人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)体外消化产物的UHPLC-TSQ MS分析

本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(ultra-high-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry,UHPLC-TSQ MS)法分析人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)在模拟唾液、胃液和肠液中的降解产物。在人参皂苷Rb_(1)的消化产物中发现了Rd、Rg_(3)、Rg_(5)、Rk_(1),其中在肠液中还发现了F_(2),表明F_(2)是肠液中特有的降解产物,降解途径为Rb_(1)→Rd→Rg_(3)→Rg_(5)/Rk_(1),Rb_(1)→Rd→F_(2)。在人参皂苷Rg_(1)的消化产物中发现了F_(1)和Rh_(1),降解途径为Rg_(1)→F_(1)和Rg_(1)→Rh_(1)。定量结果表明:降解产物含量在消化液中随时间而变化;在胃液中,Rg_(3)、Rd、Rg_(5)、F_(1)、Rh_(1)和Rk_(1)的达峰时间分别为1、2、4、2、2、4 h;在肠液中,7种降解产物的达峰时间均为4~6 h。另外,皂苷在唾液中的降解较胃液和肠液温和,而在胃肠道中的降解更广泛;在消化过程中,Rg_(1)比Rb_(1)更易降解。人参皂苷在消化道内会发生水解反应生成多种小分子皂苷,为Rb_(1)和Rg_(1)开发和利用提供了重要的化学与生物学基础。

人参皂苷Rg_(1)治疗阿尔茨海默病作用及机制的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种常见的起病隐匿、呈渐进性发展的脑部神经退行性疾病,以认知功能障碍为主要表现,目前尚无逆转其病程的特效药物。近年来,对AD发病机制及药物,尤其是天然产物干预方面的研究逐步取得了实质性进展,诸多学者利用动物与细胞模型已从不同角度证实了人参皂苷Rg_(1)是人参总皂苷中活性最显著的相关成分。本文就近年来国内外关于人参皂苷Rg_(1)治疗AD作用及机制的研究进展进行梳理归纳,以期为将该成分开发成治疗AD和其他类型记忆障碍的新药提供参考依据。

人参皂苷Rg_1、甲壳胺和转化生长因子β_1对人牙周膜细胞增殖和分化功能的作用

目的 :探讨人参皂苷Rg1、甲壳胺 (Chi)和转化生长因子 β1(TGF β1)对原代培养的人牙周膜细胞增殖和分化功能的影响。 方法 :用原代培养的人牙周膜细胞 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法、酶动力学方法、放射免疫法和流式细胞仪检测人参皂苷Rg1(0 .0 1μmol/L)、不同浓度Chi(0 .0 5 g/L、0 .1g/L、0 .2 g/L)、不同浓度TGF β1(0 .5 μg/L、1μg/L、2 μg/L)和单纯DMEM培养液 (对照组 )对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶 (ALP)活性、骨钙素分泌和细胞凋亡的影响。 结果 :①与对照组比较除TGF β1(0 .5 μg/L、2 μg/L)组和Chi(0 .2 g/L)组第 7天外 ,TGF β1、Chi各浓度组及人参皂苷Rg1组在 3、5、7天均能明显增强牙周膜细胞的增殖能力 (P <0 .0 5 )。②TGF β1、Chi各浓度组及人参皂苷Rg1组细胞裂解液中ALP活性均明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。③ 7天时 ,除Chi(0 .2 g/L)组外 ,其他各组骨钙素分泌均明显强于对照组 (P <0 .0 5 ) ;2 1天时 ,人参皂苷Rg1(0 .0 1μmol/L)组明显高于其他各组 (P <0 .0 5 )。④TGF β1(1μg/L)组、Chi(0 .1g/L)组和人参皂苷Rg1(0 .0 1μmol/L)组细胞凋亡百分率与对照组比较均明显降低 (P<0 .0 1)。 结论 :与TGF β1一样 ,Chi及人参皂苷Rg1有促进牙周膜细胞增殖的作用 。

