2例罕见RhD变异型RHD*DEL37的分子生物学分析

Rh血型系统是输血医学中重要的常规检测血型系统,因RhD血型不合引起的溶血性输血反应及新生儿溶血病一直以来倍受临床重视。本研究报道了2例罕见的RHD基因变异型RHD*DEL37个体的血清学和基因特征,这2例个体的血液样本经血清学方法(试管法和微柱凝胶法)鉴定为RhD阴性。采用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific prime,PCR-SSP)对样本进行RHD基因分型和合子型分析,基因分型结果为RHD基因阳性,并排除了常见的几种RHD基因变异体的可能。RHD基因合子型检测阳性,证明其中一条RHD等位基因1~10外显子全部缺失。进一步对样本RHD基因1~10外显子基因进行Sanger法测序,测序结果显示在另一条等位基因第8内含子上的第1154-31号碱基发生了T>C突变,国际输血协会(International Society of Blood Transfusion,ISBT)将该突变等位基因命名为RHD*DEL37,表型为RhD放散型(D-elute,Del)。本研究中,2例血清学初筛RhD阴性的样本通过分子生物学检测,其基因型为RHD*DEL37/RHD-(RHD*01N.01)。由于这2例个体无血缘关系,提示我国可能存在携带该基因突变的人群。本研究提示分子生物学方法可辅助鉴别血清学初筛为阴性的RhD变异体样本,联用分子生物学方法和血清学方法在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面有重要意义。

陕西汉族初筛RhD阴性孕妇中D基因多态性研究

【目的】探讨陕西汉族初筛RhD阴性孕妇中D基因多态性。【方法】选择2018年1月至2020年3月在本院定期产检的54例陕西汉族初筛RhD阴性孕妇。采用微柱凝胶卡检测RhD血型,采用抗人球蛋白凝胶卡法进行间接抗球蛋白试验(IAT),采用Rh分型卡鉴定RhCE抗原分型,采用吸收放射试验检测Del血型,采用序列特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)鉴定标本的Del血型基因型,采用D-Screen试剂的反应格局表鉴定部分DⅥ3型,针对10个RHD基因外显子的特异性引物进行PCR扩增并测序。【结果】54例初筛RhD阴性孕妇中,单克隆(IgG+IgM)抗D-抗体IAT试验检出3例阳性,经鉴定为D变异型;酸放散法检出阳性18例,除上述3例D变异型外,其余15例均为Del表型,36例D阴性标本。D变异型与Del表型均未产生抗-D,36例D阴性标本中2例产生抗-JKb合并抗-cE,7例产生抗-D(其中1例产生抗-C合并抗-D)。RhCE分型结果显示:D阴性血型以ccee为主,Del表型以Ccee为主,无ccEe与ccee。3例D变异型中,D-Screen检出2例部分DⅥ3型,剩余1例经RHD基因测序分析,结果显示为弱D15型,RHD基因存在c.845G>(p.Gly282Asp)纯合突变。PCR-SSP检出15例阳性,与酸放散法检出阳性的例数一致,15例Del表型均携带RHD*01EL.01。15例Del表型中,合子型D+/D+1例,且其基因型为RHD*01EL.01/01EL.01;合子型D+/D-14例,且其基因型均为RHD*01EL01/01N.01,占93.33%。【结论】54例陕西汉族初筛RhD阴性孕妇中D基因结构存在复杂的多态性,变异等位基因D阴性血型以ccee为主,Del表型以Ccee为主。

输血前患者不规则抗体分布情况及其临床意义

目的 探讨输血前患者不规则抗体的分布情况及其临床意义。方法 选取2018年6月至2021年5月山西省第二人民医院的1 500例输血患者,其中筛查不规则抗体阳性126例。比较不规则抗体的产生和分布及Rh五项对不规则抗体检出率的影响。结果 1 500例输血患者筛查出阳性患者126例(阳性率8.40%),特异性抗体血型系统中Rh最多(38.90%),其次是自身抗体(15.08%)、无特异性抗体(12.70%)。Rh五项分型结果中CCDee表型最多(18.25%,126/1500),其次为CcDEe(17.46%)、ccDEE(15.87%)、CcDee(13.49%)、CCDEe(8.73%)。结论 针对输血患者输血前进行不规则抗体检验,可预防输血过程中出现溶血等不良反应。

