RHD抗原阴性孕产妇的围孕期管理及研究进展

R H是目前44个人类红细胞血型系统中除ABO血型外,最复杂、最富多态性的血型系统,D抗原是其中免疫原性最强的,红细胞上无D抗原为RHD阴性(简称RH-)血型。RH-人群的比例差异较大,欧美人群约占15-17%,非洲人群约占3-10%,我国及其他东南亚人群比例少约占0.3-0.4%。RH-在我国虽属稀有血型,但根据其人群的分布特点和遗传规律,我国的RH-孕妇分娩RH+胎儿的概率反而极高;且随着我国近年来多胎生育政策的逐步开放,RH-妇女再次妊娠率逐年增加,RH-血的用血需求也相应增加。上述情况增加了母婴RH血型不合的风险,进而增加了胎儿/新生儿免疫溶血性疾病 (简称HDFN)的风险,HDFN发病早、进展快、病情严重、并发症风险高,严重威胁围产儿的生命健康、影响患儿远期生活质量,因此规范RH-孕产妇的围孕期管理尤为重要。但目前我国尚无统一、权威的管理指南,故本文综合了国内外相关文献,总结了围产保健方向的RH-孕产妇的围孕期管理规范要点,供临床产科医生参考,以降低HDFN发生率、围产儿死亡率、提高母婴保健质量。

抗D人免疫球蛋白使用对Rh阴性产妇抗D抗体产生及新生儿溶血病的影响

目的 分析抗D人免疫球蛋白的使用对Rh阴性产妇抗D抗体产生及新生儿溶血病(hemdytic disease of newborn,HDN)的影响。方法 回顾性分析福建医科大学附属龙岩市第一医院2019年1月—2020年7月收治的78例Rh阴性产妇及其孩子在该院的免疫血液学和HDN检测结果的病例资料,按产妇是否使用抗D人免疫球蛋白分为使用组(21例)与未使用组(57例)进行分析。结果 78例Rh阴性产妇中检出A型20例,B型15例,O型36例,AB型7例。Rh阴性确认实验为D阴性达75例(96.2%),其中A型20例(100%),B型14例(93.3%),O型35例(97.2%),AB型6例(85.7%);D变异型占3例(3.8%)。75例D阴性中ccee型31例(41.3%、)Ccee型29例(38.7%)、CCee型8例(10.7%)、CcEe型4例(5.3%)、cc Ee表现型3例(4%)。2组共检测出抗D抗体10例(12.8%),其中使用组检出1例(4.8%),未使用组9例(15.8%);使用抗D人免疫球蛋白组HDN共检出2例(25%)低于未使用组10例(43.4%)。结论 Rh阴性产妇以O型居多,Rh分型以ccee型和Ccee型为主;使用抗D人免疫球蛋白可以有效预防和减少抗D抗体的产生及降低HDN检出率。

RhD抗原阳性患者血清Rh意外抗体的检测分析

目的分析RhD抗原阳性患者血清中检出Rh意外抗体的特异性和配血对策。方法采用微柱凝胶法(MGT)对患者血标本进行ABO、RhD血型鉴定及抗体筛选,对抗体筛选阳性或交叉配血不合的患者血标本,采用试管盐水法(NS)、手工凝聚胺法(MPT)、间接抗人球蛋白试验(IAT)及吸收放散试验进行抗体特异性鉴定和交叉配血试验。对患者红细胞进行直接抗人球蛋白试验(DAT)及相应抗原检测,以排除自身抗体的干扰和验证抗体鉴定结果的准确性。结果在34例RhD抗原阳性(含Rh弱D型及部分D型各1例)患者血清中,男15例(41.12%),女19例(55.88%),年龄0~90岁。A型13例(38.24%)、B型11例(32.35%)、O型6例(17.65%)、AB型4例(11.76%)。Rh抗E抗体20例(58.82%)、抗C抗体2例(5.88%)、抗c抗体2例(5.88%)、抗Ec抗体4例(11.76%)、抗Ce抗体2例(5.88%)、抗D抗体2例(5.88%)、抗DE抗体2例(5.88%)。抗体类型为IgG类,抗体效价为16~32,凝集强度为2+~3+。DAT阴性30例,DAT阳性4例(均为胎儿/新生儿溶血病患儿)。结论Rh意外抗体为IgG类抗体,可导致溶血性输血反应或胎儿/新生儿溶血病的发生。