人参皂苷Rg_(1)对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝纤维化的作用

目的:研究人参皂苷Rg_(1)对高脂饮食喂养诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝纤维化的作用及机制。方法:50只雄性C57BL/6J小鼠分为正常对照组、模型组、二甲双胍(150 mg/kg)阳性对照组及人参皂苷Rg_(1)低(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组,每组10只。除正常对照组外各组小鼠高脂饮食喂养24 w。造模开始12 w后,各给药组每天灌胃给予相应药物1次,连续12 w。药物处理至第12周时进行葡萄糖耐量实验和胰岛素耐量实验;检测体质量及血糖、胰岛素、瘦素、丙氨酸氨基转移酶、门冬酸氨基转移酶水平;取肝脏组织,HE染色观察肝脏组织病理学改变,天狼星红染色检测肝脏纤维化情况;相应试剂盒检测肝脏组织三酰甘油、总胆固醇含量,Western blot检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)表达。结果:与模型组比较,人参皂苷Rg_(1)高剂量组大鼠体质量、胰岛素抵抗及血清葡萄糖、胰岛素、瘦素水平显著降低(P<0.05)。人参皂苷Rg_(1)低、高剂量组大鼠肝功能损伤、肝脂肪病变和肝纤维化明显改善,肝组织α-SMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TGF-β_(1)、p-Smad3、Wnt3a、β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg_(1)能有效改善高脂饮食诱导的NAFLD肝纤维化,其机制可能与抑制TGF-β_(1)/Smad通路和Wnt/β-catenin通路有关。

人参皂苷Rg_(1)水溶性纳米颗粒的制备工艺

以人参皂苷Rg_(1)为原料、羟丙基-β-环糊精为载体、人参皂苷Rg_(1)水溶性纳米颗粒粒径为评价指标,通过单因素试验、正交试验优化制备工艺,制备人参皂苷Rg_(1)水溶性纳米颗粒;应用红外光谱、扫描电镜、X射线衍射、热质量分析、体外缓释试验,对人参皂苷Rg_(1)水溶性纳米颗粒进行表征。结果表明:人参皂苷Rg_(1)水溶性纳米颗粒的最优制备工艺——m(人参皂苷Rg_(1))∶V(水)为1 g∶20 mL、m(羟丙基-β-环糊精)∶m(人参皂苷Rg_(1))为4 g∶1 g、反应温度为25℃、反应时间为45 min;制备的人参皂苷Rg_(1)水溶性纳米颗粒平均粒径为(405±20)nm,具有良好的水溶性和体外释放效果。

能量分辨质谱区分与检测人参皂苷同分异构体20(S)-Rf和Rg_(1)

将连续变化的碰撞能量与串联质谱相结合,建立了能量分辨质谱(Energy-resolved mass spectrometry,ERMS)分析方法用以区分和检测人参皂苷同分异构体20(S)-Rf和Rg_(1).ERMS将子离子与母离子强度的比值定义为强度分数(Intensity fraction,IF),两个子离子强度的比值定义为强度比(Intensity ratio,IR),并通过IF和IR分别对连续变化的碰撞能量作图建立特征碎片离子的IF和IR曲线.虽然20(S)-Rf和Rg_(1)的串联质谱图无明显差异,但是多元统计分析结果显示其特征碎片离子[M-Glc-H]-,[M-2Glc-H]-和[M-2Glc-C_(6)H_(12)-H]-的IF和IR曲线差异显著,有明显的区分边界,可以直接区分20(S)-Rf和Rg_(1).进一步利用ERMS实时分析了原人参三醇型皂苷生物转化产物中20(S)-Rf和Rg_(1)的相对摩尔含量.结果表明,ERMS不需液相色谱分离即可实现20(S)-Rf和Rg_(1)的快速区分和相对含量检测.

