人参皂苷Rh2通过mTOR/ROS信号通路抑制卵巢颗粒细胞衰老

目的探讨人参及其主要活性成分人参皂苷Rh2抗胰岛素抵抗导致的卵巢颗粒细胞衰老的作用及机制。方法采用网络药理学、分子对接和细胞热位移分析法(Cellular thermal shift assay,CETSA)检测人参抗卵巢储备减少(Diminished ovarian reserve,DOR)和衰老的核心分子及其潜在的下游信号通路。用胰岛素(0.5μg/ml,72 h)处理人卵巢颗粒细胞(KGN)作为卵巢衰老的体外模型,将KGN细胞分为3组:对照组、胰岛素组(0.5μg/ml,72 h)以及胰岛素(0.5μg/ml,72 h)+人参皂苷Rh2组(2μmol/L,24 h)。β-半乳糖苷酶染色、CCK-8、活性氧检测试剂盒、免疫蛋白印迹以及qRT-PCR检测KGN细胞活性以及衰老相关因子(p53、p21)的表达水平。结果网络药理学筛选出人参有效成分、DOR和衰老核心度最高的10个共同靶点,即TNF、ESR1、MAPK3、PPARG、STAT3、HSP90AA1、NR3C1、mTOR、AR以及NOS3。人参中主要的活性成分为人参皂苷Rh2。与胰岛素组相比,人参皂苷Rh2(2μmol/L,24 h)能够降低KGN细胞中衰老细胞占比及活性氧(ROS)活性;同时,人参皂苷Rh2能够抑制KGN细胞中p53以及p21的表达升高。分子对接结果显示,mTOR是人参皂苷Rh2抗DOR以及衰老的关键靶点。过表达mTOR能够逆转人参皂苷Rh2抑制KGN细胞的活性降低和细胞衰老,逆转人参皂苷Rh2抑制KGN细胞ROS水平下降。结论人参皂苷Rh2可能通过调控mTOR/ROS抑制胰岛素抵抗导致的卵巢颗粒细胞衰老,从而发挥抵抗DOR的作用。

SPE-UPLC联用快速检测保健品中人参皂苷Rh2成分

目的:基于固相萃取与超高液相色谱联用技术,建立一种快速准确检测保健品中人参皂苷Rh2成分的方法,为市售含有人参皂苷Rh2成分的保健品的质量评价提供参考。方法:样品预处理后经甲醇超声提取,中性氧化铝SPE小柱净化,筛选合适的洗脱剂进行HLB-SPE小柱分离纯化,采用WatersT3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,PDA全波长扫描,流速0.3 mL·min^(-1)。结果:SPE-UPLC法测得人参皂苷Rh2浓度在9.7~99.8μg·mL^(-1)与其峰面积线性关系良好(r=0.999),平均回收率为99.20%。结论:该方法准确、简便、快速,并能有效去除辅料干扰,稳定性高,可用于含有人参皂苷Rh2有效成分的保健食品的质量控制。

装载人参皂苷Rh2外泌体的制备及其对肝癌细胞株Huh7、PLC半数抑制浓度测算

目的制备装载人参皂苷Rh2(G-Rh2)的外泌体(Exos@G-Rh2),并测算其对肝癌细胞株Huh7、PLC的半数抑制浓度(IC50)。方法利用外泌体提取试剂盒从肝癌Huh7细胞培养上清中分离提纯外泌体(Exos),采用电穿孔法制备装载G-Rh2的外泌体Exos@G-Rh2,使用透射电子显微镜观察Exos@G-Rh2、Exos形态,使用纳米颗粒跟踪分析仪测算Exos@G-Rh2、Exos粒径,采用高效液相色谱(HPLC)法测算Exos@G-Rh2中G-Rh2含量,并计算Exos@G-Rh2载药量。采用PKH-26荧光染色法观察肝癌细胞株Huh7、PLC对Exos@G-Rh2的摄取情况,采用CCK-8法测算Exos@G-Rh2、游离G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50。结果Exos及Exos@G-Rh2在电镜下均可见经典的茶托状结构,且有质膜包裹,形态无显著差异。Exos@G-Rh2、Exos粒径分别为(156.90±10.23)nm、(143.47±8.62)nm,两者相比,P>0.05。Exos@G-Rh2载药量为24.25%±0.27%。在Huh7细胞、PLC细胞中,红色荧光清晰可见,主要在细胞质中。在Huh7细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(34.96±1.37)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(29.74±2.83)µg/mL,两者相比,P<0.05;在PLC细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(33.41±1.47)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(30.08±1.12)µg/mL,两者相比,P<0.05。结论成功制备Exos@G-Rh2,其形态和粒径与Exos无显著差异,可被Huh7细胞、PLC细胞摄取。与游离G-Rh2相比,Exos@G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50更低。

