Rh-D-稀有血型免疫血清学分析及家系调查——附新生儿溶血病报告1例

目的对1例严重高胆红素血症新生儿及其家系成员进行免疫血清学检测,诊断新生儿溶血病。方法对患儿进行直接抗球蛋白试验,放散试验及游离试验;对患儿母亲进行抗体筛查及抗体鉴定;检测母系家系成员Rh表现型并绘制家系图。结果母亲为Rh-D-稀有血型,产生针对高频抗原的抗体引起患儿溶血。该家系中有6位-D-基因携带者。结论发现了1名Rh-D-稀有血型个体,诊断了1例由高频抗体导致的新生儿溶血病。

全自动血型仪性能优化方案探索及献血者结果分析

目的 探索更科学、有效的血型检测设备性能验证方法,对使用年限较长、维修过的甲设备进行性能验证并优化。方法 甲、乙(已确认)两台设备同时进行4 026份献血员样本的平行比对实验,并以试管法作为补充对照实验方法。根据实验结果的符合率评价甲设备的性能,并适当调整甲设备ABO、Rh(D)血型检测的部分参数。通过效价测定确保甲设备抗原抗体检测的凝集强度与乙设备相当,并使用优化后的实验参数进行再次平行比对实验。结果 两种设备总符合率99.80%,Rh(D)血型符合率100%,ABO血型符合率99.98%,经血型研究室确认,共检出3例亚型:甲设备弱抗体、弱抗原漏检各1例,乙设备漏检弱抗原1例。脂血溶血样本甲设备未检出1例,乙设备未检出6例。甲设备、乙设备、试管法的抗-A、抗-B效价分别为8、32、128,抗-D效价分别为2、8、64。通过调整设备参数提高凝集效价。相关实验参数优化后,400份献血员标本比对总符合率为100%。结论 采供血机构关键设备维修后的性能验证是实验室质量管理体系的一部分。性能比对实验及多参数的优化提高了甲设备抗原/抗体的检测能力。

孕产妇Rh表型分布特征及相容性输血的可行性探讨

目的:分析重庆地区孕产妇Rh表型分布特征,探讨Rh表型在孕产妇中的临床意义及实行Rh表型相容性输血的可行性。方法:采用微柱凝胶法对65161例孕产妇进行ABO血型和Rh表型检测,以同期48122例男性为对照,通过χ^(2)检验对数据进行比较分析。结果:113283例样本中,RhD+112870例(99.64%),以CCDee(48.39%)和Cc DEe(32.88%)为主要表型,并检出重庆地区首例Rh缺失型D--表型;Rh D-413例(0.36%),以ccdee(52.78%)和Ccdee(33.41%)为主要表型;RhD+组与Rh D-组的Rh表型分布差异有统计学意义(P<0.01)。在65161例孕产妇中,Rh5种抗原的阳性率由高到低为D>e>C>c>E,与男性相比差异无统计学意义(P>0.05);孕产妇Rh表型分布与男性相比差异无统计学意义(P>0.05);不同ABO血型的孕产妇间Rh表型分布差异无统计学意义(P>0.05)。在孕产妇中,正常妊娠人群、有不良流产史人群、采用人类辅助生殖技术人群和不孕症患者人群间Rh表型分布无明显差异(P>0.05),4个孕产妇人群与本地区综合性三甲医院住院患者和献血者相比,Rh表型分布差异无统计学意义(P>0.05)。RhD阳性孕产妇中,CcDEe表型找到相容性血液的概率为100%,CCDee、CcDee和CCDEe表型找到相容血液的概率为45%-60%,ccDEE、ccDEe、CcDEE表型找到相容血液的概率为5%-10%,其余表型的相容概率均低于0.5%;提供CCDee和ccDEE两个表型的血液即可满足99%以上患者7种Rh表型相容性输血需求。结论:应对孕产妇进行Rh表型检测,对需要输血的孕产妇推行Rh表型相同或相容性输血是切实可行的输血举措。