人参皂苷Rg_(1)对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用及其分子机制

目的探究人参皂苷Rg_(1)对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用及分子机制。方法选取22~24 d SD的大鼠提取卵巢颗粒细胞进行原代培养,应用顺铂诱导建立卵巢早衰模型。设置正常组,模型组,人参皂苷Rg_(1)低浓度组、中浓度组、高浓度组和雌二醇(E2)组。HE染色及免疫细胞化学法进行颗粒细胞鉴定;CCK8法检测人参皂苷Rg_(1)作用24 h、48 h对顺铂损伤颗粒细胞的保护作用;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blot法检测FSHR、PI3K、p-AKT、AKT、Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果细胞形态观察和胞质FSHR表达检测结果均表明所提取细胞为卵巢颗粒细胞;顺铂处理12 h后,颗粒细胞增殖率呈剂量依赖性下降,而给予人参皂苷Rg_(1)后,细胞增殖率下降被显著抑制,且呈剂量和时间依赖性;与模型组比较,人参皂苷Rg_(1)和E2处理后卵巢颗粒细胞中FSHR、PI3K、p-AKT/AKT及Bcl-2/Bax蛋白表达水平显著上升,而PI3K抑制剂干预后,Bcl-2蛋白表达显著下降。结论人参皂苷Rg_(1)对顺铂损伤的卵巢颗粒细胞具有保护作用,该保护作用可能通过激活FSHR/PI3K/AKT通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡实现。

红参中总皂苷及人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)含量的测定

目的测定不同产地的26批红参药材中总皂苷及人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)的含量。方法采用紫外可见分光光度法测定红参中总皂苷的含量,高效液相色谱法测定红参中人参皂苷Rg 1、Re、Rb 1的含量。结果26批红参药材中总皂苷含量为1.2%~3.0%,人参皂苷Rg_(1)、Re含量之和为0.17%~0.61%,人参皂苷Rb_(1)含量为0.21%~0.81%。结论不同产地的红参药材总皂苷及人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)的含量存在差异,提示应进一步规范红参药材的种植、加工炮制及标准的建立。

人参皂苷Rg_(1)对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化损伤保护作用研究

目的观察人参皂苷Rg_(1)对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化损伤保护作用,并探讨其机制。方法体外培养HaCaT细胞,H_(2)O_(2)诱导细胞建立氧化应激损伤模型,分为空白组、H_(2)O_(2)损伤组、人参皂苷Rg_(1)保护组。细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,Hochest染色法检测细胞凋亡情况,活性氧检测试剂盒测定细胞活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞中caspase-3、caspase-6、caspase-8、GAPDH蛋白表达。结果H_(2)O_(2)诱导HaCaT细胞半数抑制浓度为100μg·mL^(-1);与H_(2)O_(2)损伤组比较,5、10和15 mg·L^(-1)人参皂苷Rg_(1)预处理后,HaCaT细胞存活率明显升高(P<0.05),细胞核皱缩损伤状态明显改善,细胞凋亡数量显著减少。同时,人参皂苷Rg_(1)预处理可显著降低HaCaT细胞活性氧水平,下调凋亡相关标志蛋白-活化型caspase-3、caspase-6、caspase-8蛋白表达水平。结论人参皂苷Rg_(1)对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制凋亡相关。

三七药酒中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定

目的:建立三七药酒中人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1的含量测定方法,为其质量标准提升提供理论基础。方法:采用HPLC梯度洗脱建立三七药酒中人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1的含量测定方法。使用Acchrom Unitary C 18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~20 min,20%A;20~45 min,20%A→46%A;45~55 min,46%A→55%A;50~60 min,55%A;60~61 min,55%A→90%A;61~70 min,90%A),流速1.5 mL·min^(-1),检测波长203 nm,用外标法测定了21个批次的三七药酒中人参皂苷Rg1的含量。结果:人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1分别在3.446~344.6μg·mL^(-1)(r=1.0000),6.078~303.9μg·mL^(-1)(0.9999)范围内,线性关系良好,平均加样回收率分别为98.4%(RSD=1.4%,n=6),95.2%(RSD=2.9%,n=6)。结论:建立的方法简单准确,可用于三七药酒中三七的质量控制。

HPLC法测定参芍胶囊中人参皂甙Rg_(1)的含量

目的:建立参芍胶囊中人参皂甙Rg_(1)含量测定的高效液相色谱方法。方法:用Hypersil-ODS柱(4.6 mm×150mm,5μm)分离,甲醇-水(体积比50∶50)洗脱,流速1.0mL/min,检测波长设置为203nm。结果:人参皂甙Rg_(1)在2.6~26μg范围内具有良好的线性关系,其线性方程为Y=231896X+44038(n=10,r=0.9994),平均加样回收率为99.84%,(RSD=0.91%n=6)。结论:用该法测定人参皂甙Rg_(1)的含量,线性关系良好、精密度较好、准确度高、稳定性好,可用于参芍胶囊中Rg_(1)质量控制。

