人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞功能的影响(英文)

目的 :研究人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞 (dendriticcell,DC)功能的影响。方法 :用ELISA法检测人参皂苷Rg1及Rh1对DC的IL - 12p4 0蛋白产生量的影响 ,用RT -PCR检测人参皂苷Rg1及Rh1对DCIL - 12p4 0mRNA表达水平的影响。用中性红吞噬法检测人参皂苷Rg1及Rh1对DC -LPAK对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 :ELISA结果表明 ,Rg1和Rh1各剂量组均能显著提高DCIL - 12p4 0蛋白的产量。与对照组相比 ,Rg11mg/L及Rh110 0mg/L可明显增加DCIL - 12p4 0mRNA的转录 ,与其蛋白表达相一致。Rg1及Rh1均能促进DC -LPAK对乳头瘤细胞的杀伤能力 ;在对L92 9杀伤实验中 ,效靶比为 5∶1时 ,Rg1各剂量均能显著促进DC -LPAK的杀伤活性(P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,而Rh1仅中剂量能提高DC -LPAK的杀伤活力 (P <0 0 5 )。结论 :Rg1和Rh1通过增强IL - 12p4 0mRNA的表达来增加其蛋白的产量。并且 ,由于IL - 12产量的增加从而增强了DC

微生物转化人参皂苷Re为人参皂苷Rh1的研究

人参皂苷Re是人参的主要药理活性成分,具有抑制癌细胞增长、阻止癌细胞转移及保护神经等重要生理作用,稀有人参皂苷Rh1在抗癌方面的疗效更为显著。为获得较高含量的Rh1,微生物转化是目前较为有效途径。该研究从人参种植土中筛选可转化常量人参皂苷Re为稀有人参皂苷Rh1的目的菌株S329,以西洋参提取物为反应底物进行微生物发酵实验,利用高效液相色谱(HPLC)法对人参皂苷Re及其发酵产物进行分析。结果表明,通过对菌株形态学观察和18S r DNA测序分析,且通过在NCBI数据库上的Blast比对分析,鉴定高效菌株S329属于溜曲霉(Aspergillus tamarii),人参皂苷Re转化人参皂苷Rh1的转化率为27.65%。

人参皂苷Rh1对AD小鼠认知障碍的改善作用

本文研究了人参皂苷Rh1对东莨菪碱导致的小鼠认知障碍的改善作用。小鼠被随机分成六组:空白组:灌胃等剂量生理盐水;阴性对照组:灌胃等剂量生理盐水;阳性对照组:灌胃66.7μg/kg的石杉碱甲;人参皂苷Rh1低、中、高剂量组:灌胃5、10、15 mg/kg。分别进行了跳台试验、避暗试验、Morris水迷宫试验,并测定小鼠脑海马体中乙酰胆碱的含量。结果表明,在跳台试验、避暗试验中,与阴性对照组相比,人参皂苷Rh1低、中、高剂量组小鼠消退试验潜伏期明显延长;消退试验错误次数也明显减少(低、高剂量组P<0.05,中剂量组P<0.01)。在Morris水迷宫试验中,Rh1低、高剂量组找到平台的时间明显缩短(P<0.05);Rh1中剂量组极显著降低(P<0.01),且小鼠的游泳速度明显快于阴性对照组(P<0.05)。实验表明人参皂苷Rh1中剂量组在改善小鼠记忆方面有显著效果,且效果与石杉碱甲相当。

