人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

人参皂苷Rg3对骨质疏松大鼠骨代谢及肠钙吸收功能的影响

目的:探究人参皂苷Rg3对骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠骨代谢及肠钙吸收功能的影响。方法:60只SPF级雌性Wistar大鼠,按照随机数字法分为空白组、模型组、阳性组、实验组,每组大鼠各15只。除空白组外,其他大鼠均采用去势(OVX法)法制备OP大鼠模型。造模成功后,空白组及模型组生理盐水灌胃[10 mL/(kg·d)],阳性组给予阿仑膦酸钠维D3灌服(每周6.25 mg/kg),实验组给予人参皂苷Rg3[80 mg/(kg·d)]灌胃治疗,连续干预治疗12周。检测各组股骨、胫骨骨密度变化,酶联免疫法检测大鼠血清中骨保护素(osteoclastogenesis inhibitory factor,OPG)、Ⅰ型前胶原氨基末端肽(procollagen typeⅠNterminal propeptide,PINP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRACP)、I型胶原交联C-末端肽(TypeⅠcollagen carboxy-terminal peptide,CTX-I)含量变化;原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法分析各组肠黏膜组织细胞凋亡情况;Masson法分析各组肠黏膜组织纤维病理改变;免疫组化法检测各组肠黏膜组织中维生素D膜相关快速反应结合蛋白(membrane-associated rapid response steroid-binding,1,25-D3-MARRS)蛋白表达;蛋白免疫印迹法及RT-PCR法检测各组Jagged1、Notch1、Hes1蛋白及mRNA表达水平。结果:大鼠造模后股骨、胫骨骨密度明显下降,血清中OPG、PINP、TRACP及CTX-I含量明显变化(P<0.05);肠黏膜组织病理发生明显改变,组织纤维化增强,细胞凋亡程度增加;肠黏膜组织1,25-D3-MARRS蛋白表达降低(P<0.05)。治疗后与模型组对比,阳性组及实验组大鼠股骨、胫骨骨密度明显升高,血清中OPG、PINP、TRACP及CTX-I含量明显改善(P<0.05);肠黏膜组织病理发生明显改善,纤维化降低,细胞凋亡程度降低;肠黏膜组织中Jagged1、Notch1、Hes1蛋白及mRNA表达明显改善(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3能够提高OP大鼠骨密度,减轻肠黏膜组织细胞凋亡及组织纤维化,增加肠黏膜1,25D3-MARRS蛋白表达,改善肠道钙吸收。

人参皂苷 Rg3对人乳腺癌细胞紫杉醇化疗耐药的影响

目的:分析人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞紫杉醇化疗耐药的影响。方法:选择2021年1月至2022年12月为4研究时间段,经低浓度持续递增法建立乳腺癌紫杉醇(PTX)耐药细胞,稀释细胞浓度1×10^(4)个/mL,在96孔板中接种,在明确贴壁后,加入紫杉醇(150µM),分为5组,分别为空白对照组、PTX组、3组G-Rg3+PTX组,每组设3个平行样本。其中,3组G-Rg3+PTX组分别加入G-Rg3药物60µM、80µM、100µM,PTX组及G-Rg3+PTX组均加入PTX 150µM。待PTX组、加入不同浓度(60µM、80µM、100µM)的G-Rg3+PTX组,共4组人乳腺癌MCF-7细胞处理24 h后,检测4组吸光值(OD值),经Annexin-V/FITC和PI双染,流式细胞仪检测,利用GraphPad Prism 7.04计算半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI);其中,RI计算公式为RI=空白对照组耐药细胞IC50/亲本MCF-7细胞IC500。结果:经24 h处理后,空白对照组OD值(0.90±0.04),无IC50值、RI值;PTX组的OD值(0.40±0.06)、IC50值(725.60±5.85)µmol/L、RI值3.2;G-Rg3+PTX组60µM的OD值(0.21±0.06)、IC50值(686.68±5.36)µmol/L、RI值4.9;80µM的OD值(0.17±0.05)、IC50值(412.46±723)µmol/L、RI值6.7;100µM的OD值(0.14±0.04)、IC50值(235.87±5.93)µmol/L、RI值9.1。结论:人参皂苷Rg3能够影响人乳腺癌细胞紫杉醇的化疗耐药性,提升对癌症的抑制作用。

