产生抗D的DVI type 3型孕妇免疫血清学和RHD基因型分析

目的:对部分D表型孕妇进行免疫血清学和RHD基因型分析。方法:采用常规血型血清学方法鉴定孕妇RhD血型,并进行血型特异性抗体筛查和鉴定;采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reactionsequence specific primer,PCR-SSP)鉴定孕妇RHD基因型;采用多重连接依赖的探针扩增技术(multiplex ligationdependent probe amplification,MLPA)对孕妇及其配偶和女儿的RhD血型抗原进行基因分型及遗传分析。结果:该孕妇血清中检测出IgG抗-D,其抗体效价为1∶8。PCR-SSP结果显示,该孕妇RHD基因第3-6外显子缺失,经鉴定该孕妇RHD基因型为DVI type 3型。MLPA分析显示,该孕妇只有1条RHD等位基因,且缺失3-6外显子,其基因型为CDVIe/cde,其配偶为CDe/CDe纯合子基因型,女儿为CDe/CDVIe基因型。结论:准确的RhD血型鉴定对制定安全有效的临床输血策略和对育龄妇女采取恰当措施及预防新生儿溶血病具有重要意义。

广州地区RhD阴性献血者Del表型及基因型分析

目的研究广州地区RhD阴性献血者D放散型(Del)分布、表型及基因型以了解本地区DEL血型分子生物学背景。方法对2021年11月1日—2022年6月30日期间广州地区献血者采用盐水法初筛为RhD阴性血液进行间接抗人球蛋白试验(IAT)血清学确认、采用RhCE分型卡确定RhCE表型,对1146例确认RhD阴性所有C+(n=459)以及随机抽取部分C-标本(n=175)进行吸收放散(Del)筛查(共634例);提取Del阳性标本DNA进行高分辨熔解曲线分析法(HRM)实时荧光PCR检测RHD基因c.1227位点基因情况;对HRM检测RHD^(*)1227位点无突变标本采用限制性片段多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)扩增后产物作PstⅠ酶切,进行电泳分析RHD基因合子型;sanger法进行RHD基因进行外显子测序(exon 1-10),采用SeqMan软件分析基因突变情况;采用第3代单分子测序技术对可疑Del阳性标本进行RHD全基因分析。结果634例确认RhD阴性标本吸收放散试验结果显示Del表型占36.1%(229/634),占总RhD确认阴性的20%(229/1146);229例DEL的RhCE分型分别为Ccee 181例,CCee 40例,CcEe 7例,ccEe 1例,HRM结合RHD盒子型分析结果显示170例RHD基因为RHD^(*)1227A/01N.01、32例为RHD^(*)1227A/1227G,26例为RHD^(*)1227A/1227A、6例为RHD^(*)1227G/1227G(其RHD基因测序结果显示1例为弱D12型、4例为D-和1例RHD^(*)01EL.02)。结论广州地区献血者DEL个体基因型以RHD^(*)1227A/01N.01为主且其RhCE表型均为C+的特征;HRM可作为常规筛查“亚洲型”DEL血型基因的分子生物学方法。

毛细管离心技术在RhD抗原混合外观患者D抗原鉴定中的应用

目的探讨毛细管离心技术在RhD抗原呈混合外观患者D抗原鉴定中的应用可行性。方法对11例RhD抗原呈混合视野的患者红细胞进行清洗,制备压积红细胞。之后用毛细管离心法分离血细胞,分别向近端患者自身红细胞和远端红细胞加入抗D试剂鉴定RhD抗原。根据献血者代码追踪输入红细胞的RhD抗原。结果经毛细管离心,1例患者RhD抗原阴性,8例患者RhD抗原阳性,其余两例患者RhD抗原仍为混合视野。结论毛细管离心技术可有效分离患者新生红细胞,准确鉴定患者RhD抗原,为临床输血提供安全保障。