基于网络药理学和分子对接技术探究人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的作用机制

为了考察人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的作用机制,采用网络药理学和分子对接技术探究了人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的作用靶点及其作用机制.网络药理学分析显示:人参皂苷Rh2的靶点共有70个,肺纤维化的靶点共有2963个,药物和肺纤维化病的交集基因共有50个,药物治疗肺纤维化的核心靶点共有10个.人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的生物学通路和功能分析分别有122条和361条.分子对接结果显示,人参皂苷Rh2与9个核心靶点具有较为稳定的结合活性.研究结果可为后续探究人参皂苷Rh2治疗肺纤维化提供参考.

人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变大鼠肾损伤的保护作用及其机制

目的:探讨人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变(DKL)大鼠肾脏损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:通过高脂高能量饲料配以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法制备DKL大鼠模型。将30只SD成模大鼠随机分为模型组、低剂量(10 mg·kg^(-1))Rh2组和高剂量(20 mg·kg^(-1))Rh2组,每组10只,另选取10只SD大鼠作为正常对照组。检测各组大鼠体质量和肾脏质量,并计算肾指数,干预8周后全自动分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肾组织中Ⅳ型胶原(ColⅣ)水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),肾脏质量和肾指数明显升高(P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均升高(P<0.01),肾组织中ColⅣ水平升高(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高(P<0.01),而肾组织中Smad7蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,低和高剂量Rh2组大鼠体质量升高(P<0.05或P<0.01),肾脏质量和肾指数均降低(P<0.05或P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),肾组织中ColⅣ水平降低(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低(P<0.01),肾组织中Smad7蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:人参皂苷Rh2可抑制DKL大鼠肾脏纤维化,改善肾功能,对DKL大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与Rh2调节TGF-β1/Smads信号通路表达有关。

人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌NCI-H1975细胞的作用研究

目的探讨人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌细胞的体外作用,以期为非小细胞肺癌治疗研究提供理论依据。方法体外培养人肺腺癌NCI-H1975细胞,CCK-8法检测不同浓度人参皂苷和吉非替尼作用后的细胞活力,计算半抑制浓度(IC_(50)),然后用同样的方法检测人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对细胞活力的影响;分别用PI染色法、Annexin V-FITC/PI双染法和JC-1法检测人参皂苷Rh2、吉非替尼单药和联合用药对细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响。结果人参皂苷Rh2和吉非替尼单药对NCI-H1975细胞的作用呈剂量依赖性和时间依赖性,作用24、48、72 h的IC_(50),Rh2分别为57.90、41.38、32.62μg·mL^(-1),吉非替尼分别为56.50、22.80、13.19μmol·L^(-1);两药以IC_(50)剂量联用作用72 h后,与各单药组比较,联合用药组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞周期无明显阻滞,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。结论人参皂苷Rh2和吉非替尼联用可显著抑制NCI-H1975细胞活力和诱导细胞凋亡,其作用优于单独用药。