RhD变异型个体的表型类型和基因突变机制研究

目的:探讨RhD变异型个体的表型类型和基因突变机制。方法:收集2013年1月至2015年10月间经我中心用血清学方法确证的48例RhD变异型孕妇和献血者的血液标本,应用常规血清学方法进行Rh抗原分型后,提取血样DNA,用多重连接依赖探针扩增(multiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)对入选的48例受检者的RHD进行检测,分析RHD的杂合性和外显子突变情况,并将MLPA检测结果与常规血清学结果进行对比。对比结果不一致的标本进行RHD外显子全长测序,并对其中新发现的等位基因进行克隆测序。结果:48例标本中,CcDee 20例(41.7%)、ccDEe 12例(25%)、CCDee 11例(22.9%)、CcDEe 5例(10.4%)。MLPA检出RHD单条等位基因突变(即杂合性为Dvd型)的38例,其中包含点突变18例、RHD/CE杂交替换20例;涉及两条等位基因突变(即杂合性为DvDv型)的10例,其中包含点突变合并RHD/CE杂交替换9例、碱基缺失合并RHD/CE杂交替换1例。MLPA能够明确其RhD变异型别的有41例(85.4%,41/48),包括弱D15型(845A)等位基因14例、RhDⅥtype 3等位基因22例;7例通过测序分析得以明确。发现2例新的等位基因,分别为79-81del CTC、689G>A。结论:CcDee是RhD变异型人群的主要表型,弱D15和RhDⅥtype 3是受检人群的主要RhD变异型,点突变和RHD/CE的杂交替换是主要的分子机制,79-81del CTC和689G>A为本研究发现的2个新等位基因。

孕产妇Rh血型系统抗体检测和临床意义分析

目的探讨产妇Rh血型系统抗体的检出特点,分析其与新生儿溶血病之间的关系并制定临床输血应对策略。方法选取2016年10月至2018年6月中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)孕产妇红细胞不规则抗体筛选试验阳性的血标本,根据抗体的Ig类型应用抗球蛋白法或微柱凝胶抗球蛋白法,鉴定受检血清(血浆)与谱细胞及自身红细胞的反应结果;检测Rh血型抗体的效价、免疫球蛋白类型及37℃反应性以明确其临床意义;孕产妇受检红细胞D、C、E、c、e抗原采用单克隆抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e试剂鉴定其Rh血清学分型;新生儿标本进行溶血病三项试验,鉴定新生儿放散液的抗体与其母亲血清(血浆)中是否有相同,分析妊娠史、输血史与抗体产生的相关性。结果从4 680例住院孕产妇备血标本中共检出Rh血型抗体56例,检出率为1.20%,其中有妊娠史者48例,输血史者6例;Rh血型抗体的特异性为:抗-E 33例(58.92%)、抗-D 10例(17.86%)、抗-c 7例(12.50%)、抗-cE 5例(8.93%)、抗-C 1例(1.79%);血型抗体的免疫球蛋白类型主要为IgG或IgG+IgM类,间接抗球蛋白试验37℃下均可与相应抗原的红细胞凝集反应,抗体效价介于1~512;10例新生儿溶血病血清中抗体与其母亲相同。结论女性因妊娠或输血等免疫刺激是Rh血型抗体产生的主要原因,来自母体的Rh血型抗体可导致Rh-HDN,应增加孕产夫妇RhCE抗原常规检测并同型输血,可有效降低意外抗体的产生概率。

重庆地区献血者RhD阴性血型抗原分布调查

在我国汉族人群中RhD阴性血型所占比例仅为0．2％～0．5％，属于稀有血型，RhD阴性血型的分布因种族、地区的不同而有差异，了解本地区RhD阴性血型分布，掌握分布规律，有利于及时为临床提供合适的RhD阴性血液，重庆市血液中心自1998年以来对志愿无偿献血者开展了RhD抗原的筛查及鉴定工作，

Rh血型系统阴性血型筛查及其临床意义

目的筛查Rh血型系统Rh(D)、Rh(E)、Rh(C)阴性血型,为临床预防溶血性输血反应及新生儿溶血性疾病的发生提供实验依据。方法用微柱凝胶法对11 035例作ABO血型鉴定标本同时进行Rh血型系统Rh(D)、Rh(E)、Rh(C)阴性血型筛查。结果 Rh(D)抗原阴性23例,检出率为0.21%;Rh(E)抗原阴性5 275例,检出率为47.8%;Rh(C)抗原阴性839例,检出率为7.6%。结论将Rh血型系统Rh(D)、Rh(E)、Rh(C)纳入到血型的常规检验项目,对预防溶血性输血反应的发生、提高输血治疗的安全性,以及预防新生儿溶血性疾病的发生具有十分重要的临床意义。

