青海湖裸鲤Rh基因家族的全基因组分析及其碳酸盐碱胁迫响应

为探究Rh(Rhesus)基因家族在青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)高碱适应中的作用,研究基于青海湖裸鲤基因组数据对Rh基因家族进行了生物信息学分析,并开展碱胁迫和基因表达检测。结果显示,青海湖裸鲤Rh基因家族由7个成员组成,编码425—562个氨基酸不等。Motif、Domain及基因结构分析结果均表明该家族成员具有较高的保守性,但基因结构差异较大。染色体定位分析结果显示,Rh基因家族成员分布在7条染色体上(Chr 37、29、46、13、14、15和26),所有基因产物均为疏水性稳定蛋白,除Rhd产物外其余6个基因的产物均为酸性蛋白,其中α-螺旋是主要的二级结构,亚细胞定位预测结果显示,Rh基因产物全部位于细胞膜中。选择压力分析结果显示Rhbg和Rhcg2a受到正选择作用。在碳酸盐碱度胁迫下,青海湖裸鲤血氨浓度逐渐升高,胁迫48h后开始下降。基因表达研究表明,青海湖裸鲤鳃、皮肤、肾脏和肝脏组织中,Rhag、Rhbg、Rhcg1、Rhcg2a和Rh50的表达量呈现先上升后下降趋势;在血液组织中,Rhag、Rhbg、Rhcg2a和Rh50的表达量逐渐降低,Rhd的表达量呈现先上升后下降趋势。Rhbg和Rhcg2a可能是青海湖裸鲤氨氮代谢中发挥作用的关键基因,同时Rhag、Rhcg1、Rhcg2b和Rh50也发挥着一定的作用。就组织器官而言,鳃在青海湖裸鲤排氨中发挥主要作用,皮肤、肾脏和肝脏的作用次之。研究揭示了青海湖裸鲤Rh基因家族成员在氨氮代谢中的作用,为青海湖裸鲤资源保护提供了科学依据。

Rh基因结构之谜

在目前正式命名的２３个人类红细胞血型中，最复杂的当属Ｒｈ血型。不仅因为它含有４０余种变异体，而且对其认识充满争议。虽然Ｒｈ基因已被克隆，但人们似乎还远未揭开它的神秘面纱。１９３９年Ｌｅｖｉｎｅ等人在一名ＡＢＯ同型输血而产生溶血性输血反应的产妇中，发现...

RH基因非编码区多态性研究进展

1940年Levine和Stetson发现了Rh血型系统，临床研究证明该系统抗原抗体不匹配能引起溶血性输血反应、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血等疾病，其临床重要性仅次于ABO血型系统。1990年RHD基因和RHCE基因cD—NA被克隆后，从基因结构与功能方面探索Rh血型系统的研究进展迅速。

基于三代测序技术的RHD、RHCE基因mRNA研究

目的建立基于Nanopore的RH基因mRNA三代测序方法,探讨D阳性和D^(el)表型中RHD、RHCE基因mRNA转录本的种类和表达水平差异。方法选取2021年3月~2022年5月成都市各医院送检至本实验室的经RhD血清学初筛及确证试验阴性的RhD阳性标本5例、D^(el)型标本5例。分离有核红细胞和白膜层,提取DNA和RNA,采用PCR-SSP对RhD阳性、D^(el)型基因分型,mRNA逆转录为cDNA后,采用1对引物同时对RHD、RHCE基因的全长mRNA扩增。分别采用Sanger测序和基于纳米孔的三代测序技术对扩增产物进行测序,并对RHD、RHCE基因mRNA转录本的不同剪接体种类和表达量进行分析。结果本研究建立的方法可同时扩增出RHD和RHCE的全长转录本,在10例标本中检测到了10种不同RHD基因mRNA转录本、9种RHCE基因mRNA转录本。D^(el)型中可检测到RHD的全长转录本(RHD-201),但表达量显著低于RhD阳性标本,D^(el)标本中转录本RHD-207(D^(el)789)表达量显著高于RhD阳性标本,转录本RHD-208(D^(el)8910+213)仅在D^(el)型个体中检出,其他RHD转录本以及所有RHCE转录本在2种个体中未发现显著差异。结论本研究成功建立了RHD、RHCE基因mRNA三代测序全长转录本异构体的分析方法,发现RHD、RHCE基因存在复杂的选择性剪接模式,为血型基因变异体mRNA选择性剪接研究提供了新方法。