基于三代测序技术的RHD、RHCE基因mRNA研究

目的建立基于Nanopore的RH基因mRNA三代测序方法,探讨D阳性和D^(el)表型中RHD、RHCE基因mRNA转录本的种类和表达水平差异。方法选取2021年3月~2022年5月成都市各医院送检至本实验室的经RhD血清学初筛及确证试验阴性的RhD阳性标本5例、D^(el)型标本5例。分离有核红细胞和白膜层,提取DNA和RNA,采用PCR-SSP对RhD阳性、D^(el)型基因分型,mRNA逆转录为cDNA后,采用1对引物同时对RHD、RHCE基因的全长mRNA扩增。分别采用Sanger测序和基于纳米孔的三代测序技术对扩增产物进行测序,并对RHD、RHCE基因mRNA转录本的不同剪接体种类和表达量进行分析。结果本研究建立的方法可同时扩增出RHD和RHCE的全长转录本,在10例标本中检测到了10种不同RHD基因mRNA转录本、9种RHCE基因mRNA转录本。D^(el)型中可检测到RHD的全长转录本(RHD-201),但表达量显著低于RhD阳性标本,D^(el)标本中转录本RHD-207(D^(el)789)表达量显著高于RhD阳性标本,转录本RHD-208(D^(el)8910+213)仅在D^(el)型个体中检出,其他RHD转录本以及所有RHCE转录本在2种个体中未发现显著差异。结论本研究成功建立了RHD、RHCE基因mRNA三代测序全长转录本异构体的分析方法,发现RHD、RHCE基因存在复杂的选择性剪接模式,为血型基因变异体mRNA选择性剪接研究提供了新方法。

RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL型红细胞短期内引起高效价抗-D的同种免疫研究

目的通过对1例RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞后诱发同种抗-D免疫的研究分析,探讨RhD阴性患者输注DEL型策略。方法采用血清学方法进行ABO及Rh系统血型抗原检测、不规则抗体筛查及鉴定,高分辨熔解曲线和基因测序分析检测DEL型的RHD基因分型。结果受血者为O型,RhD阴性。供血者为RHD 1227G>A突变的“亚洲型”DEL,Rh表型为Ccee。受血者输血后抗体筛查阳性,并鉴定为抗D和抗C,抗D效价512,抗C效价128。结论RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞会引起抗-D同种免疫。因此对于RhD阴性献血者应加强DEL型的筛查,必要时可以增加RHD基因检测以保障输血安全。

The Popularization and Application of Cold Storage Red Blood Cells or Whole Blood at -80 ℃ of the Rh(D) Negative Patients in Surgical Operation

Summary: The efficiency of cold storage red blood cells (CSRBC) or whole blood at -80 ℃ used in 27 Rh(D) negative patients during surgical operation was reported. The Rh(D) negative patients received the transfusion of CSRBC or whole blood stored at -80 ℃ for 180 to 360 days. The changes in the indexes, such as blood TB, DB, K +, Na +, BUN, Cr, urine protein (URPO), UOB, Hb, HCT, serum total protein, relative to hemolytic reaction and blood volume before and after transfusion were observed. The results showed that after transfusion of CSRBC or whole blood 27 cases were negative for urine protein and UOB, and the levels of BUN and Cr were normal (P>0.05). Blood TB, DB, Hb, and HCT were increased, while pH, blood K + and blood Na + was normal with the difference being not significant before and after operation (P>0.05). Plasma protein was decreased, but there was no significant difference before and after operation (P>0.05). It was suggested that CSRBC or whole blood at -80 ℃ could be safely infused to the Rh(D) negative patients without side effects during the surgical operation.

