2例罕见RhD变异型RHD*DEL37的分子生物学分析

Rh血型系统是输血医学中重要的常规检测血型系统,因RhD血型不合引起的溶血性输血反应及新生儿溶血病一直以来倍受临床重视。本研究报道了2例罕见的RHD基因变异型RHD*DEL37个体的血清学和基因特征,这2例个体的血液样本经血清学方法(试管法和微柱凝胶法)鉴定为RhD阴性。采用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific prime,PCR-SSP)对样本进行RHD基因分型和合子型分析,基因分型结果为RHD基因阳性,并排除了常见的几种RHD基因变异体的可能。RHD基因合子型检测阳性,证明其中一条RHD等位基因1~10外显子全部缺失。进一步对样本RHD基因1~10外显子基因进行Sanger法测序,测序结果显示在另一条等位基因第8内含子上的第1154-31号碱基发生了T>C突变,国际输血协会(International Society of Blood Transfusion,ISBT)将该突变等位基因命名为RHD*DEL37,表型为RhD放散型(D-elute,Del)。本研究中,2例血清学初筛RhD阴性的样本通过分子生物学检测,其基因型为RHD*DEL37/RHD-(RHD*01N.01)。由于这2例个体无血缘关系,提示我国可能存在携带该基因突变的人群。本研究提示分子生物学方法可辅助鉴别血清学初筛为阴性的RhD变异体样本,联用分子生物学方法和血清学方法在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面有重要意义。

RhD变异型个体的表型类型和基因突变机制研究

目的:探讨RhD变异型个体的表型类型和基因突变机制。方法:收集2013年1月至2015年10月间经我中心用血清学方法确证的48例RhD变异型孕妇和献血者的血液标本,应用常规血清学方法进行Rh抗原分型后,提取血样DNA,用多重连接依赖探针扩增(multiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)对入选的48例受检者的RHD进行检测,分析RHD的杂合性和外显子突变情况,并将MLPA检测结果与常规血清学结果进行对比。对比结果不一致的标本进行RHD外显子全长测序,并对其中新发现的等位基因进行克隆测序。结果:48例标本中,CcDee 20例(41.7%)、ccDEe 12例(25%)、CCDee 11例(22.9%)、CcDEe 5例(10.4%)。MLPA检出RHD单条等位基因突变(即杂合性为Dvd型)的38例,其中包含点突变18例、RHD/CE杂交替换20例;涉及两条等位基因突变(即杂合性为DvDv型)的10例,其中包含点突变合并RHD/CE杂交替换9例、碱基缺失合并RHD/CE杂交替换1例。MLPA能够明确其RhD变异型别的有41例(85.4%,41/48),包括弱D15型(845A)等位基因14例、RhDⅥtype 3等位基因22例;7例通过测序分析得以明确。发现2例新的等位基因,分别为79-81del CTC、689G>A。结论:CcDee是RhD变异型人群的主要表型,弱D15和RhDⅥtype 3是受检人群的主要RhD变异型,点突变和RHD/CE的杂交替换是主要的分子机制,79-81del CTC和689G>A为本研究发现的2个新等位基因。