8例RhD变异型的血清学特征及基因序列分析

目的探讨RhD变异型患者的血清学特征及基因序列分析。方法采用微柱凝胶卡式法对拟输血患者进行ABO及RhD血型检测,对RhD抗原减弱及阴性标本进行盐水试管法复查和RhD阴性确认试验,对检出的D变异型样本进行基因检测。结果726例RhD抗原减弱及阴性标本经RhD阴性确认试验共检出8例D变异型,该8例样本经基因测序共检出7种基因型分别为RHD*01W.72/RHD*01N.01、RHD*15/RHD*D-CE(2)-D、RHD*01EL.01/RHD*15、RHD*DCE(3-9)-D/RHD*01N.01、RHD*15/RHD*01N.01、RHD-496G/RHD*01N.01和RHD*01EL.01/RHD*01W.71。其中,2例RHD*15/RHD*01N.01为弱D15型;1例RHD*01W.72/RHD*01N.01为弱D72型;2例RhD和RhCE基因重组,分别为RHD*15/RHD*D-CE(2)-D和RHD*D-CE(3-9)-D/RHD*01N.01;1例RHD-496G/RHD*01N.01的c.496C>G为新的RHD变异位点,已向GenBank数据库提交确认申请;3例两条配子基因均出现突变,其中2例为新的组合方式:RHD*15/RHD*D-CE(2)-D和RHD*01EL.01/RHD*01W.71。6例样本进行了RhCE表型检测,其中5例样本含有C抗原,占83.3%,以Ccee表型居多,3例,占50%。结论血清学检测联合基因测序有助于发现血型表现型和基因型特点,为了解RhD变异型及指导临床输血提供参考。

芜湖地区初筛RhD阴性献血人群RHD基因分型特征

目的:了解芜湖地区献血者初筛RhD^(-)汉族人群的RHD基因分型的分子机制及分布特征。方法:收集2021年8月-2022年8月芜湖市中心血站无偿献血人群初筛RhD^(-)样本共210例,对样本的RHD基因第1、10号外显子进行PCR扩增,确定样本是否存在RHD基因。对含有D基因的82例样本RHD基因1-10号外显子进行PCR扩增及合子型分析,对55例含全部RHD外显子样本进行Sanger测序以确定基因型。结果:在210例RhD^(-)标本中,128例(60.38%)为RHD基因缺失;27例存在部分RHD外显子,包括2例RHD*DVI.3/RHD*01N.01,24例RHD*01N.04/RHD*01N.01和1例RHD-CE(2-10)/RHD*01N.01;55例含有全部RHD外显子,包括4例RHD*01/RHD*01N.01,6例RHD*15/RHD*01N.01,1例RHD*01 W.72/RHD*01N.01,1例RHD*15/RHD*01EL.01,39例RHD*01EL.01/RHD*01N.01,余下4例样本根据合子型分析确定不存在RHD基因缺失、测序显示存在1227G>A突变。结论:芜湖地区献血人群RhD^(-)D基因的分子机制存在多态性,其中RHD*01EL.01和RHD*15为本地区主要D变异型,本研究结果为本地区RhD血型鉴定和临床输血提供理论基础。

RhD阴性血型抗原分析在临床输血安全中的应用研究

目的从临床输血安全的研究角度,实施有效的管理和应用,指导对RhD阴性血型稀有血液资源的保存与实用性稀有血型库的建立。方法采用瓷板法对RhD抗原进行初筛,RhD初筛阴性的血液标本,用间接抗人球蛋白法(IAT)进行确认试验;RhD确认阴性的试验标本再进行吸收和放散试验;再用盐水试管法对RhC、Rhc、RhE和Rhe抗原的鉴定。结果从165 041名献血者初筛出651名RhD抗原阴性者,其中RhD阴性抗原确认为633名,弱D型为18名,在633名RhD抗原阴性献血者中,ABO血型分布为:O型(36.81%)(A型(30.49%)>B型(26.07%)(AB型(6.63%);RhD阴性血型抗原表现型以ccdee(59.08%)和Ccdee(30.96%)居多,其次为CCdee、ccdEe、CcdEe、CCdEe、CcdEE和ccdEE表现型,未见CCdEE表现型。从整体随机抽取确认为阴性的316名献血者中共检测出DEL型71名,所占比例为22.47%。结论把O型CCdEE和ccdEE表现型红细胞,在工作中发现后及时冻存并在临床上针对使用,在建立使用型稀有血型库和解决临床对特殊血型的需求具有实际的临床应用意义。