孕产妇Rh表型分布特征及相容性输血的可行性探讨

目的:分析重庆地区孕产妇Rh表型分布特征,探讨Rh表型在孕产妇中的临床意义及实行Rh表型相容性输血的可行性。方法:采用微柱凝胶法对65161例孕产妇进行ABO血型和Rh表型检测,以同期48122例男性为对照,通过χ^(2)检验对数据进行比较分析。结果:113283例样本中,RhD+112870例(99.64%),以CCDee(48.39%)和Cc DEe(32.88%)为主要表型,并检出重庆地区首例Rh缺失型D--表型;Rh D-413例(0.36%),以ccdee(52.78%)和Ccdee(33.41%)为主要表型;RhD+组与Rh D-组的Rh表型分布差异有统计学意义(P<0.01)。在65161例孕产妇中,Rh5种抗原的阳性率由高到低为D>e>C>c>E,与男性相比差异无统计学意义(P>0.05);孕产妇Rh表型分布与男性相比差异无统计学意义(P>0.05);不同ABO血型的孕产妇间Rh表型分布差异无统计学意义(P>0.05)。在孕产妇中,正常妊娠人群、有不良流产史人群、采用人类辅助生殖技术人群和不孕症患者人群间Rh表型分布无明显差异(P>0.05),4个孕产妇人群与本地区综合性三甲医院住院患者和献血者相比,Rh表型分布差异无统计学意义(P>0.05)。RhD阳性孕产妇中,CcDEe表型找到相容性血液的概率为100%,CCDee、CcDee和CCDEe表型找到相容血液的概率为45%-60%,ccDEE、ccDEe、CcDEE表型找到相容血液的概率为5%-10%,其余表型的相容概率均低于0.5%;提供CCDee和ccDEE两个表型的血液即可满足99%以上患者7种Rh表型相容性输血需求。结论:应对孕产妇进行Rh表型检测,对需要输血的孕产妇推行Rh表型相同或相容性输血是切实可行的输血举措。

储存式自体输血在Rh(D)阴性血型产妇输血中的应用效果及安全性

目的探讨在Rh(D)阴性血型产妇输血中储存式自体输血应用效果以及安全性。方法选取2019年6月至2021年6月本院收治的90例Rh(D)阴性血型产妇作为研究对象,均采用储存式自体输血方式进行输血治疗干预,比较不同时间段血液学指标[血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、血小板(PLT)及红细胞压积(HCT)]变化。结果采血前、采血后24 h及回输血后,产妇Hb、RBC、PLT、HCT水平比较差异无统计学意义;所有产妇在采血过程中,均未呈现出手脚冰凉、面色苍白以及全身虚汗等表现;胎心监护未发现异常情况;所有新生儿Apgar评分8~10分,均在正常范围。结论合理采用储存式自体输血方式进行干预,可避免针对Rh(D)阴性血型产妇在实施手术过程中,呈现出血源紧张情况,安全性较高,值得临床推广应用。

Rh(D)初筛阴性孕妇妊娠史与抗D同种免疫的相关性分析

目的:探讨初筛Rh(D)阴性孕妇妊娠史与抗D同种免疫的相关性,更好地为Rh(D)阴性孕妇实施妊娠指导。方法:对2010年5月—2021年10月初筛为Rh(D)阴性的孕妇,采用试管法在盐水和抗人球介质下筛查血清中的意外抗体,分析抗体特异性并检测效价。通过询问孕产史,排除有输血史、注射免疫球蛋白及无免疫史个体,对妊娠史进行分类,探讨妊娠史对抗D同种免疫的影响。结果:对Rh(D)初筛阴性孕妇的1 355次意外抗体筛查中,去除重复检测、无孕产史、注射免疫球蛋白及有输血史孕妇,共计719例。抗体筛查检出意外抗体共33例,其中抗D 28例,合并抗C 2例,抗E 1例,抗M 3例,未鉴定出特异性的低效价冷抗体1例。719例Rh(D)阴性孕妇中孕1次、孕2次、孕3次、孕4次及以上的抗D阳性率分别为0.00%(0/177)、2.82%(8/284)、4.49%(7/156)、12.7%(13/102),差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠次数与抗D效价高低无统计学差异(P>0.05)。结论:Rh(D)阴性孕妇产生抗D的概率与妊娠次数呈正相关,减少妊娠次数可降低抗D抗体的产生。妊娠次数与抗D效价高低无明显关联性。

