小麦T型细胞质雄性不育恢复基因Rf6的ISSR标记分析

以小麦T型恢复系 2 114和不育系ND4 4A配制杂交组合 ,并以 14 7株个体组成的F2 分离群体作为恢复基因的标记群体。用 4 3个ISSR引物对两个亲本进行了扩增 ,发现 18个引物能在两者间产生明显的多态性 ,其中引物UBC 80 8、UBC 84 8在 2个亲本间以及可育池和不育池间都能产生一致、稳定的多态性。用这 2个引物在F2群体中进行扩增。经连锁分析 ,证明这 2个标记与小麦T型细胞质雄性不育恢复基因Rf6连锁 ,遗传距离分别为7.9cM和 4 .9cM。用 181对SSR引物对两个亲本进行扫描 ,其中有 34.3%SSR引物能在亲本间扩增出多态性 ,但没找到与Rf6连锁的SSR标记。对ISSR、SSR等方法在小麦中的多态性比例进行了比较 ,发现ISSR具有更高的多态性 ,特别是在外源基因的检测中能提供更丰富的遗传信息。

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株GF1107株ORF7基因的克隆与表达

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR2332株的核衣壳蛋白基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物。应用RT-PCR方法扩增PRRSV GF1107株(GenBank登陆号:AY684124)的ORF7片段。将扩增片段克隆入pMD18-T载体中获得含有相应片段的重组质粒pMDHB-ORF7。对质粒中的插入片段进行测序,应用DNAstar序列分析软件对所测序列与GenBank中PRRSV毒株进行同源性比较。将ORF7基因克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,在IPTG的诱导下成功获得表达,经Western blotting分析表明,表达蛋白能够与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,为PRRSV新型诊断试剂的研究奠定了基础。

玉米Rf_3近等基因系的分子标记辅助回交选育与效益分析

本研究在玉米 S组 CMS恢复基因 Rf3精细定位的基础上 ,对不同亲本来源的两个群体 HSBC1 F1 、 MYBC2 F1 及HSBC2 F1 、 MYBC3F1 代 ,利用多种分子标记开展 Rf3近等基因系的辅助选择 (MAS)研究 ,在 HSBC1 F1 群体中 ,通过一代标记辅助选择 ,可育单株遗传背景与轮回亲本最高相似程度已达到 83.9% ,并且 ,单侧连锁累赘的长度已被控制在8.9c M以内。在 MYBC3F1 群体中 ,通过一代表型选择和两代 MAS,可育单株遗传背景与轮回亲本最高相似程度已达到 98% ,单侧连锁累赘的长度已被控制在 2 .2 9c M以内。并对采用的标记数量、选择时期与代数、选择策略等方面对分子标记辅助选择的效益进行了分析。同时 。

定位于鸡选择性清扫区域的SH3RF2基因生物信息学分析

为了解鸡SH3RF2基因的结构与功能,由NCBI数据库获得鸡SH3RF2基因的mRNA和氨基酸序列数据信息,利用NCBI/Blast软件进行序列分析、同源性比对确定鸡SH3RF2基因的3'UTR区序列。在此基础上,利用公共数据库和相关软件对SH3RF2基因的CDS(coding sequence)区和其3'UTR(untranslated region)区进行了MicroRNA靶标的预测分析,进一步利用生物信息学相关数据库对其蛋白理化性质和一级结构进行分析,模拟了其二级结构和空间结构并构建了SH3RF2蛋白的系统进化树。

莫迦小麦(Triticu mmacha L.)T型恢复基因Rf3和K型不育基因rfv1的连锁关系

为进一步明确莫迦小麦(Triticum macha)T型恢复基因Rf3与K型不育基因rfv1的连锁关系,利用T型细胞质背景(T504A/Tm3314F2代和T504A//KTm3314A/90(13)21杂交分离群体)的可育株在K型细胞质下的育性测交分析,明确了来自莫迦小麦的这2个基因连锁并不紧密,交换值约为16.54%。可利用T型主效恢复基因Rf3提高含有T型主效恢复基因和K型主效不育基因的基础材料的选择效率。