人参皂苷Rg3对乳腺癌骨转移大鼠疼痛的缓解作用及机制研究

目的:研究人参皂苷Rg3缓解乳腺癌骨转移大鼠痛觉行为的作用及机制。方法:采用大鼠乳腺癌细胞注入胫骨骨髓腔内构建乳腺癌骨转移疼痛模型;随机分成假性手术组、模型组以及人参皂苷Rg3给药组;连续3天静脉注射人参皂苷Rg3;记录大鼠痛觉行为学变化;分子对接分析人参皂苷Rg3与蛋白质的结合;免疫荧光和免疫印迹法检测各组动物脊髓组织炎症相关蛋白表达变化。结果:乳腺癌骨转移可导致骨组织损伤,诱发大鼠机械痛敏、热痛敏及自发痛。同时脊髓胶质细胞和NLRP3炎症小体激活,促炎因子IL-1β表达上调,抗氧化因子Nrf2和GPX4表达下降,线粒体氧化损伤相关蛋白DHODH和细胞色素C表达增加。人参皂苷Rg3给药后,大鼠机械痛、热痛和自发痛缓解,脊髓炎症信号下降,抗氧化Nrf2/GPX4信号增加,线粒体过氧化物信号下降。分子对接显示人参皂苷Rg3可结合Nrf2。结论:人参皂苷Rg3激活Nrf2介导的抗氧化反应,降低脊髓炎症,从而缓解癌痛。

人参皂苷Rg3治疗放射性直肠炎大鼠的作用机制研究

目的基于TNF-α/NF-κB及Caspase-8信号通路,研究人参皂苷Rg3(GRg3)治疗放射性直肠炎大鼠的机制。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量GRg3治疗组、中剂量GRg3治疗组、高剂量GRg3治疗组,每组8只。6MV X射线单次21.5 Gy腹部照射进行模型复制,照射后第8天开始给药,观察大鼠情况并称重,2周后腹主动脉取血并处死解剖。HE染色观察直肠组织病理学变化,酶联免疫吸附试验检测血清TNF-α、IL-4、IL-10水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测直肠组织IKK-β、IκB-α、Caspase-8基因表达,Western blotting检测IKK-β、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB p50、Caspase-8蛋白表达。结果照射后第6天,与对照组比较,其他各组大鼠体重明显降低(P<0.05),且除对照组外的其他组大鼠体重比较,差异无统计学意义(P>0.05);开始灌胃后,对照组大鼠体重逐步上升,模型组大鼠体重不断下降,地塞米松组和GRg3治疗组大鼠在治疗前3天体重较治疗前无明显变化,从第4天开始逐渐增长;与模型组相比,灌胃第8、14天,地塞米松组和高剂量GRg3治疗组大鼠体重明显升高(P<0.05)。治疗2周后,地塞米松组直肠组织结构完整,黏膜层见少量的炎症细胞浸润;低剂量GRg3治疗组直肠组织大范围溃疡,肠腺形状、大小不一,数量减少,并伴大量炎症细胞浸润,少量肠腺扩张,腺腔内可见坏死细胞碎片,损伤侵及黏膜下层,黏膜肌层及黏膜下层亦可见炎症细胞浸润;中剂量GRg3治疗组见少量黏膜上皮细胞坏死脱落,肠腺形状、大小不一,伴中等量炎症细胞浸润,少量肠腺扩张,腺腔内可见坏死细胞碎片;高剂量GRg3治疗组直肠组织结构完整,见黏膜层水肿,肠腺排列疏松,伴炎症细胞浸润。与对照组比较,模型组大鼠血清TNF-α水平升高(P<0.05),IL-4、IL-10水平降低(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组及高剂量GRg3治疗组血清TNF-α水平降低(P<0.05),IL-4、IL-10水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠直肠组织IKK-β、IκB-α及Caspase-8基因表达升高(P<0.05);经过不同的干预治疗后,与模型组比较,各治疗组IKK-β、IκB-α及Caspase-8基因表达均降低(P<0.05),且随着GRg3治疗剂量的升高各因子表达呈下降趋势;地塞米松组与高剂量GRg3治疗组IKK-β、IκB-α及Caspase-8 mRNA的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组大鼠直肠组织IKK-β、p-IκB-α、胞核NF-κB p50及Caspase-8蛋白表达升高(P<0.05),IκB-α、胞浆NF-κB p50蛋白表达降低(P<0.05);经过不同治疗后,与模型组相比,地塞米松及中、高剂量GRg3治疗组IKK-β、p-IκB-α、胞核NF-κB p50及Caspase-8蛋白表达均降低(P<0.05),IκB-α及胞浆NF-κB p50蛋白表达均升高(P<0.05)。中、高剂量GRg3治疗组与地塞米松组各因子蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论GRg3通过抑制IKK-β的表达,减少IκB-α的磷酸化,增加胞浆中NF-κB p50的滞留,减轻放射性直肠炎,促进肠道组织损伤修复;GRg3能抑制电离辐射引起的肠道细胞凋亡减轻炎症反应。

