地黄RgDXR基因的克隆及表达分析

本研究采用RT-PCR法对地黄DXR基因进行克隆,并用生物信息学方法分析其功能结构域、系统进化等;将地黄DXR基因克隆到原核表达载体p ET-32a上,使用大肠杆菌BL21菌株进行Rg DXR蛋白的原核表达及纯化,实时荧光定量PCR方法分析Rg DXR在不同组织、不同内生菌诱导下的表达特性。获得的Rg DXR基因c DNA全长为1 425 bp,编码474个氨基酸。生物信息学分析发现Rg DXR基因编码的蛋白质具有典型的DXR功能结构域,属于植物DXR基因家族。系统进化树分析表明,地黄Rg DXR与芝麻亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,栽培品种‘北京3号’根中Rg DXR表达量最高。内生真菌诱导实验表明,Rg DXR基因的转录水平与梓醇等环烯醚萜类物质的含量成正相关。本研究克隆所得的地黄Rg DXR基因属于DXR基因家族,推测其可能与地黄中环烯醚萜类物质的生物合成有关。