Rh(D)阴性血型剖宫产术产妇输血方案探讨

目的探讨Rh(D)阴性血型剖宫产术产妇的输血方案。方法 Rh(D)阴性血型孕足月剖宫术产妇57名,分为5组:Ⅰ组(n=30)产妇术前Hb≥110 g/L,Hct≥33%,麻醉前实施稀释式自体输血。Ⅱ组(n=17)产妇术前Hb(100～110)g/L,Hct 30%～33%,麻醉前实施成分式自体输血。Ⅲ组(n=5)产妇术前Hb(80～100)g/L,Hct24%～30%,放弃常规备异体血。Ⅳ组(n=3)产妇术前Hb<80 g/L,Hct<24%,输血科保存备用红细胞制品2 U。Ⅴ组(n=2)为急诊手术,麻醉前无法实施自体输血且存在产科出血的高危因素(胎盘早剥和前置胎盘出血),术中发生大出血无法短时间内获得异体红细胞者,紧急情况下实施回收式自体输血。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组均未输注异体红细胞,Ⅳ组有2例输注2 U融化洗涤冰冻红细胞,Ⅴ组2例出血量在4 000 ml以上,分别回收自体浓缩红细胞270 ml和350 ml,同时输注了异体红细胞及其他血液成分。结论针对Rh(D)阴性血型剖宫产术产妇的不同情况,术前制定合理的输血方案,可以提高围术期安全性,并可有效节约血源。

抗-E及抗-Ec合并抗-Fyb致新生儿溶血症二例及文献复习

新生儿溶血病(HDN)在妊娠早期可引起流产、早产、胎儿水肿、胎儿宫内贫血甚至胎儿死亡;新生儿可出现黄疸、贫血、肝脾肿大、水肿、核黄疸后遗症等。本文回顾了抗-E及抗-Ec合并抗-Fyb致新生儿溶血症2例患者的诊疗经过,并复习了该病流行病学情况、诊断及治疗的相关文献资料,以提高对本病的认识。

探讨ABO、RhD血型调查与建立Rh表型库在安全输血中的临床意义

目的调查河北省邯郸市峰峰矿区ABO、RhD血型在人群中的分布情况,分析患者不规则抗体筛查结果,探讨ABO、Rh血型调查与建立Rh表型库在安全输血中的临床意义。方法收集我院8000例住院患者ABO血型及RhD血型的检测结果,对需输血的患者5000例进行不规则抗体检测,阳性结果标本进一步行抗体特异性鉴定。随机选取3000袋RhD阳性滤白红细胞悬液样本检测Rh表型,通过电脑建立献血者Rh表型数据库,探讨其在输血中的重要意义及价值。结果8000例患者中ABO血型分布情况从多到少依次为B型血(32.02%)、O型血(28.98%)、A型血(27.01%)、AB型血(11.99%)。不同年龄组间ABO血型分布情况差异有统计学意义(P<0.05),不同性别组中ABO血型分布情况差异无统计学意义(P>0.05)。8000例患者中RhD阴性48例(0.60%)。男性和女性Rh血型分布差异无统计学意义(P>0.05)。5000例需输血患者的血样标本中不规则抗体阳性者30例(0.60%),Rh血型系统抗体阳性19例(63.33%),抗-E检出率最高。不规则抗体的检出率女性显著高于男性,差异有统计学意义(P<0.05)。3000例RhD阳性献血者血样标本Rh血型表型共8种,其中CCDee检出率最多,其次为CcDEe,DcDEE和ccDee检出率较少。结论ABO血型的分布与地域及年龄有关;临床上除在患者输血前进行不规则抗体筛查,应进一步检测其抗体特异性;建立献血者Rh表型数据库有利于预防因Rh表型不符输血引起的溶血性输血反应,对于临床安全输血工作具有重大意义。

2例Rh阴性患者多次输注Rh阳性血小板均无抗D抗体产生的原因分析

目的探讨2例Rh阴性患者多次输注同型Rh阳性血小板均无抗D抗体产生的原因。方法收集2例Rh阴性血液病患者的临床资料,并在2例患者输入同型Rh阳性血小板后分别以微柱凝胶卡式反复进行抗体筛查。结果 2例Rh阴性标本抗体筛查均为阴性,表明2例患者均无抗D抗体产生。结论 Rh抗D抗体的产生与RhD基因结构、输入Rh阳性红细胞的数量及机体的免疫应答能力相关。

新生儿Rh溶血病8例临床分析

新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn,HDN）是一组由于母婴血型不合导致的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。由于Rh溶血病的后遗症和病死率远远高于ABO系统溶血病。故本研究对8例新生儿Rh溶血病进行回顾性分析,希望提供治疗经验,为降低该病的病死率,改善预后提供参考。