人参皂苷RH2通过BCL2L1/PI3K/AKT信号通路逆转环磷酰胺诱导的卵巢颗粒细胞损伤

目的探究人参皂苷RH2对环磷酰胺诱导的卵巢颗粒细胞(KGN)损伤的保护作用及分子机制。方法选取KGN细胞作为研究对象,应用环磷酰胺刺激建立早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)的体外模型。设置正常组、模型组(环磷酰胺,8μM,24 h)以及人参皂苷RH2组(40μM,24 h)。采用CCK8法检测人参皂苷RH2(40μM,24 h)对环磷酰胺导致的KGN细胞损伤的保护作用;应用AO/EB染色检测细胞凋亡情况;网络药理学(Network pharmacology,NP)分析人参皂苷RH2在POI中的潜在作用靶点以及下游通路。Western blot法检测BCL2L1、p-PI3K、p-AKT、PI3K以及AKT的蛋白表达。分子对接检测人参皂苷RH2与BCL2L1的结合能力。结果环磷酰胺刺激后,KGN细胞活性率呈剂量依赖性下降,而给予人参皂苷RH2能够逆转环磷酰胺导致的KGN细胞增殖率下降以及细胞凋亡。BCL2L1可能是人参皂苷RH2保护环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的靶点。过表达BCL2L1能够增加RH2对环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的保护作用。低表达BCL2L1能够逆转RH2对环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的保护作用。同时,人参皂苷RH2能够逆转由环磷酰胺导致的KGN细胞中p-PI3K/PI3K以及p-AKT/AKT表达升高。并且BCL2L1与人参皂苷RH2有很好的关联度(-7.28 kcal/mol),具有很强的结合能力。结论人参皂苷RH2对环磷酰胺损伤的卵巢颗粒细胞具有保护作用,该保护作用可能通过激活BCL2L1/PI3K/AKT通路,抑制卵巢颗粒细胞损伤。

人参皂苷Rh2对人肺泡上皮癌细胞A549上皮-间充质转化的影响及其机制研究

目的 探讨人参皂苷Rh2对人肺泡上皮癌细胞A549上皮-间充质转化(EMT)的影响及其机制研究。方法 以人肺泡上皮癌细胞A549为研究对象,分别用TGF-β1和人参皂苷Rh2对其进行处理,显微镜下观察实验组和对照组A549细胞的形态学变化,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)法测定细胞活力,Western blot检测实验组和对照组的EMT相关因子(N-钙黏蛋白、α-SMA、纤维连接蛋白、E-钙粘蛋白)的蛋白表达情况。结果 在A549细胞中,TGF-β1使细胞呈梭状形态,提高细胞活力,促进N-钙黏蛋白、α-SMA、纤维连接蛋白的表达,抑制E-钙黏蛋白的表达;而人参皂苷Rh2逆转了上述TGF-β1的促进和抑制作用。结论 本研究证明了人参皂苷Rh2可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT,为人参皂苷Rh2在纤维化相关疾病中的作用提供了研究基础。

人参皂苷Rh2通过抑制氧化应激和神经炎症缓解小鼠应激诱导的抑郁样行为

目的 初步阐明人参皂苷Rh2对抑郁症相关氧化应激和神经炎症具有抗抑郁药作用,以及这些神经保护作用的可能机制。方法 首先构建C57BL/6 J小鼠慢性社交挫败应激(CSDS)模型,根据社会交互作用指数(SIR)确定易感小鼠,分为CSDS组、Rh2组和氟西汀组,每组10只,另取对照组C57BL/6 J小鼠10只进行行为学实验(社会交互作用实验、强迫游泳实验、悬尾试验和糖水消耗实验),检测Rh2能否减轻小鼠抑郁样行为。然后采用ELISA法和实时定量PCR法检测小鼠氧化应激因子[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)]和炎症因子[(肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和干扰素(IFN)-γ)]水平。采用免疫荧光染色、实时定量PCR法和Western blot法检测Rh2预处理能否对CSDS引起的4-羟基壬烯酸(4-HNE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和双皮质蛋白(DCX)变化产生抑制作用。结果 小鼠CSDS抑郁模型构建成功。人参皂苷Rh2治疗显著改善小鼠抑郁样行为。人参皂苷Rh2治疗的CSDS小鼠氧化应激产物水平,抗氧化应激激酶活性和神经炎症均有所降低或得到改善。结论 Rh2在CSDS诱导的小鼠体内具有抗抑郁作用,其机制似乎涉及对氧化应激的保护,从而防止炎症反应导致的神经元退化。