SSR分子标记辅助选择棉花育性恢复基因Rf_1

【目的】借助分子手段对棉花育性恢复基因进行分子标记辅助选择。【方法】将胞质雄性不育恢复系383R与综合性状优良的早熟品系(轮回亲本)回交产生的BC3群体,利用与CMS恢复基因Rf1紧密连锁的2个EST-SSR标记进行分子检测,并展开分子标记辅助选择。【结果】Pop1BC3中,11株标记基因型为隐性纯合型(rfrf),29株标记基因型为杂合型(Rfrf),20株标记基因型为显性纯和型(RfRf);Pop2BC3中,9株标记基因型为隐性纯合型(rfrf),33株标记基因型为杂合型(Rfrf),18株标记基因型为显性纯合型(RfRf)。【结论】隐性纯合型(rfrf)植株表明这些植株中不含有恢复基因;杂合型(Rfrf)和纯合型(RfRf)植株为快速培育含有恢复基因的早熟品系提供基础。

分子标记辅助选择聚合棉花Rf1育性恢复基因和抗虫Bt基因

胞质雄性不育恢复系 0 - 6 13- 2R与转Bt基因抗虫棉R0 19(轮回亲本 )杂交、回交产生BC2 群体。利用CMS恢复基因Rf1紧密连锁的 3个SSR标记和Bt基因的PCR标记开展分子标记辅助选择培育聚合有Rf1和Bt的转基因抗虫棉恢复系。在分析的 5 9个BC2 单株中 5 5株存在恢复基因标记 ,5 4株存在Bt基因 ;综合标记分析结果 ,共获得 5 4个同时具Rf1与Bt基因的聚合单株 ;这些聚合单株自交后 ,通过标记辅助选择 ,获得 10株含Bt基因且Rf1纯合的单株。

玉米CMS-S恢复基因Rf_3近等基因系的蛋白质分析

【目的】Rf3是玉米CMS-S型不育系两个以上恢复基因中的标准基因,对其进行分子生物学研究意义很大。【方法】利用自主创建的Rf3近等基因系不育群体(Ps)和可育恢复系群体(Pf)为试材,采用改进的双向(二维)聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)技术,对苗期、成株期叶片细胞总蛋白进行分析。【结果】分离到在Pf遗传背景下分子量为25.2kD,等电点为5.0的特异蛋白质RRPⅡ,优化了2D-PAGE技术。【结论】该特异蛋白质点的出现与消失可能与玉米CMS-S的育性恢复有一定关系,对其纯化分离将为Rf3基因的克隆奠定基础和进一步了解玉米质核互作不育表达模式的分子机制。结合本研究,文章还讨论了采用2D-PAGE技术在玉米分子生物学研究中的优化以及基因组学与蛋白组学研究的衔接。

棉花育性恢复基因Rf_1和抗虫Bt基因的分子标记辅助聚合选择

将胞质雄性不育恢复系383R与转Bt基因的抗虫棉品系72-72(轮回亲本)回交产生的BC3群体,利用与CMS恢复基因Rf1紧密连锁的2个EST-SSR标记和Bt基因特异引物展开分子标记辅助选择,对棉花育性恢复基因Rf1和抗虫Bt基因进行聚合育种。结果表明,检测出15个恢复基因纯和且含有Bt基因的单株(RfRf Bt),同时检测出35株杂合态(Rfrf Bt)植株,为培育恢复基因和转Bt基因的抗虫棉恢复系提供重要的种质资源。

玉米C型胞质雄性不育恢复基因Rf5的抑制基因的发现与鉴定

利用一个含有单基因Rf5的恢复系6233与6个C型不育系杂交,发现杂交组合Cms-C77×6233表现不育,(Cms-C77×6233)×6233的育性表现1:1的分离,推测在不育系Cms-C77中存在一个显性抑制基因Rf-I,该基因只对恢复基因Rf5具有抑制作用。因此在玉米C型胞质雄性不育的三系选育过程中,为避免不育系背景中可能存在抑制基因的影响,应选择含有恢复基因Rf4的材料作为供体进行恢复系的选育工作,可以克服有些不育系的恢复系选育较难的问题。

棉花细胞质雄性不育恢复基因Rf_1候选区域SSCP标记开发与候选基因表达分析

【目的】棉花细胞质雄性不育恢复基因Rf_1的定位对于研究恢复基因的作用机制和改良恢复系具有重要意义。前期研究结果表明在恢复基因Rf_1所在Scaffold 333上的目标区间内有9个PPR(Pentatricopeptide repeat)基因成簇分布在160 kb区间内,此区间内还包括另外9个其他类型的基因。为进一步丰富恢复基因目标区域内标记数目,并了解相关基因的表达模式。【方法】利用这18个基因的序列设计出覆盖全部基因的引物共155对,通过单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)技术对可育池和不育池进行筛选,利用荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)对目标区域内的8个非PPR基因在不育系、保持系、恢复系的花蕾不同发育时期的表达模式进行了分析。【结果】共得到15对多态性引物,结合前期的3个简单重复序列标记(Simple sequence repeats,SSR)标记对F_2群体进行基因型分析,结果表明这些标记分布在4.8 cM范围内。受恢复基因或不育胞质的影响,在花蕾4个发育时期,大部分基因表达存在明显差异。【结论】本研究获得了与恢复基因紧密连锁的SSCP标记,并初步了解了目标区间内部分基因的表达模式,为进一步开展恢复基因精细定位和候选基因的筛选提供了基础。