人参皂苷Rh1对哮喘模型小鼠炎症因子表达的抑制作用

目的:观察和探讨人参皂苷Rh1对哮喘模型小鼠的血清和支气管肺泡冲洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症因子的表达和肺组织形态学变化的影响。方法:雄性BALB/c小鼠40只,分为正常对照组、哮喘模型组、人参皂苷Rh1小剂量(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))治疗组和人参皂苷Rh1大剂量(80 mg·kg^(-1)·d^(-1))治疗组,并利用卵清蛋白致敏和雾化吸入激发方法制作哮喘模型;人参皂苷Rh1小剂量治疗组和大剂量治疗组分别在每次激发攻击前30 min灌胃,每天一次,共2周。在末次激发24 h后收集BALF,计数嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)数目;利用ELISA测定BALF中白细胞介素(IL)-4、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的水平;收集血液并测定血清中Ig G和Ig E的水平;用Western blot检测肺组织中转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达的变化;用HE染色观察肺组织的病理学变化。结果:人参皂苷Rh1可抑制小鼠哮喘模型BLAF中EOS数目(P<0.01);降低BLAF中IL-4、IL-5和IFN-γ的表达(P<0.01);减少血清中Ig E的含量(P<0.01);减少肺组织中TGF-β1蛋白表达(P<0.01),并改善哮喘小鼠肺组织病理学变化。结论:人参皂苷Rh1对哮喘小鼠具有抑制炎症因子表达、调节免疫反应和改善肺组织病理变化的作用。

人参皂苷Rg1、Rh1对树突状细胞刺激T细胞增殖及LPAK抗肿瘤活性的影响

目的 :观察人参皂苷Rg1,Rh1对树突状细胞 (DC)刺激T细胞增殖及其对IL 2与PHA激活的杀伤细胞 (DC LPAK)对人乳头瘤细胞及L92 9细胞杀伤作用的影响。方法 :分离培养鉴定DC ,用MTT法检测Rg1及Rh1对DC刺激T淋巴细胞增殖作用的影响。用中性红摄入比色法观察DC LPAK的杀伤活性。结果 :T :DC为 10 :1及 2 5 :1时 ,仅Rg110 0 μg ml能促进T细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,而Rh110 0 μg ml则抑制T细胞增殖 (P <0 0 1) ,同剂量的Rg1及Rh1相比有显著性差异 (P <0 0 5～0 0 1) ;T :DC为 10 :1时 ,Rh110 μg ml抑制T细胞增殖 ,而在T :DC为 2 5 :1时则表现为促增殖作用 (P <0 0 5 )。T :DC为 5 0 :1时 ,各加药组对T细胞增殖均无作用。Rg1及Rh1均能促进DC LPAK对乳头瘤细胞的杀伤能力 ;在对L92 9杀伤实验中 ,效靶比为 5 :1时 ,Rg1各剂量均能显著促进DC LPAK的杀伤活性 (P <0 0 1～ 0 0 5 ) ,而Rh1仅中剂量能提高DC LPAK的杀伤活力 (P <0 0 5 )。结论 :Rg1可增强DC刺激T细胞增殖及DC LPAK杀伤肿瘤的细胞能力。Rh1的作用则与其剂量范围及细胞比例密切相关。

人参皂苷Rh1对UUO大鼠肾纤维化的抑制作用

目的:观察并探讨人参皂苷Rh1(G-Rh1)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾纤维化的抑制作用及其机制。方法:雄性SD大鼠40只,分为假手术组(sham组)、UUO组、G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组。手术后第2天开始,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组分别每日灌胃50 mg/kg和100 mg/kg G-Rh1,连续2周。给药2周后,收集24 h尿测定尿蛋白,收集血清测定血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)。HE染色观察肾组织病理变化并对肾组织损伤程度评分。利用免疫组化和Western blot法观察肾组织中转化生长因子β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白和结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果:肾功能检测显示,各组大鼠24 h尿蛋白定量的差异无统计学显著性。UUO组BUN和SCr明显高于sham组(P <0. 05),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组BUN和SCr明显低于UUO组(P <0. 05),同时G-Rh1高剂量组BUN和SCr低于G-Rh1低剂量组(P <0. 05)。光镜下观察,与sham组比较,UUO组病理改变显著,肾组织损伤明显,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,肾损伤明显改善,G-Rh1高剂量组改善程度较G-Rh1低剂量组更显著。肾组织免疫组化显示,与sham组比较,UUO组肾小管及肾间质中TGF-β_1表达明显增多,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,TGF-β_1表达明显下降,G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组降低更明显。Western blot检测显示,与sham组比较,UUO组Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA和CTGF蛋白表达明显增多(P <0. 01),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA表达明显下降(P <0. 05),G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组α-SMA和CTGF蛋白表达明显降低(P <0. 05),而Ⅰ型胶原蛋白表达无显著差异。结论:人参皂苷Rh1可缓解UUO大鼠肾组织纤维化,改善肾功能,其主要机制可能是抑制TGF-β_1信号通路中纤维化相关因子的表达。