人参皂苷Rh2联合万古霉素对万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜和抑菌效果的影响

目的 研究人参皂苷Rh2联合万古霉素对万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜和抑菌效果的影响。方法 诱导万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(VRSA),分别用10μg/m L、30μg/mL、90μg/m L人参皂苷Rh2处理VRSA作为不同浓度人参皂苷Rh2处理组;VRSA分别用1μg/mL、4μg/mL、16μg/mL万古霉素处理,作为不同浓度万古霉素处理组;10μg/mL人参皂苷Rh2和1μg/mL万古霉素共同作用VRSA记为10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组;不作处理的VRSA作为空白对照组。原始分离的对万古霉素敏感型的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作为VSSA组。结晶紫法检测生物膜形成能力;实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测fnbA、atlA表达水平;分光光度计检测菌活性。结果 与VSSA组比较,VRSA组生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,16μg/mL万古霉素及10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素处理的VRSA增殖活性明显降低,而10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素处理的VRSA增殖活性明显低于不同浓度人参皂苷Rh2处理组,且明显高于4μg/mL万古霉素处理者,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,不同浓度人参皂苷Rh2处理的VRSA生物膜的光密度值明显降低,fnbA、atlA的表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,不同浓度万古霉素处理的VRSA中fnbA、atlA表达水平显著升高,4μg/mL和16μg/mL万古霉素处理的VRSA生物膜的光密度值也明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,10μg/mL人参皂苷Rh2组及10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组VRSA生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平明显降低,fnbA、atlA的表达水平明显升高,且10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组VRSA生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平均显著高于10μg/mL人参皂苷Rh2组,但明显低于1μg/mL万古霉素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 人参皂苷Rh2可抑制VRSA生物膜形成,但不抑菌;万古霉素可抑菌但不能抑制生物膜形成,两者联用能抑制生物膜形成且增强万古霉素的抑菌作用。

人参皂苷Rh2通过激活Akt和Erk通路促进神经分化

目的研究人参皂苷Rh2的促神经分化作用,初步明确相关分子机制。方法将细胞分为对照组、实验组,使用MTT检测Rh2对细胞毒性的影响,筛选最适药物浓度,用倒置相差显微镜观察拍照,使用Image-J软件对照片进行细胞分化率和神经突起长度统计分析,用Western Blotting检测其促神经分化所激活的信号通路,之后用相关通路抑制剂加以干预,检测神经突起长度、分化率和相关通路的蛋白表达变化。结果人参皂苷Rh2浓度在2~6μM不影响细胞存活,能够促进神经分化,随剂量依赖性增加,其中6μM的效果最显著,其通过激活PI3K/Akt、MEK/Erk发挥作用,其中p-Akt和p-Erk在30 min表达最明显,Rh2可以降低由于PI3K/Akt、MEK/Erk抑制剂所致p-Akt、p-Erk抑制的效果。结论人参皂苷Rh2促进神经突起生长、增加和延长,具有较好促进神经分化的效果,具有开发为治疗神经退行性疾病的潜力。