HPLC法测定丹参益心胶囊中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)、三七皂苷R_(1)的含量

目的:研究丹参益心胶囊中三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱法HPLC测定三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。结果:三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)三者的加样回收率R_(1)为99.7%、Rg_(1)为99.8%、Rb_(1)为97.6%,RSD分别为1.6%,1.1%,1.1%(n=6)。结论:该方法简便,灵敏,重现性好,可作为丹参益心胶囊中三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定的方法。

人参皂苷Rg_(1)生物合成相关候选基因的鉴定和功能初步研究

人参Panax ginseng为五加科人参属多年生草本植物,其主要活性成分为人参皂苷。在已报道的单体皂苷中,人参皂苷Rg_(1)不仅药用功能广泛、含量丰富,且是《中国药典》中用于鉴定人参品质的主要单体皂苷种类之一。人参皂苷Rg_(1)的生物合成主要催化途径目前已较为明晰,这为解析人参皂苷Rg_(1)的生物合成与调控机制奠定了基础。但是人参皂苷Rg_(1)的合成涉及其他复杂过程,可能还有许多调控基因及催化酶基因,需要进行更加深入、全面的研究。因此,该研究基于前期所得的344份四年生人参根样本的转录组数据库及其对应的人参皂苷Rg_(1)含量表型,利用R语言中的DEseq2分析获得了随人参皂苷Rg_(1)含量变化的217条显著差异表达基因,并在此基础上通过WGCNA获得其中的40条hub基因,进一步利用Pearson相关分析得到其中20条与人参皂苷Rg_(1)含量显著相关的候选基因群,以上基因可注释到初级代谢、次生代谢等多个代谢过程中。随后通过在MeJA诱导的人参不定根中的表达分析,初步验证了其中16条基因响应MeJA诱导对人参皂苷Rg_(1)生物合成的影响。最后从16条基因中随机抽取1条,通过遗传转化和荧光定量的方法进一步验证基因的功能,并确认该研究方法的合理性。以上所得结果将为人参皂苷Rg_(1)的合成调控机制深入研究奠定基础,并为人参皂苷Rg_(1)的工厂化生产提供基因资源。

人参皂苷Rg_(1)调控SIRT3介导ATP5A1去乙酰化减轻HL-1心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究

探讨人参皂苷Rg_(1)通过沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,SIRT3)抑制ATP合成酶α-亚基(ATP synthase subunit alpha,ATP5A1)乙酰化减轻HL-1细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的机制。该研究以HL-1心肌细胞为研究对象,通过缺氧6 h、复氧2 h构建H/R损伤模型。首先采用细胞活力检测试剂盒筛选人参皂苷Rg_(1)的最佳有效浓度,然后通过微量法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量,评估人参皂苷Rg_(1)对HL-1心肌细胞H/R损伤的保护作用。进一步采用蛋白免疫印迹法检测心肌细胞中SIRT3表达量和线粒体蛋白乙酰化水平;荧光素酶法测定三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量,免疫共沉淀检测ATP5A1乙酰化水平;Seahorse XFp测定细胞耗氧率(oxygen consumption rate,OCR),流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果显示,与正常组比较,模型组LDH漏出量显著增加,SIRT3表达量降低,线粒体蛋白乙酰化水平和ATP5A1乙酰化水平显著升高,OCR降低,ATP含量减少,细胞凋亡率升高;与模型组比较,人参皂苷Rg_(1)组LDH漏出量显著减少,SIRT3表达量升高,线粒体蛋白乙酰化水平和ATP5A1乙酰化水平显著降低,OCR升高,ATP含量增加,细胞凋亡率减少;与人参皂苷Rg_(1)组比较,人参皂苷Rg_(1)+si SIRT3组LDH漏出量显著增加,SIRT3表达量降低,线粒体蛋白乙酰化水平和ATP5A1乙酰化水平显著升高,OCR降低,ATP含量减少,细胞凋亡率升高。综上所述,人参皂苷Rg_(1)可以通过SIRT3抑制ATP5A1乙酰化改善线粒体呼吸功能减轻HL-1细胞H/R损伤。