水稻细胞质雄性不育恢复基因Rf6功能标记开发及微核心种质中Rf6基因的筛选

核恢复基因Rf6是红莲型杂交水稻特有的新恢复基因,为了寻找更多具有Rf6恢复基因的种质,以扩展红莲型杂交水稻的恢复系来源,组配更多优良杂交品系,利用Rf6及其等位基因的序列差异,开发Rf6基因的功能标记,并利用该标记对中国水稻微核心种质进行PCR扩增,筛选具有Rf6恢复基因的种质。结果表明,在324 bp插入片段(Rf6较其等位基因插入324 bp)两侧设计引物(正向引物:5'-ATGACAAGAGGACCAGCGATGCAATGG-3',反向引物:5'-ATTCTTGCAGAGATAGACCATGAGCGTG-3'),利用该引物可扩增出条带清晰且无杂带的差异片段,可用于Rf6基因的鉴定。利用该标记在197份中国水稻微核心种质中筛选出22份具有Rf6恢复基因的种质,可为拓宽红莲型杂交水稻的恢复系来源提供材料。

鸡SH3RF2插入/缺失等位基因在中国地方鸡种中频率分布研究

中国地方鸡种资源丰富,风味较优,但存在生长速度慢、饲料效率低等缺点,因此为了加速我国地方鸡种和肉鸡品种的遗传改良,分子标记技术得到了广泛应用。已知SH3RF2基因的插入/缺失突变与肉鸡生长和体重密切相关,因此本试验对分布在我国各地的15个地方鸡品种进行了SH3RF2基因的等位基因频率检测,以确定SH3RF2基因在我国地方鸡种中的等位基因分布情况,继而将SH3RF2基因用于鸡生长性状的选择的分子育种标记。研究结果发现所检测地方鸡种和肉鸡品种均是非缺失的纯合子,没有发现缺失的等位基因。要利用SH3RF2基因对中国地方鸡种进行选择,可能需要通过杂交等手段将缺失型等位基因导入我国地方鸡种的群体之中。

1例D^(VI)Ⅲ型孕妇的免疫状态和RHD基因分析

目的 追踪研究 1例弱D表型孕妇 (G4P0 )的胎母免疫状态和其RHD基因型。方法分别采用聚合酶链式反应 (PCR)技术、DNA序列分析技术和流式细胞术。结果序列特异性引物PCR(SSP PCR)检测RHD第 3～ 7、9～ 1 0外显子显示第 3～ 6外显子为阴性 ;编码区全长序列分析显示第 1～ 2 ,7～ 1 0外显子序列与正常RHD基因 致 ,其余外显子缺失 ,证实个例为部分D表型DVIⅢ型 ,其RHD基因型鉴定为CDVIe/cde。流式细胞术分析显示母亲体内存在胎儿红细胞 ,即胎母出血反应阳性 ,但血清中未发现抗 D ,胎儿出生后无新生儿溶血病 (HDN)发生。结论本例虽未发生HDN ,但在输血实践及临床抗D同种免疫的预防和监护中 。

基于水稻单片段代换系的2个恢复基因恢复力的评价(英文)

由华南农业大学选育的水稻单片段代换系S15对于野败型(WA)和矮败型(DA)细胞质雄性不育系均具有较强的恢复性。以野败型不育系博白A和矮败型不育系协青早A为母本,单片段代换系S15为父本杂交,采用分子标记辅助选择和连续回交的方法构建了2个BC3F2群体。利用与第1、第10染色体上恢复基因Rf3和Rf4两侧紧密连锁的SSR标记,从这2个BC3F2群体中筛选携带基因型Rf3Rf3/rf4rf4和rf3rf3/Rf4Rf4的单株,观察这些单株花粉和小穗育性,并利用202个多态性SSR标记分析这些单株的遗传背景,结果表明:(1)在同一细胞核背景下(S15),DA型细胞质的可恢复性好于WA型细胞质,单片段代换系S15中的恢复基因Rf4的恢复力大于恢复基因Rf3的恢复力。(2)单片段代换系S15中的恢复基因对于WA型不育系博白A和DA型不育系协青早A表现出质量-数量性状的遗传。在单片段代换系S15中,除了主效恢复基因Rf3和Rf4外,微效基因或者修饰基因也表现出对于博白A和协青早A的恢复性作用,而且效应较大。(3)在构建的2个BC3F2群体中,携带基因型Rf3Rf3/rf4rf4和rf3rf3/Rf4Rf4单株的遗传背景片段数平均为1.0,对应于恢复基因Rf3和Rf4座位的代换片段平均长度分别为12.9cM和18.4cM。