洛阳献血者Rh抗原和基因多态性研究

目的通过观察随机选择的献血者人群Rh表型频率，从表型推测RHCE基因频率，从而估测Rh单倍型频率。分析RH基因的遗传学特征和抗原多态性，为Rh血型在中国临床输血医学和产科学的应用提供理论依据。方法统计2005年1月～2011年12月356071例捐献全血的献血者中的RHD阴性数据，随机选择10373例RHD阳性献血者检测RhCE血清学表型。利用哈德～伯格遗传平衡定律检测吻合度，用方根法计算Rh基因频率和单倍型频率，妒检验分析不同分类的差异。结果Rh血型基因和单倍型频率为D：0．9329、d：0．0671、DCe：0．6153、DeE：0．2704，Dce：0．0341、DCE：0．0132、dCe：0．0123、dCE：0．0006、dcE：0．0024、dee：0．0518，与中国汉族人在基因平衡条件下的差异无统计学意义（x^2=13．16，P〉0．05）。RHCE基因和单倍型频率在不同RhD表达类型中的分布差异有统计学意义（P〈0．05）。结论本研究准确估计了RH等位基因频率，证实了估测的单倍型频率的可靠性，血清学检测中携带RhC和／或RhE抗原的表型与不同表达的RhD类型有关。该结果可以代表中国汉族人的Rh抗原和基因多态性特点。需要制定标准的弱D定型方法和合理的输血策略，以避免抗球蛋白试验对弱D抗原的漏检。

河南省部分RhD(-)献血者RHD基因对C基因表达影响的观察

目的 :探讨本地区RhD(-)献血者RHD基因与C基因之间的相互影响。方法 :用常规血清学方法进行表型检测 ,用PCR SSP方法进行RHD基因和C基因分子生物学检测。结果 :RHD基因全存在表型为ccdee的为 0 ,D基因全缺失ccdee为 43 (5 3 8% ) ,CCdee为 0。结论 :RhD(-)

新疆汉族与维吾尔族Rh阴性D基因多态性的初步研究及比较

目的探讨比较新疆汉族与维吾尔族Rh阴性D基因多态性的特征及分布特点。方法选取2013年10月至2015年10月222例维吾尔族Rh阴性血液供者(来院患者和献血员)和90例汉族Rh阴性血液供者(来院患者和献血员)进行D基因多态性分析,分别作为汉族组和维吾尔族组,Rh血型采用血清学盐水介质法测定,RhD阴性个体检测Rh血型血清学表型,采用PCR-SSP方法分析Rh阴性D基因分型。对两组研究对象的血清学表型、D基因型分布频率。结果两组研究对象的Rh血型血清学表型(CCEE和CCee)的分布频率之间没有显著差异(P>0.05);汉族组的Rh血型血清学表型的CcEe、Ccee、ccEE的分布频率明显高于维吾尔族组(P<0.05);汉族组的Rh血型血清学表型的ccEe、ccee的分布频率明显高于维吾尔族组(P<0.05);汉族组的Rh阴性D基因分型中,DEL、弱D15、RhD-CE(2-9)-D、DVI Ⅲ、DVa(hus)分布频率明显高于维吾尔族组(P<0.05);维吾尔族组的d/d分布频率明显高于汉族组(P<0.05)。结论汉族和维吾尔族Rh血型血清学表型和Rh阴性D基因分型存在一定的差异,可以区分汉族和维吾尔族之间Rh血型分布。

单倍型dce中RHCE*ce等位基因变异致e抗原减弱1例的分子生物学研究

目的探讨1例RhD(-)女性先证者的RH基因型及其分子生物学机制。方法选取2019年8月就诊于郑州大学第一附属医院的1例26岁女性先证者作为研究对象。采集先证者及其父母的外周血样,对其进行卡式法Rh表型检测。用PCR-基于序列法(PCR-sequence-based typing,PCR-SBT)和基因测序法检测先证者及其父母的RHD合子型和RH基因型。用生物信息学软件进行Rh蛋白同源建模,并通过分子动力学模拟变异所造成的蛋白结构改变。本研究通过郑州大学第一附属医院医学伦理委员会的审查(伦理号:2023-KY-0870-003)。结果血清学检测显示先证者及其父亲Rh分型e抗原减弱。PCR-SBT及基因测序显示3人的基因型分别为dce/dCE、dce/DcE、dCE/DcE,先证者RHD和RHCE的基因型分别为RHD*01N.01/RHD*01N.16、RHCE*01.01/RHCE*04。蛋白模拟和分子动力学分析显示RHCE*ce(c.48G>C)所导致的ce_16C变异将造成膜内外环结构的改变,主要影响膜外第2、6环和膜内第3、4的摆动性。结论RHCE*ce等位基因的c.48G>C变异可能是导致先证者e抗原减弱的原因。