90例RhD阴性孕妇血型不合对胎儿和新生儿的影响

目的探讨Rh D阴性血型孕妇血型不合及其对胎儿和新生儿的影响。方法对合肥市妇幼保健院2011年1~12月期间产科的90例Rh D阴性孕妇临床资料进行回顾性分析,并抽取同期住院分娩的90例Rh D阳性孕妇作对照。结果 Rh D阴性孕妇早产、新生儿高胆红素血症发生率均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。随产次及抗体效价增加新生儿溶血病发病率增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对Rh D阴性妇女孕前应进行宣教,孕后加强管理,尽量减少无效妊娠。孕期应定期监测抗体效价,结合胎儿B超检查可预测新生儿溶血病的发生及严重程度,积极治疗可改善新生儿预后,降低围产儿死亡率。

花都区献血者RhD阴性血型表现型分布调查

目的通过对花都区无偿献血人群RhD阴性献血者的检测,了解RhD阴性血型不同的表现型分布,为建立RhD阴性稀有血型系统各表型献血者队伍提供依据。方法对花都区2008年1月～2011年12月的56369名无偿献血者血液样本采用全自动梯形微孔板法进行RhD初筛,初筛阴性者再进行RhD阴性确认和表型检测,并建立Rh血型系统阴性表型数据库。结果 RhD阴性无偿献血者162名(其中弱D15名),所占比例为2.9‰。RhD阴性献血者各表型中ccdee比例最高,其后依次为Ccdee和ccdEe。结论掌握花都区无偿献血人群Rh血型分布,建立RhD阴性血型表型数据库,对保证合理计划用血,确保稀有血型患者临床用血安全及紧急供血具有重要的临床意义。

2493例RhD阴性献血者的基因分析及4个新RHD等位基因的鉴定

目的研究中国汉族人群RHD等位基因多态性和分子机制。方法2008年1月-2011年9月，对2493例初筛为RH阴性的无偿献血者，采用单克隆抗体鉴定RhD／C／c／E／＇e抗原，D抗原鉴定同时采用间接抗球蛋白法；采用PCR·SSP方法测出d／d、D／d、DEL／d型，再用商用RHD基因检测试剂盒鉴定D／d型的样本中的弱D—15、RHD．CE（2-9）-D、DVI-Ⅲ和Dva型；对于排除前述基因型的样本，对其RHD基因10个外显子序列进行测序比对分析。结果2493例中，有1686名为R／／D基因完全缺失（0／O），占67．6％，其它808名检出有RHD基因：其中20．7％（516／2493）为DEL型（RHD1227G〉A／a），RHD—CE（2-9）-D／d为最常见的融合基因型，占6．5％（163／2493），其次为DⅥ·nl（RHD—CE（3-6）-D／d），占1．2％（31／2493），弱D15型为常见的弱D型，共检出62例（2．5％）；发现的4个新等位基因，分别是RHO78delC／d、RHD520G〉A＋1080dellO／dRHD、438G〉C／d和RHD101A〉G／d。结论汉族人群RHD等位基因多态性与高加索人群存在差异，有丰富的类型和不同分子机制。