一个玉米CMS-C恢复基因的精细定位

为挖掘玉米C型细胞质雄性不育(CMS-C,C-type cytoplasmic male sterility)的育性恢复基因并解析基因功能,用恢复系K932R与2个CMS-C同质异核不育系K169S和K932S分别构建2个F2定位群体,结合SSR分子标记和分离群体分析法全基因组重测序(BSA-reseq)技术定位育性恢复基因,通过PCR技术克隆目的基因并进行基因表达分析。结果表明,用BSA-SSR分子标记法将育性恢复基因Rf 932定位于8号染色体短臂,位于SSR标记8-21与8-30之间,遗传距离分别为2.3 cM和7.7 cM;通过BSA-reseq技术,将Rf 932定位于8号染色体0.38Mb的区域,包含7个候选基因;对候选基因分段克隆和测序比对,获得Rf 932序列全长2549 bp,由4个外显子和3个内含子组成,编码385个氨基酸;其中控制育性恢复的关键位点发生了与Rf4相同的氨基酸变异F187Y,是1个新的Rf4等位基因;该基因编码bHLH转录因子,调控绒毡层发育;据qRT-PCR分析,Rf 932在不育系与恢复系花药中3个发育时期的表达量均无显著差异。研究结果丰富了玉米CMS-C恢复基因库,并为进一步解析育性恢复机理奠定了基础。

猪流行性腹泻病毒ORF3编码离子通道蛋白和调节病毒的产生

研究结果表明,猪流行性腹泻病毒(PEDV)的开放阅读框3(ORF3)基因与病毒的传染性和致病性相关,但其功能尚不清楚。本研究假设ORF3结构模型是由4个TM结构域形成的四聚体。在PEDV感染的细胞中能检测到ORF3蛋白,在爪蟾卵母细胞和酵母中ORF3都是作为离子通道。突变分析结果表明,TM4Tyr170在钾离子通道活性中起重要作用。此外,当siRNA沉默了ORF3基因时,感染的Vero细胞中病毒产生减少。猪流行性腹泻病毒减毒株缺失49个核苷酸的ORF3基因编码的截断蛋白缺乏离子通道活性。

Molecular Properties of the Epstein-Barr virus BFRF3 Gene

We report the results of cloning,expression,subcellular localization analysis,and molecular properties of the Epstein-Barr virus （EBV） BFRF3 gene,using several bioinformatics tools.Bioinformatics analysis indicated that the encoding protein of EBV BFRF3 gene （designated BFRF3） has a conserved Herpes_capsid domain,which was found to be closely related to the gammaherpesvirus capsid protein family,and is highly conserved among its counterparts.

斯卑尔脱小麦1B染色体的显微分离及其DNA的PCR扩增

以斯卑尔脱小麦的一个变种及其近等基因系为材料 ,玻璃针法进行显微操作在减数分裂中期I分裂相中获得G型细胞质雄性不育的育性恢复基因Rf3所在的 1B染色体DNA。LA -PCR方法扩增DNA ,斑点杂交的方法检测证明扩增产物来源于斯卑尔脱小麦基因组的

优化玉米CMS-S双向电泳体系与差异蛋白比较

利用自主创建的Rf3近等基因系不育群体(P)s和可育恢复系群体(Pf)为试材,采用改进的双向(二维)聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)技术,对苗期、成株期叶片细胞总蛋白进行分析,分离到在Pf遗传背景下一特异蛋白质RRPⅥ,分子量为30.8kD,等电点为5.0,该特异蛋白质点的出现与消失可能与玉米CMS-S的育性恢复有一定关系,对其纯化分离将为Rf3基因的克隆奠定基础和进一步了解玉米质核互作不育表达模式的分子机制。讨论了采用2D-PAGE技术在玉米分子生物学研究中的优化以及基因组学与蛋白组学研究的衔接。