高碱环境下青海湖裸鲤氮废物排泄及相关基因的表达规律

采用个体生理学及定量PCR方法,研究了青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)在32 mmol/L(CA32)和64 mmol/L(CA64)碳酸盐碱度胁迫下氮废物排泄规律及鳃和肾组织中Rhesus type b glycoproteins(Rhbg)、Rhesus type c2 glycoproteins(Rhcg2)与urea transporter(Ut)基因的表达规律。结果显示,在32 mmol/L碱度胁迫整个过程中及64 mmol/L碱度胁迫初期裸鲤氨氮排泄率显著降低,但在64 mmol/L碱度胁迫8~20 h、24~72 h时氨氮排泄率基本恢复到胁迫前水平,在32 mmol/L碱度胁迫12~16 h、20~24 h及64 mmol/L碱度胁迫16~48 h时尿素氮排泄率显著升高。定量PCR结果显示,Rhbg、Rhcg2、Ut基因在胁迫过程中都有表达上调趋势,其中32 mmol/L碱性环境下鳃组织中Rhbg基因在胁迫12 h时表达明显上调;64 mmol/L碱性环境下鳃组织中Rhcg2基因在胁迫6 h、48 h、72 h表达明显上调,Ut基因在胁迫6 h表达明显上调,肾组织中Rhcg2基因在胁迫6 h表达明显上调。以上结果表明,裸鲤在高碱环境下虽然前期氮废物排泄受到抑制,但后期会通过启动Rh基因高表达恢复氨氮排泄,同时启动Ut高表达来增加尿素氮排泄来进行氮废物排泄。这一特殊氮废物排泄策略有助于裸鲤更好地适应高碱性环境。

Rh血型主要抗原配合性输注的可行性研究及效果分析

目的:比较分析南京地区部分患者及献血员恒河猴(Rhesus,Rh)血型系统主要抗原表现型分布比例及基因频率,探求Rh血型系统主要抗原配合性输注的可行性方案,并评估其效果,为精准安全输血奠定基础。方法:微柱凝胶法检测2020年1月—2021年5月南京医科大学第一附属医院在院患者(93910例)及江苏省血液中心发往本院的献血员(32872例)共计126782例红细胞Rh血型系统D、C、c、E、e抗原,计算Rh抗原表型分布及基因频率,以卡方检验统计检测率的差异,以Hardy-Weinberg平衡定律评估Rh血型分布是否符合规律。输血信息管理系统分别记录并储存患者及献血员Rh血型结果,在交叉配血前选择Rh同型或相容献血员血袋进行配合试验。结果:93910例患者RhD抗原阳性率为99.5%(93453/93910)。126782例Rh血型共检出15种表型,主要表型分布:DCCee比例为42.274%(53596/126782)、DCcEe比例为35.705%(45267/126782)、DCcee比例为9.010%(11423/126782)、DccEE比例为7.562%(9587/126782)、DccEe比例为3.813%(4834/126782),检出较罕见表型DCCEE共7例。本研究检出Rh表型分布符合Hardy-Weinberg定律。D抗原频率为99.57%,C抗原频率为88.03%,c抗原频率为57.06%,E抗原频率为48.00%,e抗原频率为92.18%;D基因频率为93.48%,C基因频率为65.48%,c基因频率为34.52%,E基因频率为27.90%,e基因频率为72.09%。单倍体DCe频率最高,为0.6369;其次为DcE,频率为0.2724。患者与献血员主要Rh表型及基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。经过27889例次Rh配合性输注,同时期Rh血型系统抗体占全部抗体的阳性率由48.53%(198/408)下降至30.25%(108/357)(P<0.05)。结论:患者与献血员Rh表现型及基因频率无差异,患者ABO同型基础上常规进行Rh配合性输注具备可行性;Rh配合性输注可以明显降低不规则抗体阳性发生率,提高输血效果。

人类Rh血型系统的分子生物学研究进展

人类Ｒｈ血型系统自１９３９年被发现以来，因导致新生儿溶血病（ＨＤＮ）、溶血性输血反应而成为红细胞血型中仅次于ＡＢＯ的系统，其中ＲｈＤ抗原因具有高免疫原性而最具临床意义［１］。主要的Ｒｈ抗原有ＲｈＤ和ＲｈＣＥ，ＲｈＣＥ为对偶抗原，有可供选择的等位基因产...

Rh血型系统的分子生物学研究进展

Rh血型是极复杂的人类红细胞血型系统之一,至少包括45种独立的血型抗原。过去的10年间,Rh血型的研究取得了极大的进展,得到了大量分子生物学的研究资料,如Rh血型的遗传方式、RH基因及其进化过程、Rh复合体的结构与功能、红细胞外Rh相似蛋白的表达,Rh基因分型技术也进一步得到发展与改进。本文综述了Rh血型分子生物学的研究进展,以服务于法医学实践。

Rh血型系统研究进展

Rh血型系统是最具多态性的红细胞血型系统,在临床输血、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血中具有重要意义。本文就RH基因结构、RH等位基因、Rh蛋白功能及Rh血型基因分型等近年来的研究进展简要综述。

贵州水族Rh血型分布

目的:了解贵州水族中Rh血型分布及基因频率,给水族Rh溶血症防治提供科学依据。方法:抽取贵州水族封闭群体、汉族对照组中的无关个体进行Rh血型鉴定和分析,推算Rh基因频率。结果:共筛查水族3190人,汉族对照4851人。发现水族Rh(D)阴性个体3名,汉族Rh(D)阴性个体16名;水族d基因频率0.0307、Rh(D)阴性率为0.09%,汉族(对照组)d基因频率0.0574、Rh阴性率为0.33%。结论:水族Rh阴性比例低于汉族。因此,贵州水族中Rh新生儿溶血症发生率可能不高。