人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡

目的探究人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,Rh2)诱导人结肠癌细胞SW480凋亡作用机制。方法 CCK-8法检测Rh2对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术(Flow cyto Metry,FCM)检测Rh2对SW480细胞凋亡的影响;Hoechst33258染色观察Rh2对SW480细胞凋亡形态学的影响;Western blot检测经Rh2诱导SW480细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cleaved caspase-3,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化;LY294002、Rh2单独及联合诱导SW480细胞后,蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化。结果CCK-8结果显示Rh2呈时间浓度依赖抑制SW480细胞增殖。FCM结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的(0.70±0.09)%增至(11.06±1.04)%(P<0.05)。Hoechst33258结果显示,Rh2诱导SW480细胞48h后呈现典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,经Rh2诱导的SW480细胞,凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低,Bax、p53、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达增加;PI3K/AKT/GSK-3β信号通路蛋白PI3K、P-AKT、P-GSK-3β表达量与对照组比较明显减少,AKT、GSK-3β表达量无明显变化;LY294002、Rh2和LY294002与Rh2联合诱导SW480细胞后,总AKT蛋白和总GSK-3β蛋白表达量基本一致,LY294002与Rh2联合用药对SW480细胞中PI3K、P-AKT和P-GSK-3β的表达抑制作用较单独用药更加明显。结论Rh2可能是通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路,激活p53信号通路,激活caspase-3,破坏Bcl-2/Bax比例,诱导结肠癌细胞SW480凋亡。

人参皂苷Rh2抑制肝癌HepG2细胞迁移的实验研究

目的：研究人参皂苷Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移的影响及其机制。方法：取对数生长期Hep G2细胞,Rh2（10~160μmol/L）诱导,同时设空白对照组,用CCK-8检测Rh2对细胞增殖影响;Transwell检测Rh2对细胞的迁移的影响;荧光素报告基因筛选可能的信号通路;Western blot检测Hep G2细胞中P-ERK、ERK、P-P38、P-38、P-JUK、JUK、MMP3等蛋白的表达;定量PCR方法检测AP1、MMP3基因的表达;荧光显微镜分别观察AP1、MMP3蛋白在细胞内的表达及分布。结果：CCK-8检测结果显示Rh2对肝癌Hep G2细胞生长抑制呈剂量和时间依赖性;Transwell检测显示Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移有明显的抑制作用;荧光素报告基因筛选出AP1转录因子;Western blot检测结果显示P-ERK、MMP3蛋白表达水平呈下降趋势,PJUK、P-P38蛋白表达水平明显升高,ERK、JUK、P38蛋白则无明显变化;定量PCR方法结果显示：AP1、MMP3的基因表达下降。荧光结果显示：AP1、MMP3均分布在胞质内,随药物浓度的增加其荧光表达量减弱。结论：人参皂苷Rh2可通过激活MAPK通路来抑制肝癌Hep G2细胞的迁移。

人参皂苷Rh2诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的研究人参皂苷Rh2(G-Rh2)对人胃癌细胞SGC-7901的影响。方法采用MTT法检测G-Rh2对SGC-7901细胞存活率的影响;流式细胞分析法检测凋亡小体的含量;免疫印迹技术及体外Caspase-3/-7活力测定方法检测Caspase的激活状态。结果G-Rh2对SGC-7901细胞生长有明显的抑制作用,且呈量-效关系,IC50为9.3μg/ml。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞24h,凋亡细胞数量为6.97%。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞20h,出现多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]断裂,Caspase-3/-7活力开始出现,并随作用时间的延长而增强。结论G-Rh2诱导Caspase参与SGC-7901细胞凋亡。

