中国人群中RHAG基因序列的观察

目的探讨中国人群中不同Rh血型表型的RHAG基因序列。方法用血清学方法检测20例中国人群中不同Rh血型表型[包括了15例Rh(D)阳性样本和5例Rh(D)阴性样本,Rh(D)阳性样本中包含5例Rh Cc Ee抗原弱表达、5例弱D和5例正常Rh(D)阳性样本],依据RHAG基因序列的特异性,设计10对特异性引物扩增20例样本的RHAG基因第1~10外显子,确认条带符合后送公司纯化并测序。结果 20例不同Rh血型表型的样本在统一PCR条件下均扩出RHAG基因1~10外显子,扩增产物测序结果与标准序列对比一致。结论了解中国人群中RHAG基因的多态性需观察更多有意义的样本。

D—变异体的分析——附1例报告

目的分析1例D—变异体的分子背景。方法分别采用血清学方法和序列特异性引物PCR(PCR-SSP)方法检测标本RhD、C、c、E、e抗原和RHCE基因,同时序列分析RHAG、RHCE基因全长编码区序列,最后进行RHD合子型分析和家系分析。结果先证者血清学测定Rh表型为D—,PCR-SSP结果为DC-;RHAG第1-10外显子测序显示,编码区与Gen Bank NC-000006标准序列一致,未观察到形成Oldeide和Duclos-Like抗原的碱基变异,亦未见形成高频抗原Duclos(RHAG1)的RHAG316C>G突变,所有序列均未见杂合峰;RHCE基因第1-10外显子扩增显示,缺失第3-5外显子,其余外显子序列与标准序列一致,分析第1、2外显子序列为RHC,提示该等位基因为RHCE(e)-D(3-5)-CE(e);家系分析其父母、弟弟的RHAG序列与先证者完全一致,父母Rh血清学表型分别为DCCee和Dcc EE,其父亲的PCR-SSP和测序结果一致,其母亲PCR-SSP结果 DCc EE与测序结果一致,而与血清学结果不符(Dcc EE),其弟血清学表型、PCR-SSP和测序结果,均与先证者一致,结合RHD合子型分析结果,该家系父母分别为DCe/DC-和Dc E/DC-基因型,先证者和弟弟为DC-/DC-。结论 RHCE-D(3-5)-CE等位基因形成D—表型并稳定遗传。

新碱基缺失导致的Rh_(null)血型及家系分析

目的从基因学角度研究与探讨1例Rhnull血型的形成机制,同时研究其家族成员的Rh血型基因。方法通过血型血清学检测泰州市人民医院内科就诊的先证者的Rh血型表型,采用荧光PCR法进行RhCE基因分型,采用桑格法进行RhD、RhCE及RhAG外显子测序,然后分析先证者的Rhnull形成机制。作为对比,通过血型血清学检测先证者的姐姐和儿子的Rh血型表型,进行RhCE基因分型和RhD、RhCE、RhAG外显子测序。结果先证者的基因型结果为CcDEe,RhAG外显子测序结果为纯合型移码突变,突变位置在Exon 5,核苷酸改变为c.732delC,氨基酸改变为p.Phe245Serfs*16。先证者姐姐的血清学结果、基因分型和RhAG外显子测序结果及突变位置与先证者相同。其子的血清学结果为CCDee,基因型结果为CCDee,RhAG外显子测序结果为杂合型移码突变,与先证者一致。结论分析发现RhAG基因新的变异位点;此位点使得患者RhAG蛋白表达不完整,进而影响其他Rh抗原在细胞膜上的表达,致血清学结果为Rhnull。

Rh复合体的结构与功能

Rh血型系统发现距今已有60多年，在临床输血医学中是一个复杂且具有多型性的血型系统，由两个同源性很高的RHD和RHCE基因编码的具有12次跨膜的RhD和RhCE蛋白，RHAG基因编码Rh有关糖蛋白RhAG，这些蛋白和其他膜蛋白（LW，IAP，GPB，Duffy，带3）在红细胞膜上形成一个核心复合物，参与氨的转运。在临床输血中，Rh血型系统可引起胎儿和新生溶血病（HDN）和输血反应。RH基因遗传背景存在种族差异，同时也存在多种类型的RhD变异体，现将Rh血型系统的分子遗传情况及其在临床的应用综合如下。