人参皂苷Rh1对免疫功能降低小鼠的免疫调节作用研究

目的通过研究人参皂苷Rh1对免疫功能低下模型小鼠的免疫调节作用,为研发人参皂苷Rh1作为免疫调节剂提供实验依据.方法建立环磷酰胺(CY)所致免疫功能低下ICR小鼠模型,研究人参皂苷Rh1对小鼠脾指数、胸腺指数、巨噬细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖的影响.结果人参皂苷Rh1低、中、高剂量组均可明显增加小鼠的脾指数(P<0.01);人参皂苷Rh1低、中剂量组可显著增加小鼠的胸腺指数(P<0.01);人参皂苷Rh1低、中、高剂量组均对小鼠MΦ吞噬功能有增强作用(P<0.01);人参皂苷Rh1低、中、高剂量组均可显著促进ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖(P<0.01),以低剂量组效果最佳;人参皂苷Rh1低、中、高剂量组对LPS诱导的小鼠B淋巴细胞增殖均无明显促进作用(P>0.05).结论人参皂苷Rh1具有明显增加小鼠的脾及胸腺指数、增强MΦ吞噬功能、促进T淋巴细胞增殖等作用,上调免疫功能低下模型小鼠的免疫功能.

HPLC法测定人参皂苷Rg3、Rh1的含量

目的建立人参发酵品中人参皂苷Rh1、Rg3的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定,色谱条件：ODS色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;检测波长203 nm;流动相（Rh1）：乙腈-水（26.573.5）,流动相（Rg3）：乙腈-0.05%磷酸（3763）;柱温30℃,流速1.0 m L/min。结果人参皂苷Rh1的含量测定线性范围0.1～1.1μm,相关系数r=0.999 8,平均加样回收率96.90%,RSD 2.67%。人参皂苷Rg3的含量测定线性范围0.4～3.0μm,相关系数为r=0.999 7,平均加样回收率98.56%,RSD 2.51%。结论本方法检测灵敏度高,检测结果可靠。

人参皂苷Rh1通过Wnt通路抑制肺腺癌A549细胞增殖的机制探讨

目的:探讨人参皂苷Rh1通过Wnt通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖的机制。方法:体外培养A549细胞,加入Rh1(5、10和20μmol/L)诱导后,采用MTT法检测A549细胞存活率,采用Western blot测定Wnt通路相关蛋白GSK-3β和β-catenin表达情况;利用β-catenin(S37A)慢病毒转染建立Wnt通路激活型A549细胞,进一步研究A549细胞中Wnt通路持续激活对Rh1抗增殖作用的影响。结果:Rh1可以剂量和时间依赖性地抑制A549细胞的增殖,同时Rh1可以剂量依赖性地显著降低A549细胞中的GSK-3β(Ser9)及β-catenin的表达水平。Wnt通路激活型的A549细胞部分抵消了Rh1的抗增殖作用。结论:Rh1可能通过抑制Wnt信号通路来抑制A549细胞的增殖。