HPLC法同时测定腰息痛胶囊中3种活性成分含量

目的 建立HPLC法同时测定腰息痛胶囊中的三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。方法 采用Omini MP C_(18)(4.6 mm×200 mm,5μm)为色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为0.7 ml/min;检测波长为203 nm;柱温为25℃。结果 三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)分别在40.402~1010.500,40.480~1012.000,41.480~1037.000μg范围内呈线性关系(r<0.99);平均加样回收率分别为97.8%,97.5%,98.7%(RSD<2.0%,n=6);精密度、重复性等试验均符合规定。结论 此法简便易行、结果科学,可为中西药复方制剂腰息痛胶囊中的3种皂苷类成分定量控制提供技术依据。

人参皂苷Rg_(1)通过IRE1-JNK-CHOP通路抑制自噬改善OGD/R诱导的PC12细胞损伤

探讨人参皂苷Rg_(1)(ginsenoside Rg_(1),GRg_(1))对氧糖剥夺/复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤大鼠嗜铬细胞瘤(rat adrenal pheochromocytoma,PC12)细胞的保护作用及其作用机制是否与调控肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)-c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)-C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)信号通路有关。在PC12细胞中建立OGD/R模型,将PC12细胞随机分组为对照组、模型组、OGD/R+GRg_(1)(0.1、1、10μmol·L^(-1))组,OGD/R+GRg_(1)+雷帕霉素(rapamycin,自噬激动剂)组、OGD/R+GRg_(1)+3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA,自噬抑制剂)组、OGD/R+GRg_(1)+衣霉素(tunicamycin,内质网应激激动剂)组、OGD/R+GRg_(1)+4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA,内质网应激抑制剂)组、OGD/R+GRg_(1)+3,5-二溴水杨醛(3,5-dibromosalicylaldehyde,DBSA,IRE1抑制剂)组。除对照组外,其他组都进行OGD/R处理,即氧糖剥夺6 h再复氧6 h。MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡情况,MDC法检测细胞自噬体的荧光强度。Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、p62和通路相关蛋白IRE1、p-IRE1、JNK、p-JNK、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CHOP的表达情况。结果显示,与模型组相比,0.1、1、10μmol·L^(-1)GRg_(1)剂量依赖性地提高了PC12细胞的活力,降低了自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ和通路相关蛋白p-IRE1、p-JNK、GRP78、CHOP表达,降低了细胞凋亡率和MDC荧光强度,同时也增加了p62蛋白表达。而分别干预自噬和内质网应激后,与OGD/R+GRg_(1)(10μmol·L^(-1))组相比,OGD/R+GRg_(1)+rapamycin组和OGD/R+GRg_(1)+tunicamycin组细胞凋亡率和MDC荧光强度增加,自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ和通路相关蛋白p-IRE1、p-JNK、GRP78、CHOP表达增加,细胞相对存活率和p62蛋白表达降低。3-MA、4-PBA和DBSA则发挥了相反作用。综上所述,GRg_(1)可能通过IRE1-JNK-CHOP通路抑制自噬而改善OGD/R诱导PC12细胞的损伤。

人参皂苷Rg_(1)通过miR-155/Notch1/Hes1通路调控自噬减轻HL-1细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

该文探讨人参皂苷Rg_(1)通过微小RNA155(miR-155)/神经源性基因Notch同源蛋白1(neurogenic gene Notch homologous protein 1,Notch1)/发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split 1,Hes1)通路调控细胞自噬减轻HL-1心肌细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的具体机制。构建H/R损伤HL-1细胞模型,使用人参皂苷Rg_(1)和(或)Notch1抑制剂(DAPT)、miR-155 mimics处理细胞。cell counting kit(CCK)-8检测H/R损伤HL-1细胞的相对活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞培养基上清液中LDH的含量;透射电镜观察细胞自噬小体;MDC法检测细胞自噬水平;荧光定量聚合酶链式反应检测miR-155、Notch1、Hes1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3)的mRNA水平;蛋白免疫印迹法检测Notch1、Hes1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ的蛋白表达水平。结果显示,H/R损伤后HL-1细胞活性降低、LDH漏出量增加,细胞内自噬小体增多,LC3的mRNA水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高;人参皂苷Rg_(1)能提高细胞活性,减少LDH漏出量,减少细胞内自噬小体数量,降低细胞内LC3的mRNA水平,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,通过抑制细胞自噬发挥心肌细胞保护作用,Notch1抑制剂或miR-155过表达则抑制人参皂苷Rg_(1)的作用,促进细胞自噬,加重HL-1细胞H/R损伤;人参皂苷Rg_(1)抑制H/R损伤造成的Notch1、Hes1 mRNA水平和蛋白表达降低、miR-155 mRNA水平升高,Notch1抑制剂或miR-155过表达则呈现相反作用。综上所述,人参皂苷Rg_(1)通过miR-155/Notch1/Hes1通路调控自噬减轻HL-1心肌细胞H/R损伤。

