中国人群真实RhD阴性个体和RhD^(el)型RHD基因研究

为观察中国人群真实 Rh D阴性个体和 Rh Del型 RHD基因存在情况 ,采用常规盐水法和抗人球蛋白试验筛选 Rh D阴性捐血者 ,通过吸收放散试验确定其中 Rh Del和真实 Rh D阴性 ,并采用 PCR技术检测 RHD基因第 4内含子 ,对吸收放散试验结果与基因检测结果不符的样本进一步采用序列特异性引物 PCR (PCR- SSP)技术测定 RHD基因第3、 4、 5、 6、 7、 9和 10外显子 ,观察基因变异。筛选获得 10 4名 Rh D阴性捐血者 ,吸收放散试验鉴定 2 5名 (2 4 .0 % )为 Rh Del型 ,79名 (76 .0 % )为真实 Rh D阴性 ;2 5例 Rh Del全部检测到 D基因 exon4 - intro4 - exon5区域 ,79名真实 Rh D阴性个体中有 5名 (6 .3% )个体 (2名 CCdee,2名 ccd Ee,1名 Ccdee)检测到 D基因第 4内含子 ;PCR- SSP结果显示5名个体中 ,4名存在全部被检测的 D基因区域 ,1名个体 (ccd Ee)第 5外显子检测阴性。结果表明抗人球蛋白试验确认的 Rh D阴性中国人中存在高比率的 Rh Del型 ,且均可检测出 RHD基因第 4内含子 ;若排除 Rh Del,携带 D基因的 Rh D阴性中国人的比率明显降低 ,且这些个体并非如以往报道的均为

儿童患者RhD弱阳性变异体的初步分析

目的对RhD弱阳性儿童患者进行RhD变异体检测分析。方法用微柱凝胶血型鉴定卡及盐水试管法进行RhD血型初筛;微柱凝胶抗球法进行弱D确认试验;确认试验RhD弱阳性者进行PCR-SSP及RHD外显子测序分析。结果 RhD初筛阴性46例(0.38%),确认实验检出弱阳性4例(8.7%);4例RhD弱阳性标本经基因检测,1例1227A杂合子(Del型),1例DⅢa型,2例弱D15型。结论 Del型也可能被血清学方法检出;RhD弱阳性患者中抗原数量减少者较多;针对RhD阳性红细胞是否产生需进一步研究。

RhD放散型相关的等位基因的鉴定

目的 :为了探讨D放散型 (Del)表型的分子基础。方法 :采用序列分析方法分析 2 6名Del表型个体RHD基因全长编码区和一名个体的RHD基因第 7内含子部分序列 ;同时使用血清学方法检测全部个体的RhCcEe表型。结果 :全部样品的第 9外显子均存在RHD 12 2 7G >A碱基突变 ,其余序列则与正常RHD基因一致 ,一名个体的第 7内含子观察到一处碱基突变RHDIVS7+15 2c >a ;血清学结果显示所有Del表型个体均为RhC抗原阳性个体。结论 :由于 12 2 7A位于RHD基因第 9外显子与第 9内含子交界处 ,可能影响前RNA转录后mRNA的正常拼接 ,形成Del表型。

深圳地区献血者Rh表型和基因型分布调查

目的 探讨 Rh阴性个体的分子基础。方法 对 1 999年 6月～ 2 0 0 2年 5月共 83 72 2名首次献血者 ,应用血清学方法检测样本 Rh表型 ,对部分 Rh阴性、弱 D表型的 RHD基因编码区全长进行序列分析 ,并应用限制性片段长度多态性( RFLP)技术或双管 PCR法分析 Rh D基因型。结果 中国人 Rh阴性率 ( IAT检测 )为 0 .3 % ;弱 D表型个体 (包括弱 D型、部分D型和其他弱 D形式 )概率约 0 .1‰ ;在 IAT确认的 Rh阴性者中 ,RHD基因检出率为 3 6.0 % ,D放散型 ( Del)占 2 4.3 %。 Del个体以 RHD1 2 2 7A等位基因为主 ,纯合子占 3 3 .3 % ( 9/2 7) ;表型为 CCee的 Del个体占 2 2 .2 % ( 6/2 7) ,均为纯合子。在真实 Rh D阴性个体 (吸收放散试验排除 Del个体 )中 ,RHD基因检出率为 1 5 .5 % ,以携带 RHD-CE( 2 -9) -D2 等位基因为主 (占真实 Rh D阴性个体的 1 1 .9% )。另外 ,在 IAT确认的 Rh阴性者中 ,如果排除无效基因携带者 ,E抗原的频率仅为 0 .0 1 8%。结论 中国人 Rh D阴性者的分子背景复杂 ,且与高加索人和非洲黑人存在较大差异 ,高频率的 Del表型个体和 RHD-CE( 2 -9) -D2 等位基因携带者是中国人群 Rh阴性个体分子背景的特点。