超临界CO_2绿色萃取人参皂苷Rh1、人参皂苷Rh2的研究

运用超临界CO2萃取技术从人参总次苷中萃取人参皂苷Rh1、人参皂苷Rh2。以不同溶剂为夹带剂,采用超临界CO2对人参皂苷Rh1、人参皂苷Rh2的萃取进行研究。通过高效液相色谱测定产物得率。在萃取压力为30MPa、温度45℃、时间3h、乙酸乙酯为夹带剂(10mL乙酸乙酯作为固态夹带剂,290mL乙酸乙酯作为动态夹带剂)条件下,超临界CO2萃取出人参皂苷Rh1、人参皂苷Rh2。人参皂苷的得率随加入的乙酸乙酯量的增大先增大后基本不变,随萃取压力、萃取温度的升高先增大后减小。在此最佳条件下,人参皂苷Rh1和人参皂苷Rh2的得率分别为7.33%和14.69%。

微生物酶催化制备人参皂苷20(S)-Rg2,20(S)-Rh1和20(S)-PPT

以微生物Microbacterium esteraromaticum GS514的培养液中分离的粗酶为催化剂水解人参皂苷Re和Rg1,并通过1HNMR和13C NMR谱对水解产物的结构进行了表征.实验结果表明,反应体系中无机盐NaCl的存在与否直接影响人参皂苷Re,Rg1与粗酶液的反应结果.人参皂苷与粗酶液直接反应时,人参皂苷Re不发生反应,人参皂苷Rg1通过C6所连β-D-吡喃葡萄糖的选择性水解转化成人参皂苷F1.而该反应在无机盐NaCl存在下进行时,人参皂苷Re通过对C20所连β-D-吡喃葡萄糖的选择性水解定向转化为20(S)-人参皂苷Rg2;人参皂苷Rg1定向转化成20(S)-人参皂苷Rh1以及20(S)-原人参三醇(PPT).表明NaCl的加入激活了C20β-D-吡喃葡萄糖苷酶的活性,这对定向合成不同次级人参皂苷具有重要意义.

RRLC-Q-TOF-MS法研究人参皂苷Rh1对映异构体在大鼠体内的药代动力学行为

建立了高分离快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（RRLC-Q-TOF-MS）法同时分离人参皂苷Rh1对映异构体,并研究其在大鼠体内的药代动力学行为.实验采用Agilent SB C18色谱柱,流动相A为水-乙腈（90∶10,V∶V）溶液,流动相B为水-乙腈（10∶90,V∶V）溶液,两种流动相内均含15 mmol/L甲酸铵,流速0.3 mL/min,进样量5μL,二元线性梯度洗脱分离,在电喷雾负离子模式下进行质谱检测.结果表明,20-（S）和20-（R）人参皂苷Rh1的定量线性范围分别为0.24～39.00 mg/L和0.035～7.80 mg/L,定量限分别为0.20和0.03 mg/L,方法的检测限（S/N=3）分别为0.10和0.02 mg/L.精确度与精密度结果显示：两者的日内精确度分别为89.54％～95.79％和88.76％～94.33％,相对偏差小于5％;日间精确度分别为88.16％～92.41％和88.49％～94.35％,相对偏差小于5％.低、中、高3个浓度的提取回收率均大于90％.该方法可用于分离测定20-（S）和20-（R）人参皂苷Rh1,从而进行人参皂苷Rh1对映异构体在大鼠体内的药代动力学研究.

通过KEGG生物通路富集分析探析人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞基因表达的影响

目的:基于前期筛查人参皂苷Rh1干预下乳腺癌SKBR3细胞中差异表达的基因,对差异表达基因的功能及相关信号通路进行分析。方法:应用生物信息学对差异表达基因的功能及相关信号通路进行分析。结果:KEGG生物通路富集分析发现差异表达基因在人类乳头瘤病毒感染、剪接体、基底黏附、细胞凋亡、mTOR信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、泛素-蛋白酶体通路等信号通路中富集显著。结论:人参皂苷Rh1可能通过调控核糖核蛋白复合物的生物合成、基底黏附、泛素-蛋白酶体等通路抑制SKBR3细胞的活性。

鞘氨醇单胞菌2-F2将人参主皂苷Re转化为人参稀有皂苷Rh1

从人参根系土壤中分离的菌株2-F2将人参主皂苷Re转化为稀有皂苷Rh1,其转化机理为Re→Rg1→Rh1.进行16S rRNA基因序列的系统发育分析,菌株2-F2与Sphingomonas asaccharolytica IFO15499T在同一分支上,同源性为99.5%.该菌株属于鞘氨醇单胞菌属.