芜湖地区初筛RhD阴性献血人群RHD基因分型特征

目的:了解芜湖地区献血者初筛RhD^(-)汉族人群的RHD基因分型的分子机制及分布特征。方法:收集2021年8月-2022年8月芜湖市中心血站无偿献血人群初筛RhD^(-)样本共210例,对样本的RHD基因第1、10号外显子进行PCR扩增,确定样本是否存在RHD基因。对含有D基因的82例样本RHD基因1-10号外显子进行PCR扩增及合子型分析,对55例含全部RHD外显子样本进行Sanger测序以确定基因型。结果:在210例RhD^(-)标本中,128例(60.38%)为RHD基因缺失;27例存在部分RHD外显子,包括2例RHD*DVI.3/RHD*01N.01,24例RHD*01N.04/RHD*01N.01和1例RHD-CE(2-10)/RHD*01N.01;55例含有全部RHD外显子,包括4例RHD*01/RHD*01N.01,6例RHD*15/RHD*01N.01,1例RHD*01 W.72/RHD*01N.01,1例RHD*15/RHD*01EL.01,39例RHD*01EL.01/RHD*01N.01,余下4例样本根据合子型分析确定不存在RHD基因缺失、测序显示存在1227G>A突变。结论:芜湖地区献血人群RhD^(-)D基因的分子机制存在多态性,其中RHD*01EL.01和RHD*15为本地区主要D变异型,本研究结果为本地区RhD血型鉴定和临床输血提供理论基础。

一例部分D血型表型及基因型鉴定分析

目的分析RhD变异体的血清学特征并进行RhD基因检测。方法采用微柱凝胶法对2023年平邑县人民医院收治的一例RhD变异体患者血型进行血清学分析,采用SSP-PCR法进行RhD基因型检测,对患者血液标本的基因组DNA进行全外显子测序(WES)确定与其表型相关的突变,同时采用Sanger测序验证变异位点。结果患者血清学结果显示为D变异型,RhD基因测序结果显示外显子1,3-7,9有突变。结论外显子1,3-7,9有突变,该患者样本基因与RHD*01.01和RHD*01N.04相符,基因型为D+/D-型,表型为部分D型。应对D变异体进行分型研究,从而采取合理的输血策略。

抗-Hr0致严重新生儿溶血病1例

Rh-D-是一种非常罕见的Rh表现型,日本学者调查发现Rh-D-表现型的频率约为8.2/1000000^([1])。该表型的女性常因妊娠或输血而产生抗-Hr0。抗-Hr0可以导致严重的新生儿溶血病(HDN),且属于高频抗原抗体,常常使患儿无法找到交叉配血相合的血液,给患儿的输血治疗带来困难。本院接诊了1例严重HDN患儿,因母亲为Rh-D-血型产生抗-Hr0所致。本院对患儿和患儿母亲做了一系列血型血清学检测.

基于三代测序技术的RHD、RHCE基因mRNA研究

目的建立基于Nanopore的RH基因mRNA三代测序方法,探讨D阳性和D^(el)表型中RHD、RHCE基因mRNA转录本的种类和表达水平差异。方法选取2021年3月~2022年5月成都市各医院送检至本实验室的经RhD血清学初筛及确证试验阴性的RhD阳性标本5例、D^(el)型标本5例。分离有核红细胞和白膜层,提取DNA和RNA,采用PCR-SSP对RhD阳性、D^(el)型基因分型,mRNA逆转录为cDNA后,采用1对引物同时对RHD、RHCE基因的全长mRNA扩增。分别采用Sanger测序和基于纳米孔的三代测序技术对扩增产物进行测序,并对RHD、RHCE基因mRNA转录本的不同剪接体种类和表达量进行分析。结果本研究建立的方法可同时扩增出RHD和RHCE的全长转录本,在10例标本中检测到了10种不同RHD基因mRNA转录本、9种RHCE基因mRNA转录本。D^(el)型中可检测到RHD的全长转录本(RHD-201),但表达量显著低于RhD阳性标本,D^(el)标本中转录本RHD-207(D^(el)789)表达量显著高于RhD阳性标本,转录本RHD-208(D^(el)8910+213)仅在D^(el)型个体中检出,其他RHD转录本以及所有RHCE转录本在2种个体中未发现显著差异。结论本研究成功建立了RHD、RHCE基因mRNA三代测序全长转录本异构体的分析方法,发现RHD、RHCE基因存在复杂的选择性剪接模式,为血型基因变异体mRNA选择性剪接研究提供了新方法。