RhD--表型引起的胎儿新生儿溶血病的免疫学分析--附1例报道

目的分析1例胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)产生的原因,初步探讨产妇Rh缺失型D--形成的遗传背景。方法使用血清学方法对患儿及其母亲进行ABO血型、Rh分型,血液抗体细胞,谱细胞分析,探讨导致胎儿溶血的抗体以及Rh缺失型D--的血型血清学特点,对产妇进行RH基因序列分析。结果患儿母亲血型为O型,血清学试验结果显示Rh缺失型D--,怀疑为多次妊娠产生针对Rh高频抗原的抗-Hr0,抗体通过胎盘屏障,使患儿获得针对Rh高频抗原的抗-Hr0,导致HDFN,基因检测结果为RHCE^(*)Ce/RHCE^(*)Ce。结论对产妇开展Rh缺失型D--的形成机制进行深入研究,为HDFN换血治疗提供临床价值,也为特殊血型人群输血提供临床依据。

孕妇及胎儿Rh(D/E)免疫性溶血病的诊断与血液治疗

目的:探讨孕妇及胎儿Rh(D/E)血型不合的免疫性溶血病的治疗,预防孕妇早孕自然流产或不足月死胎。方法:用大量去除血浆和换血疗法对孕妇及胎儿或新生儿Rh(D/E)血型不合者进行治疗,以降低IgG抗D/E的含量,提高胎儿或新生儿的成活率。结果:2例孕妇及胎儿Rh(D)血型不合者去除血浆前IgG抗-D分别为512和1024,去除血浆3周后,IgG抗-D效价降至16和32,以后间断性的治疗,减少治疗频率,保持IgG抗-D≤64,置足月行剖宫术,产下正常男、女婴儿各1名;1例Rh(E)血型不合者未经治疗而胎死宫内;另1例Rh(D)新生儿溶血病(HDN)经换血治疗而得救。1年后随访,3例婴儿发育均良好,与正常婴儿无差异。结论:大量去除血浆,同时补充高蛋白饮食是治疗孕妇及胎儿RhD/E血型不合的免疫性溶血病的好方法,换血疗法是HDN治疗的最佳选择。

Rh阴性孕妇血型D抗原同种免疫反应研究

目的研究Rh阴性孕妇血型D抗原同种免疫反应,为建立有区别的D亚型的输血规则提供参考。方法对RhD阴性孕妇进行基因分型,并检测是否有抗-D;总结分析孕妇妊娠次数以及胎儿红细胞的检出与产生抗-D之间的相关性。结果在122名RhD表型阴性的孕妇中,检出d/d基因型97例,Del型20例,弱D15型1例,RHD-CE(2—9)-D/d融合基因型3例,DⅥⅢ型1例。在97名RhD阴性(d/d)孕妇中,有38例产生抗-D;20名Del血型孕妇均未检出抗-D;3名RhD-CE(2—9)-D/d中有2例产生抗-D;1名弱D15型的孕妇未检出抗-D;1名DⅥⅢ型孕妇抗-D检出阳性。统计分析表明孕妇的妊娠次数以及外周血中检出胎儿红细胞的检出与抗-D的产生有相关性,这可以成为Rh阴性孕妇被D抗原免疫的证据。结论不同D亚型的个体可能会对D抗原有不同的免疫反应,我们认为在中国Del血型的受者可以接收D阳性血液。建立有区别的输血规则可以节约有限的Rh阴性血资源和提高输血安全。