孕产妇Rh血型系统抗体检测和临床意义分析

目的探讨产妇Rh血型系统抗体的检出特点,分析其与新生儿溶血病之间的关系并制定临床输血应对策略。方法选取2016年10月至2018年6月中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)孕产妇红细胞不规则抗体筛选试验阳性的血标本,根据抗体的Ig类型应用抗球蛋白法或微柱凝胶抗球蛋白法,鉴定受检血清(血浆)与谱细胞及自身红细胞的反应结果;检测Rh血型抗体的效价、免疫球蛋白类型及37℃反应性以明确其临床意义;孕产妇受检红细胞D、C、E、c、e抗原采用单克隆抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e试剂鉴定其Rh血清学分型;新生儿标本进行溶血病三项试验,鉴定新生儿放散液的抗体与其母亲血清(血浆)中是否有相同,分析妊娠史、输血史与抗体产生的相关性。结果从4 680例住院孕产妇备血标本中共检出Rh血型抗体56例,检出率为1.20%,其中有妊娠史者48例,输血史者6例;Rh血型抗体的特异性为:抗-E 33例(58.92%)、抗-D 10例(17.86%)、抗-c 7例(12.50%)、抗-cE 5例(8.93%)、抗-C 1例(1.79%);血型抗体的免疫球蛋白类型主要为IgG或IgG+IgM类,间接抗球蛋白试验37℃下均可与相应抗原的红细胞凝集反应,抗体效价介于1~512;10例新生儿溶血病血清中抗体与其母亲相同。结论女性因妊娠或输血等免疫刺激是Rh血型抗体产生的主要原因,来自母体的Rh血型抗体可导致Rh-HDN,应增加孕产夫妇RhCE抗原常规检测并同型输血,可有效降低意外抗体的产生概率。

人RHD基因的克隆和鉴定

目的克隆人RHD基因,并对其进行鉴定。方法以RhD阳性志愿者骨髓为材料,用TRIzol试剂提取总RNA;设计、合成人RHD基因扩增引物,RT-PCR方法扩增RHD基因片段;T/A克隆后将其亚克隆入pET28a(+)载体中,经酶切、PCR和测序对重组质粒进行鉴定。结果骨髓总RNA被成功提取;RT-PCR成功扩增出RHD基因片段,其大小与预期约509 bp基本一致;T/A克隆后再将其亚克隆,通过酶切和PCR证明RHD基因成功亚克隆入pET28a(+)载体中;基因测序结果比对显示,与已公布的RHD基因(GenBank登录号为NM016124)序列基本一致,同源性为98%。结论成功克隆了RHD基因,这将为进一步研究奠定基础。

Rh血型系统阴性血型筛查及其临床意义

目的筛查Rh血型系统Rh(D)、Rh(E)、Rh(C)阴性血型,为临床预防溶血性输血反应及新生儿溶血性疾病的发生提供实验依据。方法用微柱凝胶法对11 035例作ABO血型鉴定标本同时进行Rh血型系统Rh(D)、Rh(E)、Rh(C)阴性血型筛查。结果 Rh(D)抗原阴性23例,检出率为0.21%;Rh(E)抗原阴性5 275例,检出率为47.8%;Rh(C)抗原阴性839例,检出率为7.6%。结论将Rh血型系统Rh(D)、Rh(E)、Rh(C)纳入到血型的常规检验项目,对预防溶血性输血反应的发生、提高输血治疗的安全性,以及预防新生儿溶血性疾病的发生具有十分重要的临床意义。

探讨ABO、RhD血型调查与建立Rh表型库在安全输血中的临床意义

目的调查河北省邯郸市峰峰矿区ABO、RhD血型在人群中的分布情况,分析患者不规则抗体筛查结果,探讨ABO、Rh血型调查与建立Rh表型库在安全输血中的临床意义。方法收集我院8000例住院患者ABO血型及RhD血型的检测结果,对需输血的患者5000例进行不规则抗体检测,阳性结果标本进一步行抗体特异性鉴定。随机选取3000袋RhD阳性滤白红细胞悬液样本检测Rh表型,通过电脑建立献血者Rh表型数据库,探讨其在输血中的重要意义及价值。结果8000例患者中ABO血型分布情况从多到少依次为B型血(32.02%)、O型血(28.98%)、A型血(27.01%)、AB型血(11.99%)。不同年龄组间ABO血型分布情况差异有统计学意义(P<0.05),不同性别组中ABO血型分布情况差异无统计学意义(P>0.05)。8000例患者中RhD阴性48例(0.60%)。男性和女性Rh血型分布差异无统计学意义(P>0.05)。5000例需输血患者的血样标本中不规则抗体阳性者30例(0.60%),Rh血型系统抗体阳性19例(63.33%),抗-E检出率最高。不规则抗体的检出率女性显著高于男性,差异有统计学意义(P<0.05)。3000例RhD阳性献血者血样标本Rh血型表型共8种,其中CCDee检出率最多,其次为CcDEe,DcDEE和ccDee检出率较少。结论ABO血型的分布与地域及年龄有关;临床上除在患者输血前进行不规则抗体筛查,应进一步检测其抗体特异性;建立献血者Rh表型数据库有利于预防因Rh表型不符输血引起的溶血性输血反应,对于临床安全输血工作具有重大意义。