储存式自体输血在Rh(D)阴性血型产妇输血中的应用效果及安全性

目的探讨在Rh(D)阴性血型产妇输血中储存式自体输血应用效果以及安全性。方法选取2019年6月至2021年6月本院收治的90例Rh(D)阴性血型产妇作为研究对象,均采用储存式自体输血方式进行输血治疗干预,比较不同时间段血液学指标[血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、血小板(PLT)及红细胞压积(HCT)]变化。结果采血前、采血后24 h及回输血后,产妇Hb、RBC、PLT、HCT水平比较差异无统计学意义;所有产妇在采血过程中,均未呈现出手脚冰凉、面色苍白以及全身虚汗等表现;胎心监护未发现异常情况;所有新生儿Apgar评分8~10分,均在正常范围。结论合理采用储存式自体输血方式进行干预,可避免针对Rh(D)阴性血型产妇在实施手术过程中,呈现出血源紧张情况,安全性较高,值得临床推广应用。

RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL型红细胞短期内引起高效价抗-D的同种免疫研究

目的通过对1例RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞后诱发同种抗-D免疫的研究分析,探讨RhD阴性患者输注DEL型策略。方法采用血清学方法进行ABO及Rh系统血型抗原检测、不规则抗体筛查及鉴定,高分辨熔解曲线和基因测序分析检测DEL型的RHD基因分型。结果受血者为O型,RhD阴性。供血者为RHD 1227G>A突变的“亚洲型”DEL,Rh表型为Ccee。受血者输血后抗体筛查阳性,并鉴定为抗D和抗C,抗D效价512,抗C效价128。结论RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞会引起抗-D同种免疫。因此对于RhD阴性献血者应加强DEL型的筛查,必要时可以增加RHD基因检测以保障输血安全。

国产SA-120自动血型分析仪在血型鉴定中的应用价值

目的 评价国产SA-120自动血型分析仪在ABO及Rh(D)血型鉴定中的临床应用价值。方法 采用国产SA-120自动血型仪及进口Ortho Vision Max自动血型分析仪分别对我院2022年4月至2022年9月间住院患者5 862例血型样本进行ABO及Rh(D)血型鉴定。比对两种仪器检测结果的一致性,对仪器判读失败的原因进行分析,并进行仪器性能及配套试剂间的比较。结果 两种血型仪检测ABO及Rh(D)血型结果的一次判读成功率差异无统计学意义(P>0.05);两种血型仪在使用上各具优势。结论 SA-120自动血型仪能够准确有效地进行ABO及Rh(D)血型鉴定,特别适用于大批量样本的检测,但对于判读失败的结果仍应结合试管法进行鉴定。

RhD--表型引起的胎儿新生儿溶血病的免疫学分析--附1例报道

目的分析1例胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)产生的原因,初步探讨产妇Rh缺失型D--形成的遗传背景。方法使用血清学方法对患儿及其母亲进行ABO血型、Rh分型,血液抗体细胞,谱细胞分析,探讨导致胎儿溶血的抗体以及Rh缺失型D--的血型血清学特点,对产妇进行RH基因序列分析。结果患儿母亲血型为O型,血清学试验结果显示Rh缺失型D--,怀疑为多次妊娠产生针对Rh高频抗原的抗-Hr0,抗体通过胎盘屏障,使患儿获得针对Rh高频抗原的抗-Hr0,导致HDFN,基因检测结果为RHCE^(*)Ce/RHCE^(*)Ce。结论对产妇开展Rh缺失型D--的形成机制进行深入研究,为HDFN换血治疗提供临床价值,也为特殊血型人群输血提供临床依据。

