重组人瘦素蛋白纯化鉴定及其单克隆抗体制备

大肠杆菌(E.coli)重组表达获得的重组人瘦素蛋白(rh-leptin),复性、纯化后进行SDS-PAGE电泳和Western-blot印迹杂交鉴定其免疫学活性,免疫小鼠后制备单克隆抗体,结果表明通过对rh-leptin进行复性和纯化,获得了高纯度的具有免疫学活性的rh-leptin蛋白,并获得一株稳定分泌抗rh-leptin单抗的杂交瘤细胞株。瘦素蛋白的纯化及其单克隆抗体的制备,可供瘦素进一步研究应用。

重组人leptin的复性、纯化和免疫学及生物学活性鉴定

对重组人leptin(rh-leptin)蛋白进行复性及纯化,并鉴定其免疫学及生物学活性。将由大肠杆菌(E.coli)重组表达获得的rh-leptin,复性、纯化后进行SDS-PAGE电泳和Western印迹杂交鉴定其特异性,并通过Km小鼠减肥实验及胃肠推进率测定实验检验其生物学活性。结果表明通过对rh-leptin进行复性和纯化,获得了高纯度的具有免疫学和生物学活性的rh-leptin蛋白,可供进一步研究应用。

重组人Leptin对小鼠胃肠运动的影响

目的:观察重组人Leptin(rh-leptin)对小鼠胃肠推进运动的影响,并且探讨其作用机制。方法:经大肠杆菌重组表达并纯化获得rh-leptin。12只Km小鼠随机分为两组:rh-leptin组(n=6,腹腔注射rh-leptin2·5mg/kg)和对照组(n=6,腹腔注射生理盐水12·5ml/kg),给药3h后以5%的炭末阿拉伯胶混悬液灌胃,15min后处死小鼠,比较两组小鼠炭末移动距离占小肠全长的百分率即小肠推进率,以观察rh-leptin对胃肠运动的影响。结果:对照组小肠推进率为(54·53±11·08)%,rh-leptin组小鼠肠推进率为(41·98±5·81)%,rh-leptin组小鼠小肠推进率显著降低(P<0·05)。结论:rh-leptin能降低小鼠胃肠蠕动速率,抑制其胃肠推进运动。

壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑瘦素及其受体的影响

目的观察壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑瘦素及其受体的影响,探讨其抗骨质疏松机制。方法 72只200 g左右的SD大鼠按体质量随机抽出假手术组12只,造模组60只,造模组采用双侧去卵巢法造模,假手术组只切除卵巢周围相应质量的脂肪。造模成功后,造模组大鼠按体质量随机分为模型组、壮骨止痛方高剂量组(13.2 g/kg)、中剂量组(6.6 g/kg)、低剂量组(3.3 g/kg)和戊酸雌二醇组,每组12只。术后第5天开始药物干预,模型组和假手术组给予相应体积的纯净水,持续13周。给药结束后,检测大鼠骨密度和下丘脑Leptin含量及OB-Rb蛋白表达。结果模型组大鼠下丘脑Leptin及OB-Rb含量显著降低,骨密度显著减少,与假手术组比较差异有统计学意义。壮骨止痛方各剂量组大鼠OB-Rb蛋白表达显著增加,骨密度显著增加,与模型组比较差异有统计学意义。结论促进OB-Rb蛋白表达,可能是壮骨止痛方抗骨质疏松的作用机制之一。