RhD抗原表达与CE抗原的关系研究分析

目的探讨D抗原表达强弱与RhCE抗原的关系。方法采用微量板法对RhD阳性献血者检测Rh表型;抗球蛋白卡式法初筛RhD阴性标本进行确认并分型;吸收放散试验对经抗球蛋白法确认为RhD阴性标本进行Del表型筛选。结果 D抗原在Rh表型不同时与抗体的凝集强度的平均值有差别,测得的D抗原凝集强度从强到弱依次为DccEE>DCCee>DccEe>DCcEe>DCcee,各表型之间抗原凝集强度存具有统计学意义(F=2.945,P<0.05);不同D表现型的RhCE表型构成是不同的,具体表现为一般D阳性与RhD阴性相比,前者C、E抗原所占比例较大,后者c抗原所占比例较大,弱D和Del型这2种特殊D阳性则表现在,C、c、E抗原比例介于两者之间。结论RHCE基因形成的抗原组合影响RHD基因表达D抗原,Cc,cc抗原组合的标本可能出现D凝集强度减弱或者极弱形成弱D或者Del型,甚至D抗原不表达形成D阴性。

2493例RhD阴性献血者的基因分析及4个新RHD等位基因的鉴定

目的研究中国汉族人群RHD等位基因多态性和分子机制。方法2008年1月-2011年9月，对2493例初筛为RH阴性的无偿献血者，采用单克隆抗体鉴定RhD／C／c／E／＇e抗原，D抗原鉴定同时采用间接抗球蛋白法；采用PCR·SSP方法测出d／d、D／d、DEL／d型，再用商用RHD基因检测试剂盒鉴定D／d型的样本中的弱D—15、RHD．CE（2-9）-D、DVI-Ⅲ和Dva型；对于排除前述基因型的样本，对其RHD基因10个外显子序列进行测序比对分析。结果2493例中，有1686名为R／／D基因完全缺失（0／O），占67．6％，其它808名检出有RHD基因：其中20．7％（516／2493）为DEL型（RHD1227G〉A／a），RHD—CE（2-9）-D／d为最常见的融合基因型，占6．5％（163／2493），其次为DⅥ·nl（RHD—CE（3-6）-D／d），占1．2％（31／2493），弱D15型为常见的弱D型，共检出62例（2．5％）；发现的4个新等位基因，分别是RHO78delC／d、RHD520G〉A＋1080dellO／dRHD、438G〉C／d和RHD101A〉G／d。结论汉族人群RHD等位基因多态性与高加索人群存在差异，有丰富的类型和不同分子机制。

RHD1227A型弱D的D抗原表位分析

目的分析携带RHD1227A等位基因的Rh血型弱D型个体的红细胞D抗原表位。方法采用常规血清学方法检测Rh血型D、C、c、E和e抗原表型,间接抗人球蛋白试验(IAT)确认D抗原,序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)测定RHD基因,并检测RHD杂合型。对确认的弱D型,使用12种抗-D抗原不同表位的单克隆抗体,分析红细胞D抗原表位。结果血清学筛选和PCR-SSP检测鉴定出3例携带RHD1227A等位基因的弱D型样本,Rh小因子均为C+c+E-e+,RHD合子型鉴定均为RHD+/RHD-杂合型,提示3例个体基因型为CDe/cde。3例个体红细胞D抗原表位分析显示均具有基本完整D抗原表位,与Rh(D)阳性对照样本相同。结论发现3例RHD1227A型弱D型;不管RHD1227A等位基因表达DEL型或弱D型,其D抗原表位近似,均表达基本完整D抗原,提示该等位基因不同量的表达可能与其它调节因素有关。