汉族DEL型孕妇可免去抗-D产前检查

目的鉴于占我国汉族Rh(D)阴性人群约25%的DEL型红细胞具有基本完整的D抗原表位,临床观察汉族DEL型孕妇妊娠Rh(D)阳性胎儿是否产生同种免疫反应。方法跟踪观察和测定207名有妊娠史的Rh(D)阴性孕妇产前和产后血清抗-D,根据RhCcEe表型和PCR检测RHD1227A等位基因鉴别DEL型和真实Rh(D)阴性表型。结果 207名Rh(D)阴性孕妇中,DEL型个体46名(22.2%)均未检测到血清抗-D,即使5名个体有2次或以上生育史,亦未见同种免疫反应。161名真实Rh(D)阴性个体中检出40例抗-D阳性(24.8%);80名有生育史的真实Rh(D)阴性孕妇中30例抗-D阳性(37.5%);20名有2次或以上生育史的真实Rh(D)阴性孕妇中12例存在抗-D(60.0%)。结论 DEL型孕妇妊娠Rh(D)阳性胎儿发生抗-D同种免疫反应的可能很小,我国Rh(D)汉族阴性孕妇中的DEL个体可免去定期的产前抗-D检测,以及免去预防性Rh免疫球蛋白的使用。

孕妇及胎儿Rh(D/E)免疫性溶血病的诊断与血液治疗

目的:探讨孕妇及胎儿Rh(D/E)血型不合的免疫性溶血病的治疗,预防孕妇早孕自然流产或不足月死胎。方法:用大量去除血浆和换血疗法对孕妇及胎儿或新生儿Rh(D/E)血型不合者进行治疗,以降低IgG抗D/E的含量,提高胎儿或新生儿的成活率。结果:2例孕妇及胎儿Rh(D)血型不合者去除血浆前IgG抗-D分别为512和1024,去除血浆3周后,IgG抗-D效价降至16和32,以后间断性的治疗,减少治疗频率,保持IgG抗-D≤64,置足月行剖宫术,产下正常男、女婴儿各1名;1例Rh(E)血型不合者未经治疗而胎死宫内;另1例Rh(D)新生儿溶血病(HDN)经换血治疗而得救。1年后随访,3例婴儿发育均良好,与正常婴儿无差异。结论:大量去除血浆,同时补充高蛋白饮食是治疗孕妇及胎儿RhD/E血型不合的免疫性溶血病的好方法,换血疗法是HDN治疗的最佳选择。

北京地区RhD阴性献血人群Rh血型研究

目的研究北京地区RhD阴性献血人群中Rh表型的分布情况及不同表型与D变异型的相关性。方法用间接抗球方法(IAT)确认检验科初筛RHD阴性个体的Rh(D)血型,用血型分型卡确定Rh系统表型。结果 3795例初筛阴性标本中ccee 2139例(56.36%)、Ccee 1045例(27.54%)、ccEe 334例(8.80%)、CCee 157例(4.14%)、Cc Ee 106例(2.79%)、ccEE 12例(0.32%)、CCEe 2例(0.05%);其中D变异型144例,各表型D变异型例数及占各自总数的比例为ccee 6例(0.28%)、Ccee 21例(2.01%)、ccEe 92例(27.54%)、CCee 14例(8.91%)、Cc Ee 9例(8.49%)、ccEE 2例(16.67%),CCEe 0例。结论北京市RhD阴性献血者以ccee为主,含有E抗原的初筛Rh阴性个体为D变异型的可能性高于其他表型的个体。

流式细胞术非侵入性检测胎儿血型的研究

目的 建立流式细胞术非侵入性检测胎儿ABO、Rh(D)血型的实验方法。方法 采用吸收放散试验 ,从人源血清中获得IgG抗 A、抗 B试剂。依据胎儿父母的血型 ,选择IgG的抗 A、抗 B和抗 D作一抗与孕妇外周血红细胞反应 ,以羊抗人IgGF(ab′) 2 FITC作二抗连接A、B、D抗体 ,同时用抗 i PE标记孕妇外周血中的胎儿红细胞。依据所获荧光标记 (FITC和PE)的孕妇和胎儿细胞的散点图格局 ,分析胎儿细胞的ABO和Rh血型。结果 应用所研究的流式细胞检测技术 ,对 6 9名妊娠 8～ 39周的孕妇检测 ,13名孕妇外周血中因未检出胎儿红细胞而无法鉴定 ,其余 5 6名孕妇均检出胎儿细胞 ,她们的胎儿血型产前检测结果与胎儿出生后的检测结果完全吻合。结论 流式细胞术方法能在产前准确和无损伤地检测胎儿血型 。