Rh阴性女性接受Rh阳性亲属活体供肾一例报告

目的:探讨多次妊娠Rh阴性女性接受Rh阳性亲属活体供肾移植的可行性及疗效。方法:回顾性分析1例多次妊娠Rh阴性女性受者的临床资料,结合相关文献分析总结其接受Rh阳性亲属活体供肾移植后,近期可能发生的不良反应以及对移植物存活的影响。结果:受者术后已存活5个多月,肾功能良好,未见急性排斥反应发生,抗RhD抗体阴性。术后95天并发巨细胞病毒肺炎,经更昔洛韦治疗后痊愈。结论:Rh阳性亲属供肾经过充分灌洗,可移植给Rh阴性女性受者,短期效果良好,长期肾存活有待继续观察。

Rh阴性孕妇妊娠结局的Meta分析

目的:分析Rh阴性孕妇的妊娠结局。方法:计算机检索中国知网、维普、万方、PubMed和Embase数据库,搜集有关Rh阴性孕妇妊娠结局的相关研究,检索时间均为1980年1月1日—2018年1月30日。由2名研究者按照纳入与排除标准筛选文献、提取资料和评价纳入研究的质量,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入9篇文献,共4 122例研究对象,其中Rh阴性孕妇组679例,Rh阳性孕妇组3 443例。Meta分析结果显示,Rh阴性孕妇组新生儿高胆红素血症(RR=6.29,95%CI:3.64～10.85,P<0.000 01)和早产(RR=3.05,95%CI:1.80～5.15,P<0.000 1)的发生率均高于Rh阳性孕妇组。结论:Rh阴性孕妇发生新生儿高胆红素血症和早产的风险较高。因此,对Rh阴性孕妇要加强孕期监护,定期监测Rh抗体,以降低围生儿的各种并发症。

Rh阴性受者接受Rh阳性供肝移植临床经验分析

目的:探讨Rh阴性肝癌患者接受Rh阳性供肝移植病例的可行性、方法和疗效。方法:1例Rh阴性肝癌患者接受Rh阳性供肝,Rh阳性供肝经充分灌洗,术中尽量减少出血,并采用自体血储备、回收,术后定期随访,观察疗效。结果:1例Rh阴性肝癌患者接受Rh阳性供肝移植,手术过程顺利,肝功能恢复正常,甲胎蛋白(AFP)水平在正常范围内,现术后4年余,存活良好,抗Rh抗体为阴性。结论:Rh阳性供肝经充分灌洗,并采用自体血储备、回收后,可移植给Rh阴性的肝病患者,临床效果良好。

RhD阴性献血者RhD弱抗原变异体的发生频率

目的了解RhD阴性献血者RhD弱抗原变异体的发生频率,为提高输血安全性提供理论依据。方法首先采用盐水试管法对初筛为RhD阴性的血样进行RhD表型鉴定;然后采用间接抗球蛋白试验筛查Partial D和Weak D,最后用吸收放散试验从间接抗球蛋白试验确认阴性的血样中筛选并确认DEL型。结果 RhD阴性献血者中最多的Rh表型为dccee,其次为dCcee,分别为57.34%(207/361)和32.13%(116/361)。共筛查出Partial D和Weak D 19例,总检出率为5.26%(19/361),其中dccEe 8例(2.22%)、dCcee 5例(1.39%)、dCCee 4例(1.11%)、dccee和dCcEe各1例(0.28%)。共确认DEL型87例,总检出率为24.10%(87/361),其中dCcee 72例(19.94%)、dCCee 8例(2.22%)和dccEe 7例(1.94%)。结论 RhD阴性献血者RhD弱抗原变异体发生频率较高。常规血清学检测Rh阴性的供血者,应进一步排除RhD弱抗原变异体,以保障临床输血安全。