人参皂甙Rg3抑制卵巢癌SKOV3细胞生长的机制研究

目的探讨人参皂甙Rg3抑制卵巢癌细胞生长可能存在的分子机制。方法采用细胞克隆实验检测人参皂甙Rg3对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制效果;四氮唑蓝(MTT)比色法、流式凋亡、划痕实验、Transwell实验分别检测人参皂甙Rg3对SKOV3细胞凋亡、侵袭、迁移的影响;qRT-PCR法和Western blot法分别检测Rg3不同浓度作用下卵巢癌细胞中Zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因和蛋白的表达。结果人参皂甙Rg3对SKOV3细胞增殖抑制率升高(P<0.05),凋亡率显著上升(P<0.01),侵袭、迁移能力均显著下降(P<0.01),SKOV3细胞中EZH2的基因和蛋白随着Rg3浓度的增加表达量呈现明显的下降(P<0.01)。结论人参皂甙Rg3可能通过抑制EZH2的表达,促进卵巢癌细胞的凋亡,抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭以及迁移的能力,为卵巢癌的临床治疗提供新思路。

黑参中人参皂苷Rg3的含量检测

目的建立HPLC法测定黑参中人参皂苷Rg3的含量,有效控制其内在质量。方法采用HPLC法对黑参中人参皂苷Rg3进行含量测定,色谱柱为Ultimate Polar RP(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)——0.01%磷酸水(B),梯度洗脱:0~5min(81%B);5~10min(76%B);10~30min(60%B);30~40min(50%B);40~60min(40%B),柱温:30℃,检测波长:203nm,流速:0.8 mL/min。结果人参皂苷Rg3含量在0.2~2μg时线性关系良好,回归方程为Y=59.819X-0.3441,R^(2)=0.9997(n=5),经测定黑参中人参皂苷Rg3的含量为0.201%。结论HPLC法测定黑神中人参皂苷Rg3的方法,可靠,稳定,简单,易行。建立了稳定的黑参中人参皂苷Rg3含量的测定方法,为黑参的质量控制和开发利用提供参考。