应用高通量测序研究人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞基因表达的影响

目的观察人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞基因表达的影响,筛查人参皂苷Rh1干预下乳腺癌SKBR3细胞中差异表达的基因。方法对乳腺癌SKBR3细胞进行样本准备,获得去rRNA链特异性转录组;测序获得原始图像文件经碱基识别后转化为原始序列文件;通过质量分析评估测序数据是否适合进行生物信息学分析,应用剪切转录产物比对软件(STAR)对测序数据与参考基因组进行比对;基于美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库,对人参皂苷Rh1干预下乳腺癌SKBR3细胞基因的表达及差异基因的表达进行分析。结果高通量测序共筛查出基因26978个,其中根据NCBI数据库注释为m RNA的基因19229个,注释为lncRNA的基因4385个,高通量测序结果表明差异表达基因6580个,以Fold change>1为上调,<-1为下调,上调差异基因3403个,其中差异表达显著基因为小整合膜蛋白11A(SMIM11A)、嘌呤能受体P2X1(P2RX1)、碳酸酐酶9(CA9)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ核糖核酸2(PIK3CD-AS2)、血管活性肠肽受体2(VIPR2)、非特征LOC100506314(LOC100506314)、长基因间非蛋白编码核糖核酸1389(LINC01389)、表皮生长因子受体激酶底物8-样蛋白3(EPS8L3)、视网膜筋膜基因2(FSCN2)、肠壁碱性磷酸酶(ALPI);下调差异表达基因3177个,其中差异表达显著基因为溶质载体家族1成员3(SLC1A3)、羟基类固醇17-β脱氢酶1(HSD17B1)、碳水化合物磺基转移酶11(CHST11)、溶质载体家族25成员51(SLC25A51)、β-1,3-半乳糖基转移酶6(B3GALT6)、非特征LOC101929882(LOC101929882)、δ连环蛋白家族成员(ARVCF)、蛋白磷酸酶2A催化亚基α(PPP2CA)、星形胶质细胞上调基因-1(AEG1)、磷脂酰肌醇-4-激酶B(PI4KB)。结论应用高通量测序技术可筛查出人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞增殖相关的差异性表达基因,并对筛选出的重要基因进行总结和分类。

胰岛素样生长因子2引起Rh1肉瘤细胞mTOR信号的背景变化

目的观察胰岛素样生长因子(IGF)2对Rh1肉瘤细胞生长活性和mTOR信号背景的影响。方法常规培养Rh1细胞,均用无血清培养液消除内源性因子影响后再用IGF-2(终浓度为10 ng/ml)刺激,72 h后用流式细胞仪检测细胞生长活性;蛋白质印迹方法观察IGF-2刺激细胞5、10、20、30、60 min后S6、Akt(s473)的动态变化。结果与对照组相比,IGF-2刺激可促进Rh1细胞存活,降低细胞凋亡率;IGF-2刺激细胞后可使S6磷酸化随着时间的延长逐渐增强;IGF-2亦导致Akt(s473)位点的磷酸化,其磷酸化状态相对稳定。结论 IGF-2刺激Rh1细胞时,mTOR信号通路中S6功能逐渐增强,Akt功能则相对稳定。

