mmol/L、(7.96±0.41)mmol/L比(7.96±0.41)mmol/L,t=18.083、30.760,P<0.05];在术后第28天比CPUUO组低[SCr:(111.33±12.02)μmol/L比(268.03±14.84)μmol/L,t=16.683,P<0.05),BUN(5.10±0.15)mmol/L比(15.21±0.54)mmol/L,t=22.408,P<0.05)。RPUUO组DRCSS在术后第7天增加,第14天达最大值,在第28天恢复到接近术前水平;在术后第7、14天较S组增大[(2.23±0.18)mmol/L比(0.61±0.09)mmol/L、(3.90±0.19)mmol/L比(0.60±0.08)mmol/L,t=20.308、28.675,P<0.05];在术后第28天比CPUUO组低[(0.94±0.39)mmol/L比(5.93±0.23)mmol/L,t=16.474,P<0.05]。S组肾脏组织结构未见明显病理改变。CPUUO组肾脏组织结构重度异常,肾小球数量明显减少,肾小管大面积萎缩消失,残存肾小管明显扩张,肾间质内大量成纤维细胞增生及炎性细胞浸润。RPUUO组肾小球变化不明显,肾小管轻度扩张,肾间质未见明显炎性细胞浸润。结论套管法在小型猪上建立RPUUO模型,这种动物模型安全可行。