人参皂苷Rg3脂质体制备工艺优化

目的人参皂苷Rg3脂质体工艺优化研究。方法采用薄膜分散-超声法制备人参皂苷Rg3脂质体,通过正交试验,以包封率为评价指标,考察药物与大豆卵磷脂与胆固醇的质量比、水化体积、水化温度对人参皂苷Rg3脂质体的影响。结果人参皂苷Rg3脂质体的最佳制备工艺为药物与大豆卵磷脂与胆固醇用量比为1∶1∶6,水化体积为3 mL,水化温度40℃,此时包封率为85.05%。

人参皂苷Rg3复合水凝胶的制备及抗菌性能研究

目的选用人参皂苷Rg3为主要成分与透明质酸(Gel)水凝胶相结合,开发一种可以用于促进伤口愈合的伤口敷料。方法(1)制备负载Rg3的复合水凝胶,在乙酸溶液(0.5%w/v)中加入Cs并持续搅拌直至完全溶解,通过低温冻融的方法用P407包封Cs溶液。将HA添加到蒸馏水中,使用冷搅拌法包封P407和Cs,然后除去这些聚合物中的沉淀物,获得原位形成的水凝胶。(2)用扫描电子显微镜(SEM)检测,观察负载Rg3的Rg3-Gel的结构表征和性能表征。(3)进行复合水凝胶的体外抗菌实验,将实验组分为Blank、Blank+40℃、Gel、Rg3和Rg3-Gel组,分别进行体外抗菌实验。(4)负载Rg3的Rg3-Gel的抗菌性能体外研究—动物建模实验。本研究使用了30只健康雄性SD小鼠,无菌条件下,在每只小鼠的背部制造直径10mm的圆形全层创面。将这些小鼠随机分布在3组(n=10)中,I组未接受任何治疗(裸伤)的小鼠作为对照,II组用Blank-Gel治疗,Ⅲ组的小鼠伤口每天用Rg3-Gel治疗。结果在治疗后第4天,观察到所有动物的伤口大小都有一定程度的缩小,而Rg3-Gel组小鼠在第8、12和16天表现出最小的伤口面积。与空白凝胶组相比,Rg3-Gel组在整个愈合过程中的愈合率比其他组更快,第16天闭合率为90.68±1.3%,而原位水凝胶和对照组的伤口愈合率分别为87.63%和83.67%。结论Rg3-Gel可加速伤口愈合,将人参皂苷Rg3和透明质酸(Gel)水凝胶相结合,既可以利用微环境加速伤口愈合,又可以动态调节和响应伤口微环境的自适应性。

高效液相色谱法同时测定人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg3的含量

目的建立反相高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)含量的分析方法。方法样品经高温高压蒸汽灭菌处理后,以0.4%磷酸水溶液:乙腈(90:10,V:V)为流动相,梯度洗脱,样品经C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,并于203 nm波长检测。结果人参皂苷F2在质量浓度8.46~84.56μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=1.0000,加标回收率为97.54%~104.28%,相对标准偏差为2.4%;人参皂苷Rg_(3)在质量浓度18.61~139.60μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=0.9999,加标回收率在96.42%~102.25%之间,相对标准偏差为2.0%。结论该方法前处理简捷、快速,色谱分析又能同时测定人参(药材)中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)含量,提高检测效率,可用于实验室对人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)的批量检测。