Rh血型抗-D阳性个体中未见DEL型

目的分析Rh血型系统抗-D抗体阳性个体的RhCcEe表型及检测DEL等位基因,观察产生抗-D同种免疫反应个体中是否存在DEL型。方法对因输血或妊娠产生抗-D同种抗体的个体,采用间接抗人球蛋白试验(IAT)排除部分D型或弱D型,然后进行RhCcEe表型检测,同时采用PCR方法检测RHD1227A等位基因鉴别DEL型和真实Rh(D)阴性表型。同时检测99名IAT确认的、抗-D抗体阴性的Rh(D)阴性健康人作对照。结果 99名抗-D抗体阴性组共检出C抗原阳性(包括CC或Cc)个体44名(44.4%);DEL型24名(24.2%)。抗-D抗体阳性组经IAT确认共118名Rh(D)阴性,C抗原阳性22名(18.6%),未发现DEL型个体,均与抗体阴性组存在显著性差异(P<0.01)。结论抗-D抗体阳性组未见DEL型,提示DEL型个体或不会因输血或妊娠针对Rh(D)抗原发生抗-D同种免疫反应;由于DEL型多携带C抗原,因此造成抗-D阳性组C抗原频率显著降低。

Rh(D)阴性患者紧急抢救输血中应用“配合型输血”的回顾性分析

目的：回顾性分析Rh（D）阴性患者特殊情况紧急抢救输血应用“配合型输血”的病例资料，探讨应用配合型输血的安全性和有效性。方法对新疆阿克苏地区2014年1月-2015年12月Rh（D）阴性患者特殊情况紧急抢救输血6例应用“配合型输血”（病例组）及6例应用同型输血（对照组）的基本资料、红细胞抗体筛查、胆红素、血红蛋白（Hb）、网织红细胞计数（Ret）、红细胞比容（Hct）及住院天数（d）等进行统计分析，探讨配合型输血安全性与有效性。结果病例组与对照组输血后72 h红细胞抗体筛查阴性均未产生抗-D、输血后24 h Hb实际升高值分别为（28.53±10.09）g/L和（21.24±3.13）g/L、无非传染性输血并发症发生，病例组与对照组输血前后各指标的差异无统计学意义。结论 Rh（D）阴性患者特殊情况紧急抢救输血应用“配合型输血”是一种安全有效的临床输血治疗途径，同时对输注Rh（D）阳性红细胞的患者也应建立的规范的追踪、随访及评价体系。

Rh部分D基因型分析

目的研究7例Rh部分D样本的基因分型。方法采用PCR-SSP技术检测常规血清学试验为D变异型的样本中的Rh部分D进行D基因分型。结果在30例常规血清学试验中,23例具有完整的RHD基因外显子(Rh弱D型),7例部分外显子缺失,为Rh部分D,23例为弱D型,并对部分D样本进行了基因分型,4例检测为D Cat.ⅥⅢ,1例为D Cat.Ⅵtype2,1例为D Cat.Ⅵtype 1,1例为基因2.9外显子融合,表示为RHD-CE(2-9)-D。结论 Rh部分D型与弱D型在血清学试验中无法区分,采用分子生物学方法才能够更准确的分型,更能确保输血安全。

Rh(D)阴性献血者不规则抗体检测的结果分析

目的分析Rh(D)阴性献血者不规则抗体检测的结果,探讨在献血者血液Rh(D)阴性确认试验时,进行不规则抗体检测的必要性。方法用间接抗人球蛋白法进行Rh(D)阴性确认试验及抗体筛选试验、抗体鉴定试验,盐水法进行Rh表现型的检测。结果 1205份Rh(D)阴性献血员标本中,抗体筛选试验阳性的标本有20份,经过抗体鉴定,其中抗-D 10份,抗-M 6份,非特异性抗体2份,抗-Lea1份,冷自身抗体1份。结论 Rh(D)阴性献血者抗体筛选阳性率高达1.66%,较以往报道的正常人群抗体筛选阳性率高。在临床供血上,其高检出率对临床用血安全有较为重要的意义,对Rh(D)阴性献血者更应该进行不规则抗体检测。