人参皂苷单体Rh2抑制人白血病KG1-α细胞增殖并促进其凋亡

目的研究人参皂苷单体Rh2对人白血病细胞KG1-α增殖、凋亡的影响。方法取对数生长期的KG1-α细胞,分别用不同浓度的人参皂苷单体Rb1、Rg1、Rh2诱导,另设空白对照组,阳性对照用阿糖胞苷。运用CCK-8法检测各单体对细胞增殖的影响,筛选出最强作用单体。用筛选出的皂苷单体诱导KG1-α细胞,用annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测人参皂苷单体对细胞凋亡的影响,PI染色流式细胞术检测对细胞周期的影响,Western blot法检测人参皂苷单体处理的KG1-α细胞中P53、P21、cylin D1、cleaved caspase-3的表达。结果 CCK-8实验结果显示人参皂苷Rh2、Rb1、Rg1、阿糖胞苷的IC50分别为(75、207、268、1058)μmol/L;与对照组相比,经人参皂苷Rh2诱导24、48 h后,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术结果表明凋亡率由(5.37±0.02)%,分别增加至(8.37±0.015)%、(33.22±1.67)%(P<0.05);同样处理,细胞周期检测结果显示:G0/G1期由(26.78±3.14)%,分别上升至(29.26±2.31)%、(44.77±2.26)%;S期由(65.43±2.22)%,分别下调至(51.46±0.57)%、(48.29±1.80)%;Western blot结果显示,cleaved-caspase 3、P53和P21在75μmol/L Rh2处理后表达上调,而cyclin D1表达下调。结论人参皂苷Rh2可抑制KG1-α细胞的增殖,促进细胞凋亡。

人参皂苷Rh2对免疫低下小鼠的免疫调节作用

目的研究人参皂苷Rh2的免疫调控功能。方法 6周龄C57BL/6J雄性小鼠采用X射线一次性全身照射建立放疗模型,腹腔注射甲氨蝶呤建立免疫低下模型。两种模型均分为空白对照组(n=10)、模型对照组(n=15)、胸腺五肽组(n=15)、人参皂苷Rh2组(n=15)。空白对照组和模型对照组按每只0.2 mL灌胃0.9%氯化钠溶液,胸腺五肽组按0.1 mg·kg^(-1)腹腔注射胸腺五肽,人参皂苷Rh2组按10 mg·kg^(-1)灌胃,每天1次。放疗模型于第3,5,7天取材,甲氨蝶呤致免疫低下模型第15天取材。采用流式细胞术检测脾脏和胸腺中免疫细胞的百分率,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中细胞因子的含量。结果人参皂苷Rh2可缓解小鼠放疗和甲氨蝶呤导致的体质量下降。与模型对照组比较,Rh2能增加脾脏、胸腺淋巴细胞中CD_4^+T细胞和CD_8^+T细胞的数量(P<0.05或P<0.01),增加脾脏中自然杀伤细胞(NK)的数量,提高T细胞受体(TCR)的表达(P<0.05或P<0.01),减少脾脏中髓来源的抑制性细胞(MDSC)的数量(P<0.05或P<0.01),提高树突状细胞(DCs)表面共刺激分子MHCII的表达(P<0.05),降低DCs表面负性调控分子:程序性死亡分子1配体(PD-L1)的表达(P<0.05),促进血清中Th1型细胞因子白细胞介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论人参皂苷Rh2能缓解小鼠放疗以及免疫抑制剂所致的免疫低下状态,该作用与促进天然免疫细胞分化成熟以及免疫效应细胞的增殖,提高Th1型细胞因子的分泌水平,增强免疫功能有关。

人参皂苷Rh2通过VEGF/MMP-9信号通路抑制哮喘小鼠气道重塑的实验研究

目的:探讨人参皂苷Rh2对支气管哮喘小鼠气道重塑及VEGF和MMP-9信号通路的影响。方法:60只清洁级雌性BABL/c小鼠,随机数字表法分为6组,每组10只,分别为A组为生理盐水对照组、B组为卵蛋白(OVA)哮喘组、C组为人参皂苷Rh2低剂量组、D组人参皂苷Rh2高剂量组、E组为SU5416治疗组、F组为地塞米松治疗组。在末次激发24h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色、Masson三色染色、PAS染色。取右肺组织分别用酶联免疫吸附法(ELISA),RT-PCR和Westernblot检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IL-13含量以及VEGF和MMP-9 mRNA、蛋白表达。结果:哮喘模型组小鼠与对照组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平增高;肺组织VEGF和MMP-9 mRNA、蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.01)。人参皂苷Rh2干预组小鼠与哮喘模型组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平,VEGF和MMP-9 mRNA、蛋白表达水平均显著降低,具有显著差异(P<0.01),但2个不同治疗组之间上述各指标间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人参皂苷Rh2可抑制哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能部分是通过抑制VEGF/MMP-9信号通路而实现的。