人参皂苷Rg3减轻帕金森病小鼠神经系统氧化应激损伤的作用机制

目的:探究人参皂苷Rg3减轻帕金森病(Parkinson′s disease,PD)小鼠神经系统氧化应激损伤的作用机制。方法:将60只C57BL/6小鼠分为对照组、PD组、低剂量干预组和高剂量干预组,每组15只。通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy1-4-phenvl-1,2,3,6-tetrahvdropvridine,MPTP)构建PD小鼠模型,建模前3天,低、高剂量干预组小鼠分别腹腔注射3、12 mg/kg人参皂苷Rg3,造模后继续干预28天,对照组和PD组腹腔注射等量生理盐水。各组小鼠腹腔注射第4、8、12天时进行爬杆实验和旋转实验评估运动能力;末次腹腔注射完成后,断颈处死小鼠取脑组织制成冰冻切片,免疫组化分析黑质纹状体中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达水平;酶联免疫吸附法测定黑质纹状体中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)水平;Western blot方法检测黑质纹状体中TH、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinoneoxidoreductase 1,NQO1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PD组小鼠爬杆时间延长、旋转停留时间缩短、MDA水平升高,TH阳性率、SOD、GSH-PX活性、TH、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与PD组比较,低、高剂量干预组小鼠爬杆时间缩短,旋转停留时间延长,MDA水平降低,TH阳性率、SOD、GSH-PX活性、TH、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3可能通过激活黑质纹状体中Nrf2/HO-1/NQO1通路,减轻PD小鼠神经系统氧化应激损伤,而改善其病理状态。

人参皂苷Rg3抑制非小细胞肺癌细胞重编程的机制研究

非小细胞肺癌(NSCLC)作为一种常见的肺部恶性肿瘤,其全球发病率和死亡率仍处于较高水平。尽管传统疗法在局部晚期和转移性NSCLC的治疗方面取得了一定进展,但鉴于肿瘤细胞具有免疫逃逸特性,治疗效果尚不理想。研究发现肿瘤细胞重编程是导致免疫逃逸的重要因素。人参皂苷Rg3作为人参的有效活性成分,是一种具有不同结构的天然小分子化合物,其主要作用为辅助抗肿瘤。通过抑制NSCLC细胞的重编程,人参皂苷Rg3的主要抗肿瘤免疫逃逸机制包括降低肿瘤细胞免疫检查点PD-L1的表达、抑制上皮间质转化(EMT)以及肿瘤细胞干性。本文将从上述三个方面对人参皂苷Rg3抑制非小细胞肺癌细胞重编程的机制展开论述。

人参皂苷Rg3通过抑制mTOR通路介导的磷酸戊糖途径对肺癌细胞的放射增敏作用

目的探讨人参皂苷Rg3通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路介导的磷酸戊糖途径(PPP),对肺癌细胞放射敏感性的影响。方法以0、10、20、40、60、80 mg/L的人参皂苷Rg3处理肺癌细胞A549;MTT法检测细胞增殖情况;将细胞分为对照组(正常培养,不照射)、放射组(X射线照射处理)、人参皂苷Rg3组(60 mg/L人参皂苷Rg3,不照射)、联合组(X射线照射+60 mg/L人参皂苷Rg3)、激活剂组(X射线照射+60 mg/L人参皂苷Rg3+100 nmol/L mTOR通路激活剂MHY1485);均为加入相对应药物培养48 h后放射组、联合组和激活剂组采用8 Gy X射线照射。平板克隆实验检测各组细胞克隆形成率;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;γ-H2AX免疫荧光染色分析DNA损伤修复情况;Western blot检测细胞中mTOR、p-mTOR、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、γ-H2AX蛋白的表达。结果人参皂苷Rg3以剂量依赖性的方式抑制A549细胞的增殖(P<0.05);与对照组比较,放射组、人参皂苷Rg3组细胞克隆形成率、G6PD、ROS、NADPH水平下降,p-mTOR/mTOR、PCNA蛋白表达水平降低,细胞凋亡率、γ-H2AX焦点数、Bax、caspase-3、γ-H2AX蛋白表达水平升高(P<0.05);与放射组、人参皂苷Rg3组比较,联合组细胞克隆形成率、G6PD、ROS、NADPH水平下降,p-mTOR/mTOR、PCNA蛋白表达水平降低,细胞凋亡率、γ-H2AX焦点数、Bax、caspase-3、γ-H2AX蛋白表达升高(P<0.05);与联合组比较,激活剂组细胞克隆形成率、G6PD、ROS、NADPH水平升高,p-mTOR/mTOR、PCNA蛋白表达水平升高,细胞凋亡率、γ-H2AX焦点数、Bax、caspase-3、γ-H2AX蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3发挥抑制肺癌作用可能是通过抑制mTOR介导的PPP实现的。