Rh阴性孕妇妊娠结局的Meta分析

目的:分析Rh阴性孕妇的妊娠结局。方法:计算机检索中国知网、维普、万方、PubMed和Embase数据库,搜集有关Rh阴性孕妇妊娠结局的相关研究,检索时间均为1980年1月1日—2018年1月30日。由2名研究者按照纳入与排除标准筛选文献、提取资料和评价纳入研究的质量,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入9篇文献,共4 122例研究对象,其中Rh阴性孕妇组679例,Rh阳性孕妇组3 443例。Meta分析结果显示,Rh阴性孕妇组新生儿高胆红素血症(RR=6.29,95%CI:3.64～10.85,P<0.000 01)和早产(RR=3.05,95%CI:1.80～5.15,P<0.000 1)的发生率均高于Rh阳性孕妇组。结论:Rh阴性孕妇发生新生儿高胆红素血症和早产的风险较高。因此,对Rh阴性孕妇要加强孕期监护,定期监测Rh抗体,以降低围生儿的各种并发症。

急性等容稀释性自体输血在Rh(D)阴性孕妇分娩中的应用

目的:探讨等容稀释性(ANH)自体输血在Rh(D)阴性孕妇分娩过程中的安全性。方法:选择2007年7月至2011年10月在孝感市中心医院产科住院的34例Rh(D)阴性孕妇为研究组,在分娩前采集自体血,同时补充晶体液和(或)胶体液,采集过程中监测孕妇生命体征及胎心,34例孕妇均于数小时内结束生产,生产后立即将自体血回输。对照组为同期住院生产的Rh(D)阳性孕妇28例,对照组未自体或异体输血。测定两组孕妇入院时及生产后2天血常规并进行对比。结果:两组孕妇生产前血常规各项指标无统计学差异,Rh(D)阴性孕妇分娩前和自体血回输后红细胞(RBC)、血红蛋白(HB)、红细胞压积(HCT)、血小板(PLT)的差异无统计学意义;Rh(D)阳性孕妇分娩后RBC、HB、HCT较分娩前显著下降(P<0.05)。34例Rh(D)阴性孕妇均未发生采血及回输血不良反应,新生儿5min Apgar评分均9～10分。结论:ANH自体输血能解决Rh(D)阴性血源稀缺难题,在应对Rh(D)阴性孕妇产后出血时发挥重要作用,对孕妇及胎儿均无不良影响,是一种安全、有效的输血方式。

抗-E、抗-c抗体致迟发性溶血性输血反应1例分析

目的 分析Rh血型系统中抗-E、抗-c抗体导致迟发性溶血性输血反应（DHTR）的原因和血型血清学的情况。方法 对1例输血患者，在输血前进行常规定型，发生DHTR后进行各项血液学、生化指标和血型血清学检查。结果 患者红细胞表面缺乏E、c抗原，血清中检出抗-E、抗-c抗体，血液学、生化指标的变化证实发生DTHR。结论 患者由于血型不合的妊娠为初次刺激，输注含回忆反应抗原（E抗原、c抗原）的红细胞，激发免疫应答产生不完全抗体，导致DHTR发生，提示有输血史及妊娠史的患者输血时，必须采用能检测出不完全抗体的酶、抗人球蛋白或更灵敏的方法配血，防止DHTR的发生。

OLYMPUS-PK7300全自动血型分析仪在血型筛查工作中的应用

目的了解OLYMPUS-PK7300全自动血型分析仪用于ABO和Rh(D)血型检测的效果。方法凝集法采用O-LYMPUS-PK7300全自动血型分析仪对血型进行检测。结果用仪器法和试管法同时做600例样本对比试验,两种检测方法结果符合率为100%;对本站2010年度58700例血样进行检测,共检测出Rh(D)阴性315例,经血型室确诊303例仍为阴性;正反定型不符29例,频率为0.05%;共筛查出41例血型错误。结论 OLYMPUS-PK7300全自动血型分析仪实现了血型检测真正意义上的自动化,降低了人为因素造成的影响;判读结果更标准,对于血站大批量的血型筛查具有较大的使用价值。

Rh阴性受者接受Rh阳性供肝移植临床经验分析

目的:探讨Rh阴性肝癌患者接受Rh阳性供肝移植病例的可行性、方法和疗效。方法:1例Rh阴性肝癌患者接受Rh阳性供肝,Rh阳性供肝经充分灌洗,术中尽量减少出血,并采用自体血储备、回收,术后定期随访,观察疗效。结果:1例Rh阴性肝癌患者接受Rh阳性供肝移植,手术过程顺利,肝功能恢复正常,甲胎蛋白(AFP)水平在正常范围内,现术后4年余,存活良好,抗Rh抗体为阴性。结论:Rh阳性供肝经充分灌洗,并采用自体血储备、回收后,可移植给Rh阴性的肝病患者,临床效果良好。

IgG抗-E引起配血不合1例

Rh血型是一个比较复杂的血型系统。正常人血中不存在Rh天然抗体，主要是在输血过程及妊娠过程中产生的免疫性抗体。Rh血型不合的输血可产生危及生命的溶血反应。发现1例以抗-E所致引起的交叉配血不合，现报道如下。