青海汉、藏和回族围产期孕妇RhD(-)及红细胞不规则抗体检测

目的了解青海高原地区不同民族围产期孕妇RhD(-)及不规则抗体特异性的分布规律与临床意义。方法对2010年1月-2014年12月期间在本院产科住院的汉族43 836名、藏族3 487名和回族2 626名围产期孕妇,作RhD血型及不规则抗体检测,并对检测结果作统计分析。结果在49 949名孕妇中RhD(-)总检出率为6.99‰(349/49 949),其中汉族孕妇RhD(-)检出率5.43‰(238/43 836)、藏族孕妇RhD(-)检出率为9.75‰(34/3 487)、回族孕妇RhD(-)检出率为29.32‰(77/2 626),藏、回族RhD(-)检出率明显高于汉族(P<0.05),而回族又明显高于藏族(P<0.01)。13 581名孕妇不规则抗体总检出率为0.42%(57/13 581),其中汉族0.33%(35/10 688)、藏族0.38%(7/1 846)、回族1.07%(15/1 407),回族不规则抗体检出率明显高于与汉族、藏族(P<0.05);汉族孕妇的不规则抗体检出率依次为抗-E0.08%(9/10 688)、抗-M 0.06%(7/10 688)、抗-D 0.05%(5/10688)、抗-e 0.05%(5/10 688)、抗-c 0.04%(4/10 688)、抗-Lea0.02%(3/10 688)、抗-P1 0.01%(1/10 688)和抗-Leb0.01%(1/10 688);藏族依次为抗-E 0.11%(2/1 846)、抗-M 0.11%(2/1 846)、抗-D 0.05%(1/1 846)、抗-e 0.05%(1/1 846)、抗-c 0.05%(1/1 846),回族依次为抗-E 0.28%(4/1 407)、抗-M 0.14%(2/1 407)、抗-D 0.21%(3/1407)、抗-e 0.14%(2/1 407)、抗-c 0.08%(1/1 407)、抗-Lea0.14%(2/1 407)和抗-P1 0.08%(1/1 407)。结论青海高原汉、藏、回族围产期孕妇中RhD(-)及不规则抗体检出率藏、回族高于汉族,以回族最高。

RhD阴性患者输注RhD阳性同型红细胞血液抗-D检测及其效价测定

目的了解患者Rh D抗原阴性患者在抢救时,输注与患者血型相同的Rh D阳性的血液。患者抗-D产生情况及效价水平。方法 Rh D抗原阴性患者输注Rh D抗原阳性血液后,5、10、20 d连续追踪3次,。使用微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡检测患者红细胞不规则抗体及效价[1]。结果 15例Rh D抗原阴性的患者输注同型Rh D抗原阳性红细胞后,共有4例患者血清红细胞不规则抗体筛查阳性[2]。1例女性患者5 d血清红细胞不规则抗体筛查阳性,10 d后又有2例女性患者和1例男性患者血清红细胞不规则抗体筛查阳性。5 d后阳性标本抗体效价为4,20 d后抗体效价结果为16,3例10 d抗体效价为4,20 d后效价为16。结论 Rh D阴性患者输注同型Rh D阳性血液后,机体被所缺失的抗原免疫刺激,产生免疫性抗-D。抗体产生的几率与抗体效价的增高和输注次数及抗原量的多少呈正相关系数上升[3]。

RHD1227A型弱D的D抗原表位分析

目的分析携带RHD1227A等位基因的Rh血型弱D型个体的红细胞D抗原表位。方法采用常规血清学方法检测Rh血型D、C、c、E和e抗原表型,间接抗人球蛋白试验(IAT)确认D抗原,序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)测定RHD基因,并检测RHD杂合型。对确认的弱D型,使用12种抗-D抗原不同表位的单克隆抗体,分析红细胞D抗原表位。结果血清学筛选和PCR-SSP检测鉴定出3例携带RHD1227A等位基因的弱D型样本,Rh小因子均为C+c+E-e+,RHD合子型鉴定均为RHD+/RHD-杂合型,提示3例个体基因型为CDe/cde。3例个体红细胞D抗原表位分析显示均具有基本完整D抗原表位,与Rh(D)阳性对照样本相同。结论发现3例RHD1227A型弱D型;不管RHD1227A等位基因表达DEL型或弱D型,其D抗原表位近似,均表达基本完整D抗原,提示该等位基因不同量的表达可能与其它调节因素有关。