人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白诱导的肾小球系膜细胞TGF-β/Smad/NF-κB通路及细胞凋亡的影响

目的人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白(LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子(TGF)-β/Smad/核因子(NF)-κB通路及细胞凋亡的影响。方法将培养的HMC,分别为对照组(不做任何处理)、LDL组(40μg/ml的LDL处理)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg315μmol/L组(低浓度组)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg330μmol/L组(中浓度组)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg360μmol/L组(高浓度组)。用噻唑蓝(MTT)法检测HMC增殖活性;Western印迹检测通路相关蛋白TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB及细胞凋亡相关蛋白、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶酶(caspase)-3蛋白的表达水平。结果与对照组相比,LDL组HMC增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与LDL组相比,低、中、高浓度组HMC增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,HMC凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白水平明显升高,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制LDL诱导的HMC增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad/NF-κB信号通路密切相关。

人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白诱导的肾小球系膜细胞TGF-β/Smad/NF-κB通路及细胞凋亡的影响

目的:分析人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白(LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子-β/Smad/核因子kappa B(TGF-β/Smad/NF-κB)通路及细胞凋亡的影响。方法:将HMC细胞分为对照组(不做任何处理)、LDL组(40μg/ml的LDL处理)、人参皂苷Rg3低浓度组(LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg315μmol/L)、人参皂苷Rg3中浓度组(LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg330μmol/L)、人参皂苷Rg3高浓度组(LDL 40μg/mL+人参皂苷Rg360μmol/L)。采用MTT法检测HMC细胞增殖活性;Western Blotting法检测通路相关蛋白TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB以及B淋巴细胞瘤基因相关x蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,LDL组HMC细胞增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与LDL组相比,人参皂苷Rg3低、中、高浓度组HMC细胞增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,HMC细胞凋亡率、Bax和Caspase-3的蛋白水平明显升高,并呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3可抑制LDL诱导的HMC细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad/NF-κB信号通路密切相关。

人参皂苷Rg3激活MAPK/ERK信号通路促进T细胞功能的抗肿瘤机制

目的探讨人参皂苷Rg3调节CD8^(+)T细胞功能从而增加抗肿瘤的作用,并阐明其作用机制。方法MTT法检测Rg3对CD8^(+)T细胞的影响以及对Rg3作用后的CD8^(+)T细胞对黑色素瘤B16F10的杀伤能力,并通过显微镜进行细胞形态学观察;EDU检测B16F10细胞增殖情况;流式细胞术分析对CD8^(+)T细胞功能作用;Western blot检测相关蛋白表达;实时定量PCR检测mRNA变化。结果Rg3可显著增加CD8^(+)T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,并促进功能性记忆T细胞的转化。Rg3增加T细胞释放杀伤因子IL-2及IFN-γ及其mRNA的表达,增加功能性T细胞(central memory T cell,TCM)的比例。进一步数据显示,Rg3促进功能性T细胞分化进而促进T细胞杀伤活性抗肿瘤与激活MAPK/ERK通路正相关。结论人参皂苷Rg3通过激活MAPK/ERK通路促进CD8^(+)T淋巴细胞的杀伤性作用而增加抗肿瘤作用。