Rh母儿血型不合综合治疗方法的研究

目的 :探讨母儿Rh血型不合的综合治疗方法。方法 :对 2 4例Rh血型不合孕妇在孕期积极治疗并适时终止妊娠 ,对新生儿分别采用光疗、药物治疗和 (或 )交换输血等方法治疗。结果 :2 4例孕妇死胎 1例 ,分娩的 2 3例新生儿全部发生溶血 ,2例因病情过重抢救无效死亡 ,2 1例经治疗后健康存活 ,治愈率达 87 5 %。结论

Rh弱D抗原的临床检测意义

目的 探讨初筛为RhD阴性的样本进一步检测弱D抗原的临床意义。方法 对初筛为RhD阴性的样本进行间接抗人球蛋白试验（IAT）和三氯甲烷／三氯乙烯吸收放散试验。结果 49例初筛为RhD阴性样本中，IAT检出不完全D者4例，吸收放散试验检出D洗脱型（Delusion，Del）者6例，弱D抗原的检出与CE表型相关。结论 为保障输血安全，经常规血型血清学检测的RhD阴性样本需进一步进行IAT和吸收放散试验检测是否为弱D及Del。

临床输血前常规检查Rh(E)血型必要性研究

目的:检测Rh(E)血型人群中分布趋势,探讨Rh血型不完全抗体的产生几率以及常规检查Rh(E)血型对临床输血的必要性。方法:采用盐水法、凝聚胺法、微柱凝胶法检测并确认Rh(E)血型以及不完全抗体。结果:5891例健康者和4075例受血者E抗原阴性率分别为62.5%和53.7%。而不完全抗体检出42例,占总检测数的0.421%,抗-E检出24例,占总检测数的0.241%,占检出的不完全抗体的57.1%。结论:输血前对受血者和献血者进行Rh(E)血型常规检查,可以在一定程度上防止和减少受血者抗-E的产生,有利于减少患者输血不良反应和风险,保证输血的安全性。

IgG抗-E致Rh系统新生儿溶血病分析

目的:了解IgG抗-E与新生儿溶血病的关系。方法:采用盐水法检测患儿及其父母Rh血型,用新生儿溶血病血型血清学检查检测新生儿Rh溶血病,用Rh抗原谱细胞鉴定孕妇血清、患儿血清和红细胞抗体释放液中的Rh系统抗体。结果:通过母婴血清学检查结果分析,检出4例IgG抗-E。结论:抗-E致Rh新生儿溶血病一经证实,可及时为患儿选择E抗原阴性的ABO与患儿同型、Rh血型同母亲的血液为患儿进行换血和综合治疗,其疗效显著。

红细胞直接抗球蛋白试验阳性Rh血型鉴定方法

目的探讨新生儿溶血病患儿红细胞上致敏抗体对Rh血型检测的影响,建立一种简单、可行、准确的新生儿溶血病患儿Rh血型鉴定方法。方法选用抗球蛋白法、凝聚胺法、盐水法、微柱凝胶法以及抗血清微柱凝胶法对156例新生儿溶血病患儿红细胞进行Rh血型鉴定,并对患儿致敏红细胞用45℃红细胞抗体放散后再检测Rh血型。结果 107例直接抗球蛋白试验阴性患儿中,101例5种方法结果一致,6例结果不一致;49例直接抗球蛋白试验阳性的患儿中有31例结果不一致。37例Rh血型测定结果不一致的标本经45℃抗体放散后测定,结果一致。对10例新生儿溶血病患儿Rh血型的准确性进行验证,其红细胞放散后测定的Rh血型完全符合临床现象。结论 45℃抗体放散后再鉴定血型是一种简单可行的正确鉴定新生儿溶血病患儿Rh血型的方法。