金属离子催化转化人参皂苷Rg1生成Rh1

考察了在不同金属离子和不同溶剂体系催化转化人参皂苷Rg1生成Rh1的情况,结果选择Fe^3+为催化剂,乙二醇-水为反应体系。优化了Fe3+催化转化的反应条件,考察了产物与反应时间的关系,并阐明催化反应的过程。结果表明,在乙二醇-水体系中,Fe^3+催化生成的产物20(S,R)-Rh1最多。在乙二醇体积分数50%、Fe^3+浓度0.8 mol/L、40℃反应16 h条件下,制备的产物得率为71.6%,其中20(S,R)-Rh1的质量分数为64.9%。该催化反应过程是人参皂苷Rg1 C-20位上的葡萄糖苷键在Fe^3+的催化作用下,裂解生成20(S,R)-Rh1,同时发生脱水反应生成Rk3和Rh4,当20(S,R)-Rh1积累到一定量时发生水合反应生成25(S,R)-OH-Rh1。

二步法制备稀有人参皂苷Rh1组异构体

本论文以制备人参皂苷Rh1为目标,选择三醇类人参皂苷Re为底物,采用酶转化和金属离子催化联用的二步法催化转化,研究了各步骤中的催化反应条件,并对产物进行了纯化和组成分析。结果表明:Absidia sp.P39r菌株产酶能催化转化Re生成Rg1,确定其最佳反应条件为:缓冲液pH5.0,反应温度40℃,底物浓度1.2%,反应时间16 h,乙醇浓度10%,在此反应条件下得到的Rg1质量分数最高,为70.5%。然后以Rg1为底物,确定在乙醇-水体系下Fe3+的催化反应产物20(S,R)-Rh1的质量分数最高,催化反应条件优化结果为:乙醇浓度50%,反应温度50℃,底物浓度1.7%,Fe3+溶液反应浓度1.4 mol/L,反应时间14 h,20(S,R)-Rh1的质量分数高达61.83%,Rk3、Rh4的质量分数之和为27.34%。在上述条件下将20 g人参皂苷Re与酶液反应,反应结束后用AB-8大孔吸附树脂分离干燥得到含有Rg1的产物14.1 g。再取10.2 g反应得到的Rg1与Fe^3+溶液反应,干燥后最终得到的人参皂苷Rh1组异构体质量为8.18 g,得率为80.2%,其中20(S)-Rh1,20(R)-Rh1,Rk3和Rh4的含量分别为37.71%,24.12%,7.27%,20.07%。

生物转化制备红参Rh1皂苷组及成分分析

利用TLC和超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)分析已制备的Rh1组异构体,利用HPLC分析其异构体的质量比。Rh1组在TLC图谱中显2个斑点,经UPLC-MS的分析,确认红参皂苷Rh1组含有4种异构体,分别是20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rk3和Rh4;高效液相色谱检测结果表明红参皂苷Rh1组中4种异构体20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rk3、Rh4的质量比为25.0∶18.8∶15.5∶40.7,4种异构体总质量分数在90%以上。

RP-HPLC法同时测定人参提取物转化产物中20(S)、20(R)-人参皂苷Rg2和20(S)、20(R)-人参皂苷Rh1的含量

目的建立同时测定人参提取物转化产物中20（s）、20（R）-人参皂苷Rg2和20（s）、20（R）-人参皂苷Rh1含量的方法。方法采用RP．HPLC法。色谱柱为迪马C18柱（4．6mm×250mm，5um），流动相为乙腈-水梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为1．0mL·min^-1，柱温为30℃。结果人参提取物转化产物中20（S）、20（R）—人参皂苷Rg2和20（S）、20（R）-人参皂苷Rhl质量浓度分别在4．0～80mg·L^-1、2．8—56mg·L^-1、3．2—64mg·L^-1、2．4—48mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0．9998、0．9998、0．9991、0．9997，回收率分别为100．3％、98．1％、98．0％、99．9％，回收率的RSD值分别为3．1％、2．7％、4．7％、4．0％。结论方法准确、可靠、重现性好，为人参提取物转化产物的质量控制提供参考依据。