原人参二醇组皂苷选择性制备人参皂苷20(S)-Rg3和Rg5及其生成机理研究

该文以原人参二醇(protopanaxadiol,PD)型皂苷为原料,盐酸为催化剂,选择性制备稀有人参皂苷Rg5和20(S)-Rg3。主要探索了酸浓度、乙醇浓度、反应温度以及反应时间对制备人参皂苷20(S)-Rg3和Rg5的影响,并通过同位素标记法研究了人参皂苷Rg3的生成机理。结果表明,当PD型皂苷质量浓度为15 mg/mL,HCl浓度为0.02 mol/L,乙醇体积分数为99%,反应温度为60℃,反应时间为3.5 h时,20(S)-Rg3和Rg5收率分别为15.32%和50.12%,20(S)-Rg3的de值为98.28%。同位素标记法研究反应机理表明,PD皂苷在盐酸催化下高立体选择性地生成Rg3是S_(N)2机理。该方法催化剂价廉易得,操作简单,在生成Rg5的同时又能高立体选择性生成20(S)-Rg3,为一步合成多种高活性稀有人参皂苷提供新的思路。

人参皂苷Rg3对氧糖剥夺/复糖复氧损伤PC12细胞保护作用的机制

背景:人参皂苷Rg3在脑缺血疾病中具有一定的神经保护作用,但其对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的PC12细胞是否也有保护作用,目前尚不明确。目的:研究人参皂苷Rg3对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的PC12细胞是否有保护作用以及相关机制。方法:构建高分化PC12细胞的氧糖剥夺/复糖复氧损伤模型,采用MTT、乳酸脱氢酶、Calcein-AM/PI染色、Western blot、流式检测氧糖剥夺/复糖复氧损伤后对PC12细胞的影响,以及不同浓度人参皂苷Rg3处理PC12细胞后的保护作用,并且使用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002和AKT激活剂SC79从PI3K/AKT信号通路研究其作用机制。结果与结论:①氧糖剥夺/复糖复氧损伤模型能随着缺糖缺氧时间的延长从而降低PC12细胞的存活率,促进细胞凋亡,上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白比值,促进NLRP3炎性小体、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、BAX蛋白的表达,促进乳酸脱氢酶的释放;②人参皂苷Rg3在一定浓度范围内能提高氧糖剥夺/复糖复氧损伤的PC12细胞存活率、减少乳酸脱氢酶的释放,抑制细胞凋亡,降低p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白比值,下调NLRP3炎性小体、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、BAX蛋白的表达,还会降低活化的caspase-9蛋白表达,促进活化的caspase-3蛋白表达;③LY294002对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的PC12细胞的保护作用与人参皂苷Rg3相当,而SC79可以减轻人参皂苷Rg3对PC12细胞的保护效果。因此,人参皂苷Rg3可以通过抑制PI3K/AKT信号通路,抑制PI3K和AKT的磷酸化,发挥抗炎、抗凋亡的作用,减轻氧糖剥夺/复糖复氧对PC12细胞造成的损伤。

人参皂苷20(S)-Rg3通过调控KRT18P55抑制卵巢癌细胞增殖和迁移

目的探讨人参皂苷20(S)-Rg3抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的机制。方法在西安交通大学第一附属医院收集卵巢癌组织19例,正常卵巢组织18例,采用real-time PCR检测lncRNA KRT18P55的表达。将卵巢癌细胞SKOV3和3AO分别分为2组:阴性对照组和20(S)-Rg3组,通过real-time PCR检测KRT18P55的表达水平,CCK-8和平板克隆实验检测SKOV3和3AO细胞增殖能力,Transwell小室法检测SKOV3和3AO细胞迁移能力。将KRT18P55 siRNA分别转染SKOV3和3AO细胞,通过real-time PCR检测KRT18P55的表达水平,CCK-8和平板克隆实验检测SKOV3和3AO细胞增殖能力,Transwell小室法检测SKOV3和3AO细胞迁移能力。癌症基因组学门户网站(cBioPortal for Cancer Genomics,cBioPortal)提取KRT18P55共表达基因数据;基因功能分析数据库(Gene Annotation and Analysis Resource,Metascape)对KRT18P55及其显著相关基因进行功能富集分析;基因表达谱交互式分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)、阿拉巴马大学癌症数据分析门户(University of Alabama at Birmingham Cancer Data Analysis Portal,UALCAN)在线数据库对筛选的KRT18P55显著相关基因进行表达分析。结果人卵巢癌组织中的KRT18P55表达水平显著高于正常卵巢组织,经20(S)-Rg3处理的卵巢癌细胞SKOV3和3AO的增殖和迁移能力均下降,KRT18P55的表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。敲低KRT18P55后,卵巢癌细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05)。基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析显示,KRT18P55可能参与中间丝细胞骨架组成、外源性凋亡信号通路等。GEPIA及UALCAN数据库的表达分析显示,KRT18P55相关性最强的两个基因KRT18、KRT8的mRNA及蛋白水平在卵巢癌中均较正常对照显著增高(P<0.05)。结论人参皂苷20(S)-Rg3可能通过降低KRT18P55的表达水平抑制卵巢癌细胞的增殖与迁移,进而抑制卵巢癌的进展。