RhD血型的基因诊断及临床应用

目的 :建立RhD血型基因诊断的方法并对胎儿RhD血型进行产前诊断。方法 :采用PCR方法 ,对 4 89例供血者 (其中Rh-2 3例 ,Rh+ 4 6 6例 )外周血标本和 2 7例胎儿羊水 /脐血标本进行RhD基因外显子 10及外显子 7特异性片段的扩增。结果 :凡扩增出 136bp一条特异性片段者判断为Rh-;扩增出 136bp和 186bp两条特异性片段者判断为Rh+ 。 2 3例Rh-供血者有 2 2例扩增出 136bp特异性片段 ,4 6 6例Rh+ 供血者均同时扩增出 136bp和 186bp特异性片段 ,该方法的灵敏度为 10 0 % ,特异度为 95 6 5 % ,假阳性率为 4 .35 %。 2 7例胎儿羊水 /脐血标本的扩增结果 ,1例Rh-,2 6例Rh+ 。结论 :PCR方法检测RhD基因型简便、快速 ,且和血清学检测结果吻合率高 ,可用于胎儿RhD血型的产前诊断。

石家庄地区RhD阴性无偿献血采集量与供血量对比分析研究

目的了解本地区ABO血型和RhD阴性血型分布、血液采集和供血趋势、满足临床需求程度以及进一步做好RhD阴性血液的库存管理提供参考。方法通过SPSS 17.0软件对数据t检验或x%2检验统计河北省血液中心2012-2018年RhD阴性血液的采供数据。结果 RhD阴性血液采集量整体呈平稳增长趋势,供血量占采集量90%以上;ABO血型系统中部分血型在RhD阴性血液供血量和总供血量中的分布比例不一致;ABO各血型RhD阴性血液采血量与采血人次间血型分布无统计学差异。结论采血量和用血量均呈增加趋势,采血量>供血量,通过日常街头随机筛查RhD阴性血型的采血方式能够满足临床需求。

新疆某医院全体员工COVID-19、ABO血型、RhD血型和回族Kell血型的横断面调查

目的通过对医院全体员工新型冠状病毒肺炎(COVID-19)、ABO血型、RhD血型和回族Kell血型检测,初步了解本院医务工作者的血型分布和相关信息基本概况。方法使用COVID-19抗体检测试剂盒(胶体金法)与核酸检测试剂盒,全自动血型仪器,检测COVID-19、ABO血型、RhD血型、回族群体Kell血型。结果5179例COVID-19抗体检测结果均为阴性;ABO血型调查显示A、B、O、AB频率分别为28.3%、32.1%、30.3%、9.8%,按照频率大小排序为B>0>A>AB;RhD血型阴性频率为0.8%;回族群体Kell血型中K和k抗原频率为1.0%和100.0%。结论了解全院ABO血型及RhD血型、年龄、性别等基本情况,为一线医疗工作者的COVID-19预防和人员选择,提供可以参考的最优方案。

配合型输血在RhD阴性患者抢救中的应用

目的通过分析配合型输血在RhD阴性患者抢救中的应用,探讨稀有血型患者紧急输血时的应对措施。方法对采用O型RhD阴性洗涤红细胞输注给ABO不同型RhD阴性患者3例的临床资料及输血结果进行分析。结果全部病例输血过程和输血后无异常反应,休克症状明显好转,贫血得到改善。结论 RhD阴性患者需紧急输血而缺乏同型血时,配合型输血是切实可行的应对措施,输注O型RhD阴性洗涤红细胞应是备选措施之一。

RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响研究

目的目前对Rh系统抗-D的定量或效价检测(相对定量)方法皆依赖于试剂红细胞。日常工作中,绝大多数实验室采用单人份红细胞作为效价测定的试剂红细胞,若RhCE表型对RhD抗原表达量影响显著,则不同RhCE表型必然会产生不同的抗-D效价测定结果。本研究旨在通过RhCE分型,RhD抗原定量试验及相应抗体进行效价测定,比较分析RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响。方法采用血清学方法筛选获得CCee、Ccee、ccEE、CcEe表型的RhD阳性标本,并使用流式细胞术检测上述红细胞RhD抗原量,最后使用不同RhCE表型单人份标本红细胞对同一份抗-D进行效价测定。分析RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响。结果在99例细胞红细胞标本进行Rh血型血清学分型后,对CCDee(n=17)、CcDee(n=15)、CcDEe(n=8)、ccDEE(n=8)分型细胞进行流式免疫荧光检测,发现CcDee与ccDEE及CcDEe间、CCDee与ccDEE之间RhD抗原的荧光量比较存在较大统计学意义差异(P<0.001),CcDee与CCDee比较存在统计学意义差异(P<0.01),其余各组间均不具统计学意义的差异;再对其中CCDee(n=15)、CcDee(n=14)、CcDEe(n=8)、ccDEE(n=8),使用同1份抗-D血浆进行效价测定分析,将效价结果与红细胞RhD抗原免疫荧光值(MFI)进行比较后,发现红细胞表面RhD抗原量与效价二者呈现正相关关系(r=0.907;P<0.001),对效价与RhD抗原MFI值进行统计分析发现:对同一份抗-D血浆,效价值为32、64、128各组内红细胞MFI具有统计学意义的差异(P<0.05);将效价与RhCE分型进行统计分析,发现CCEE与Ccee间、CcEe与Ccee间存在统计学意义的差异(P<0.05)。结论不同的RhCE表型会造成D抗原表达差异,D抗原量对效价测定有较大影响,提示在效价测定试验中,使用相同RhCE分型红细胞作为试剂细胞或对RhD抗原进行定量分析可提高效价试验的准确度。

发现1个新的无效RHD等位基因

目的鉴定1个疑似新的无效RHD等位基因。方法采用常规血清学方法检测1名孕妇的Rh血型抗原,间接抗球蛋白试验确认RhD抗原阴性,并用吸收放散试验排除D放散型(Del);先后分别采用商品化试剂盒、序列特异性引物PCR(SSP-PCR)技术以及DNA序列分析技术,分析该名个体的RHD基因。结果血清学试验为Rh-dCcEe,吸收放散试验阴性;基因型检测为杂合型RHD+/RHD-;商品化试剂盒和SSP-PCR结果都显示该个体携带的RHD阳性基因与正常Rh阳性表型的基因一致。对该标本编码区全长序列分析结果显示:第1外显子的第78位核苷酸缺失1个碱基"C",至第112位氨基酸时形成终止密码子。结论经GenBank检索发现该例为1个新的无效RHD等位基因,并完成注册RHD78delC(GenBank GQ477180)。

中山地区住院患者RhD阴性血型分布特点与输血安全的临床研究

目的通过对中山市某三甲医院Rh D阴性住院患者血型分布特点和用血情况进行调查分析,指导Rh D阴性血液库存管理,保障Rh D阴性患者临床输血安全。方法对本院2012年1月~2016年11月住院患者ABO及Rh D血型资料进行统计分析。结果 221 051例住院患者ABO血型分布特点为O>B>A>AB,男女间ABO血型分布有统计学差异(P=0.004);检出Rh D阴性患者511例,占0.231%,其中A、B、AB、O型患者Rh D阴性检出率分别为0.060%、0.060%、0.026%、0.087%,分布特点为O>A=B>AB。Rh D阴性在ABO血型系统中的分布存在男女性别差异,Rh D阴性血型在男性为O>A>B>AB,女性为O>B>A>AB。221 051例住院患者中有13 983例输血患者,输血患者血型分布特点为O>B>A>AB,Rh D阴性输血患者有34例,占0.243%,其血型分布特点为O>B>A>AB。结论Rh D阴性血型住院患者和输血患者ABO血型分布特征基本一致,有利于当地血站对Rh D阴性血液采集和储备。Rh D阴性住院患者和输血患者占有一定比例,输血科应加强Rh D阴性血液的库存管理,与血站做好协同合作,合理调配血液资源。

八种不同抗-D试剂检测RhD的比较

目的检测不同抗-D试剂的检出率。方法应用8种不同抗-D试剂检测经IH1000全自动血型仪检出的RhD抗原阴性132例标本。结果 8种不同抗-D试剂检出率无显著性差异。结论目前全国各地的不同抗-D试剂质量均可。