高通量MLPA基因分型技术在1个D^(el)表型家系基因鉴定中的应用

目的对1个Del表型家系作基因鉴定。方法运用血型血清学方法对先证者及其家系的3名成员作RhD及相关血型抗原鉴定;提取先证者及其父母和妹妹的静脉血DNA。运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对先证者及其他成员血型基因作定性及定量分型;用PCR产物直接测序方法对发现的变异作确认。结果血型血清学检测:先证者为Del表型,其他3名家系成员为正常的RhD阳性个体。MLPA基因分型:先证者有2条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因,而3名家系成员有1条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因及1条正常的RHD等位基因。结论高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够对Del表型作明确的基因鉴定,有助于节约宝贵的RhD阴性血液。

D抗原阳性个体及无效等位基因携带者RHD基因数目测定

目的 测定Rh血型D抗原阳性个体的RHD基因数目。方法 采用聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术 ,扩增 10名D阳性、5名弱D、2 5名Del表型和 12名携带无效等位基因的Rh阴性个体的RH基因座位下游盒子和融合盒子序列 ,产物经DNA限制性内切酶PstI消化后电泳 ,以 5份经血清学和序列分析基因分型方法确认的D阴性样本作为RHD-/RHD-纯合子对照 ,鉴定RHD+ /RHD+ 或RHD+ /RHD-基因型。结果 10名D阳性个体均为RHD+ /RHD+ 纯合子、5份弱D样本及 12名携带无效等位基因的Rh阴性个体全部为RHD+ /RHD-杂合型。 2 5名Del表型个体中 9人为RHD+ /RHD+ 纯合型 (36 % ) ,其中 6人Rh表型为DCCee、3人为DCcee ;另 16名Del个体为RHD+ /RHD-杂合型 ,Rh表型均为DCcee。结论 D阳性个体RHD+ /RHD+ 纯合型多见 ,弱D型个体以RHD+ /RHD-杂合型为主 ,在Del表型个体存在高比率的RHD+ /RHD+ 纯合型 ;携带无效等位基因的个体多为RHD+

中山地区RhD阴性血型标本D^(el)表型基因分型研究

目的探索中山地区RhD阴性血型标本D^(el)型表型及基因分型特征,提高D^(el)型诊断水平。方法 2017年12月~2019年2月在102例初筛为RhD阴性标本中进行RHCE分型与PCR-SSP基因分型,以抗球卡法(IAT)确认RhD阴性95例,吸收放散试验鉴定D^(el)型28例,最后结合国内数据分析D^(el)型表型与基因分型特征,总结中山地区D^(el)型特征和地区特异性。结果血清学试验初筛RhD阴性的102例血型标本中,RhD阴性95例;确定D^(el)RHD 1227A型28例,未见其它D^(el)型等位基因;其中20例RHCE抗原分型为Ccee (71.4%),8例为CCee (28.6%),与国内其它地区无差异性。中山地区RhD阴性D^(el)分布频率29.5%(28/95),并存在地区差异性:与南昌,浙江,武汉无差异;而与上海,台湾,福州有差异。结论本次调查中,D^(el)表型与Ce单体型密切相关,与国内其它地区无差异性;D^(el)型在RhD阴性分布频率29.5%,存在地区差异性;D^(el)型以RHD1227A为主要等位基因。

RHD^(*) 1227A等位基因在辽宁汉族Rh阴性人群和随机人群中的频率分析

目的研究调查辽宁地区汉族RHD^(*)1227A等位基因在Rh阴性人群和随机人群中的频率。方法采用吸收放散实验筛查Del表型,RHD基因特异聚合酶链反应-序列特异性(PCR-SSP)筛查RHD^(*)1227A等位基因,RHD全编码区的核苷酸序列分析方法确认RHD^(*)1227A等位基因,杂交合子技术检测RHD基因的杂合性。结果在117例Rh阴性献血者中,吸收放散试验检测到24例Del表型,PCR-SSP方法和RHD全编码区测序共检测到23例RHD^(*)1227A等位基因携带者;23例RHD^(*)1227A等位基因携带者通过基因测序19例基因型RHD^(*)1227A/RHD^(*)01N.01,另外4例基因型是RHD^(*)1227A/RHD^(*)1227A纯合。在1 045例随机献血者中检测到11例RHD^(*)1227A等位基因携带者,9例基因型是RHD^(*)1227A/RHD^(*)01,2例基因型是RHD^(*)1227A/RHD^(*)01N.01。结论辽宁地区RHD^(*)1227A等位基因在Rh阴性人群中的频率为0.115 4,在随机人群中的频率为0.005 3。