人参皂苷Rg3对大鼠实验性脉络膜新生血管的影响及作用机制研究

目的观察人参皂苷Rg3对大鼠实验性脉络膜新生血管(CNV)形成的干预作用,以及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法30只大鼠经532 nm激光光凝建立CNV模型,被随机分为模型组(MG)、人参皂苷Rg3低剂量组(L-Rg3)、人参皂苷Rg3中剂量组(M-Rg3)、人参皂苷Rg3高剂量组(H-Rg3)、阳性对照药康柏西普组(CB),另设对照组(CG),每组6只。L-Rg3、M-Rg3、H-Rg3组分别予3.65、7.20、14.40 mg/kg的人参皂苷Rg3药液灌胃,而CG、MG组大鼠灌胃2 mL蒸馏水,每日1次,连续干预7 d;CB组于造模后一次性玻璃体腔注射康柏西普注射液5μL。给药完成后荧光素眼底血管造影(FFA)观察大鼠眼底情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脉络膜HIF-1α、VEGF mRNA表达,Western Blot法检测脉络膜HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果(1)FFA:与CG组比较,MG组荧光素渗漏平均光密度(MD)值升高(t=17.846,P=0.000);与MG组比较,M-Rg3、H-Rg3、CB组MD值降低(t_(M-Rg3)=5.032,t_(H-Rg3)=6.593,t_(CB)=9.618,均P=0.000);与H-Rg3组比较,CB组MD值升高(t=3.025,P=0.011),差异均有统计学意义。(2)脉络膜HIF-1α表达:与CG组比较,MG组HIF-1αmRNA(t=16.280,P=0.000)和蛋白(t=14.406,P=0.000)表达升高;与MG组比较,M-Rg3、H-Rg3、CB组HIF-1αmRNA(t_(M-Rg3)=8.692,t_(H-Rg3)=12.070,t_(CB)=14.510,均P=0.000)和蛋白(t_(M-Rg3)=5.488,t_(H-Rg3)=8.918,t_(CB)=8.918,均P=0.000)表达降低;与CB组比较,H-Rg3组HIF-1αmRNA表达升高(t=2.431,P=0.031),差异均有统计学意义。(3)脉络膜VEGF表达:与CG组比较,MG组VEGF mRNA(t=14.500,P=0.000)和蛋白(t=17.938,P=0.000)表达升高;与MG组比较,M-Rg3、H-Rg3、CB组VEGF mRNA(t_(M-Rg3)=6.730,t_(H-Rg3)=10.068,t_(CB)=13.351,均P=0.000)和蛋白(t_(M-Rg3)=5.382,t_(H-Rg3)=8.969,t_(CB)=12.557,均P=0.000)表达降低;与CB组比较,H-Rg3组VEGF mRNA(t=3.283,P=0.007)和蛋白(t=3.588,P=0.004)表达升高,差异均有统计学意义。结论人参皂苷Rg3对大鼠实验性CNV具有抑制作用,其作用机制可能与抑制HIF-1α/VEGF信号通路的激活有关。