UPLC-MS/MS测定心悦胶囊中6个皂苷类成分的含量

目的:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)建立心悦胶囊中主要成分人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、拟人参皂苷F_(11)、人参皂苷Rd和20(S)-人参皂苷F1的含量测定方法。方法:使用Waters ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(–1),柱温为40℃,电喷雾电离源,多反应离子监测扫描方式进行检测。结果:6个成分分别在质量浓度为9.638~963.800、9.839~983.900、9.951~995.100、5.270~1054.000、9.608~960.800、4.905~981.000 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r>0.998),平均加样回收率(RSD)分别为96.9%(2.2%)、100.1%(1.5%)、97.2%(1.8%)、98.5%(2.3%)、96.6%(2.8%)、100.2%(3.5%)。结论:所建立的方法快速、准确、灵敏度高,可用于心悦胶囊中西洋参茎叶总皂苷的质量控制。

人参皂苷Rg_(1)联合水蛭素对急性心肌梗死后心肌纤维化小鼠的作用及机制

目的:探讨人参皂苷Rg(1 G-Rg_(1))联合水蛭素(Hirudin)对急性心肌梗死(AMI)心肌纤维化小鼠的作用及可能机制。方法:75只C57BL/6N小鼠随机分成假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、G-Rg(120 mg·kg^(-1))组、Hirudin(20 mg·kg^(-1))组、G-Rg(120 mg·kg^(-1))+Hirudin(20 mg·kg^(-1))组。结扎小鼠左冠状动脉前降支建立AMI模型,持续灌胃4周。通过结扎前后小鼠心电图变化判断模型成功与否、检测每组心脏指数、超声心动图、心肌纤维化、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、血小板-内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)内皮间质转分化(EndMT)相关指标、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的变化。结果:结扎左冠状动脉前降支后,R波与T波之间融合为高大的帐篷状波,出现“损伤型”ST段改变,提示模型制备成功;与Sham组比较,Model组毛发暗淡干枯且行动迟缓;心脏指数显著升高(P<0.01);左室射血分数(EF)和左室缩短分数(FS)水平显著下降(P<0.01),左室舒张末期内径(LVEDd)和左室收缩末期内径(LVESd)水平显著升高(P<0.01);心肌纤维排列无序,大量胶原纤维显著增生(P<0.01),COL1A1蛋白表达显著增加(P<0.01);ICAM-1、VCAM-1蛋白水平显著升高(P<0.01);CD31表达下降,α-SMA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组上述指标均得到不同程度改善(P<0.05,P<0.01),且联合组效果更佳(P<0.01)。结论:G-Rg_(1)联合水蛭素具有改善AMI后心肌纤维化的作用,其机制可能与抑制心脏组织黏附分子蛋白表达,减少炎性细胞黏附,减轻心脏炎症、抑制心脏EndMT有关。

面瘫复正膏质量标准研究

目的:建立面瘫复正膏的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中三七、紫花地丁、熟大黄、厚朴4味药材进行薄层鉴别。高效液相色谱法测定复方中人参皂苷Rg_(1)含量,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C8(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-水(梯度洗脱),检测波长203 nm。结果:薄层鉴别分离效果良好,阴性对照无干扰;人参皂苷Rg_(1)进样量在1.425~7.125μg(R^(2)=0.9997)之间线性范围良好,回收率的平均值为100.71%(RSD为1.14%)。结论:所建立的方法专属性强,重现性好,可用于面瘫复正膏的质量控制。