人参皂苷Rh2对人红白血病K562细胞HDAC1/2活性和周期蛋白的影响

目的 探讨人参皂苷单体Rh2[20（S）-ginsenoside Rh2,Rh2（S）]对人红白血病K562细胞增殖及对组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）、HDAC2活性和周期蛋白的影响。方法 以10-80μmol/L的Rh2（S）作用于体外培养的K562细胞,采用CCK-8法检测Rh2（S）对K562细胞增殖活性的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞周期、细胞凋亡的变化;化学比色法检测细胞中HDAC活性;Western blot法检测（10、20、40、60）μmol/L Rh2（S）诱导48 h后HDAC1、HDAC2、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）、p16INK4A和p21蛋白的表达。结果 CCK-8结果显示,Rh2（S）在20-80μmol/L浓度范围内能有效抑制K562细胞生长,并呈时间剂量依赖性;FCM结果显示,60μmol/L Rh2（S）将K562细胞周期阻滞在G0/G1期;（20、40、60）μmol/L Rh2（S）诱导K562早期凋亡,其凋亡率分别为（8.09±0.86）%、（9.44±0.53）%、（22.80±2.16）%,与空白对照组（2.63±0.14）%相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;40~60μmol/L Rh2（S）能降低K562细胞中HDAC的活性;Western blot结果显示,Rh2（S）能够下调HDAC1/2和cyclin D1、CDK4,激活p16INK4A和p21的表达。结论 Rh2（S）可能是通过抑制HDAC1、HDAC2的活性,下调cyclin D1激活p16INK4A和p21的表达,从而抑制白血病细胞增殖,诱导周期阻滞和细胞凋亡。

人参皂苷Rh2抑制实验性大鼠子宫异位内膜增殖及其作用机制探讨

目的探讨人参皂苷Rh2对实验性SD大鼠子宫内膜异位症模型的抑制作用及其机制。方法外科手术法建立SD大鼠子宫内膜异位症模型,在第2次开腹后按模型异位内膜大小随机分成5组,分别是模型对照组(0.5%羧甲基纤维素钠,0.5%CMC-Na),孕三烯酮组(1.5 mg.kg-1)和Rh2低、中、高剂量组(5、10、40 mg.kg-1);连续灌胃给药21 d后,在末次给药24 h内麻醉解剖大鼠、采血及保存异位内膜组织。HE染色观察异位内膜病理组织学改变;Elisa测定血清中雌激素(Estrogen,E2)、孕激素(Progesterone,P)和抗子宫内膜抗体(Endometrial antibody,EMAb)水平;Western blot检测异位内膜组织中Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达情况。结果 Rh2(40 mg.kg-1)异位内膜组织明显萎缩,腺体数目明显减少,腺腔萎缩,腔内积液体积减少;Rh2(5、10、40 mg.kg-1)降低E2、P和EMAb的水平;Rh2(5、10、40 mg.kg-1)异位内膜组织中Bax/Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达明显升高。结论 Rh2(40 mg.kg-1)可明显抑制实验性SD大鼠异位内膜生长,其作用机制可能与降低E2、P和EMAb水平、上调Bax/Bcl-2蛋白表达、激活细胞凋亡的内源性途径启动因子Caspase-9蛋白、激活执行因子Caspase-3蛋白表达有关。

人参皂苷Rh2对白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的探讨人参皂苷Rh2对人白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测人参皂苷Rh2对HL-60细胞增殖的影响,采用DNA的片段化实验,观察人参皂苷Rh2对HL-60细胞凋亡的影响。结果G-Rh2能明显抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性关系;人参皂苷Rh2能明显诱导HL-60细胞凋亡,呈浓度和时间依赖效应,DNA的琼脂糖凝胶电泳分析可见凋亡特征性的DNA梯状图谱。结论G-Rh2主要通过有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡从而发挥其抗白血病效应。