1名RhD弱表现型个体携带D^(el)等位基因

目的 探讨 1名RhD弱表现型个体的RH基因型及RHD基因的分子机制。方法 采用常规血清学方法检测RhD、C、c、E和e抗原表型 ,间接抗球蛋白试验确认D抗原 ,用序列特异性引物 聚合酶链反应 (PCR SSP)测定RHD/RHCE基因 ,然后分析RHD编码区全长序列 ,并用PCR检测RhD杂合型。结果 血清学结果显示该个例为D抗原弱表现型 ,Rh因子为D +C +c +E e +,PCR SSP检测RHD/RHCE基因与之相符 ;RHD编码区序列析发现第 9外显子存在 1 2 2 7G→A碱基突变 ,其余外显子序列则与正常RHD基因一致 ,表明该个体携带RHD1 2 2 7A等位基因。RhD合子型鉴定结果为RHD +/RHD -杂合型 ,拟定RHCE和RHD为cis遗传 ,提示该个体基因型为CDe/cde。结论 该RhD弱表现型个体携带RHD 1 2 2 7A等位基因 ,而这一等位基因是Del表型的主要等位基因 。

Rh(D)阴性患者紧急抢救输血中应用“配合型输血”的回顾性分析

目的：回顾性分析Rh（D）阴性患者特殊情况紧急抢救输血应用“配合型输血”的病例资料，探讨应用配合型输血的安全性和有效性。方法对新疆阿克苏地区2014年1月-2015年12月Rh（D）阴性患者特殊情况紧急抢救输血6例应用“配合型输血”（病例组）及6例应用同型输血（对照组）的基本资料、红细胞抗体筛查、胆红素、血红蛋白（Hb）、网织红细胞计数（Ret）、红细胞比容（Hct）及住院天数（d）等进行统计分析，探讨配合型输血安全性与有效性。结果病例组与对照组输血后72 h红细胞抗体筛查阴性均未产生抗-D、输血后24 h Hb实际升高值分别为（28.53±10.09）g/L和（21.24±3.13）g/L、无非传染性输血并发症发生，病例组与对照组输血前后各指标的差异无统计学意义。结论 Rh（D）阴性患者特殊情况紧急抢救输血应用“配合型输血”是一种安全有效的临床输血治疗途径，同时对输注Rh（D）阳性红细胞的患者也应建立的规范的追踪、随访及评价体系。

不同检测方法用于Rh(D)阴性确认检测比较

目的采用盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法4种检测方法用于Rh(D)阴性确认检测的比较及应用效果分析.方法选取2012年1月至2013年12月期间云南省第一人民医院输血科Rh(D)血型鉴定中初筛结果为阴性的标本96例,同时选用4种方法学进行Rh(D)阴性确认和分型实验.结果盐水法检测发现96例为Rh(D)确认阴性结果;凝聚胺法检测发现84例为Rh(D)确认阴性结果;抗人球蛋白法检测发现82例为Rh(D)确认阴性结果;微柱凝胶法检测发现81例为Rh(D)确认阴性结果.结论盐水法检测操作简单,但特异性差.凝聚胺法快速、简便,但会漏检抗体效价较弱的Ig G抗体;抗人球蛋白法操作复杂,但灵敏度高、特异性好;微柱凝胶法对检测血清中的Ig G抗体具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点,但成本较高.在实际工作中,多种方法的联合应用更能保证结果的准确性.

Rh(D)阴性献血者不规则抗体检测的结果分析

目的分析Rh(D)阴性献血者不规则抗体检测的结果,探讨在献血者血液Rh(D)阴性确认试验时,进行不规则抗体检测的必要性。方法用间接抗人球蛋白法进行Rh(D)阴性确认试验及抗体筛选试验、抗体鉴定试验,盐水法进行Rh表现型的检测。结果 1205份Rh(D)阴性献血员标本中,抗体筛选试验阳性的标本有20份,经过抗体鉴定,其中抗-D 10份,抗-M 6份,非特异性抗体2份,抗-Lea1份,冷自身抗体1份。结论 Rh(D)阴性献血者抗体筛选阳性率高达1.66%,较以往报道的正常人群抗体筛选阳性率高。在临床供血上,其高检出率对临床用血安全有较为重要的意义,对Rh(D)阴性献血者更应该进行不规则抗体检测。

广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析

目的分析广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征。方法收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序。结果发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960G>A(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致。结论首次在广州地区人群中发现了RHD*960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D。