RhD变异体Type33型受血者同种免疫产生抗-D合并抗-E混合抗体的研究

目的:探讨1例RhD阳性患者免疫产生抗-D合并抗-E混合抗体的原因。方法:用常规血清学方法鉴定ABO/Rh血型和不规则抗体特异性,采用序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSP)检测患者的RHD基因外显子1-10区域并进行杂合性分析,利用一代测序方法分析全外显子序列。结果:患者Rh血型为弱D Type33型,其RHD等位基因为RHD01W.33,患者表现为RHD+/RHD-杂合型,Rh分型为Ccee,产生了抗-D合并抗-E混合抗体。结论:该患者RHD基因外显子4发生了c.520G>A的突变,这一变异导致了红细胞上RhD抗原的表达减弱。

贵阳市无偿献血人群RhD变异体的基因型分析

目的研究分析RhD抗原变异体的血清学表型和基因型。方法收集贵阳市159名无偿献血者RhD盐水法初筛阴性的标本,采用间接抗球蛋白试验(IAT)筛出部分D型和弱D型抗原,用乙醚吸收放散试验检出Del型抗原,并对Rh表型(C、c、E、e抗原)进行血清学检测。同时运用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)对RhD变异型D抗原外显子进行扩增和选择性测序以判定其确切型别。结果 159例RhD初筛阴性标本中检出RhD变异型53例(33.3%),包括Del1227G>A、3G>A 46例(28.9%)、部分D DVI typeШRHD-CE(3-6)-D 3例、弱D15 845 G>A 3例、弱D24 1013T>C 1例。Rh表型结果显示,ccee 65例、Ccee 79例、CCee 11例、ccEe和CcEe各2例。结论贵阳市无偿献血人群中RhD变异体的基因型呈现多态性,其中主要为Del型。

RhD初筛阴性患者RhD变异体检测分析

目的对本地区Rh D初筛阴性患者进行Rh D变异体检测分析。方法随机收集直接抗人球蛋白试验的Rh D初筛阴性标本63例,按其血浆中是否含有抗D分成抗体阳性组和抗体阴性组,然后采用三批抗D-微柱凝胶抗人球蛋白法进行弱D确认试验和Del鉴定试验。结果抗体阴性组的弱D确认试验阳性率为3.3%(2/60),其中弱D型占1.7%(1/60),部分D型占1.7%(1/60);抗体阳性组的弱D确认试验阳性率为0(0/3),未发现弱D型与部分D型。抗体阴性组Del鉴定总阳性率为95.0%(57/60),其中三批抗D试剂的阳性率分别为88.3%(53/60)、91.7%(55/60)和68.3%(41/60),批间差异有统计学意义(<0.01);抗体阳性组Del鉴定总阳性率为100%(3/3),其中三批抗D试剂的阳性率分别为66.7%(2/3)、100.0%(3/3)、33.3%(1/3)。结论本地区部分Rh D初筛阴性患者实际为弱D型或部分D型,临床有必要对Rh D初筛阴性患者进行弱D确认;绝大多数Rh D初筛阴性患者实际属于Del型,但不同来源的单克隆试剂对Del的检出情况差异较大;三批抗D试验均阳性的Del患者仍有可能产生免疫性抗D可能,临床患者似无进行Del型鉴定的必要。

番禺地区RHD变异体基因分型研究

目的研究分析番禺地区RHD变异体基因分型特征。方法采用微量板法对2010年11月～2011年8月到本站参加献血的26 172名次献血者进行RhD阴性筛查;采用抗球蛋白法对初筛RhD阴性的标本进行确认,采用吸收放散试验对经抗球蛋白法确认为RhD阴性的标本进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对献血者模板DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断RHD基因分型。对血清学与基因分型结果不符的标本进行测序分析。结果初筛检出60名RhD阴性,经抗球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23%;吸收放散试验检出10例Del表型。60例初筛阴性的基因分型检测发现40例RHDEXON1～10全缺失基因型,发生频率约为67.8%;10例RHD 1227A DEL基因型,发生频率约为16.9%;7例部分D,发生频率约为11.9%;1例RHD弱D15基因型,发生频率约为1.2%;2例RHD基因分型阳性需作进一步碱基测序分析。结论本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD 1227A DEL、RHD-CE(2-9)-D,RHD-CE(5)-D、RHD-CE(6-9)-D和RHD弱D15等基因型,血清学结合基因分型能更准确鉴定RhD血型。

儿童患者RhD弱阳性变异体的初步分析

目的对RhD弱阳性儿童患者进行RhD变异体检测分析。方法用微柱凝胶血型鉴定卡及盐水试管法进行RhD血型初筛;微柱凝胶抗球法进行弱D确认试验;确认试验RhD弱阳性者进行PCR-SSP及RHD外显子测序分析。结果 RhD初筛阴性46例(0.38%),确认实验检出弱阳性4例(8.7%);4例RhD弱阳性标本经基因检测,1例1227A杂合子(Del型),1例DⅢa型,2例弱D15型。结论 Del型也可能被血清学方法检出;RhD弱阳性患者中抗原数量减少者较多;针对RhD阳性红细胞是否产生需进一步研究。

不同方法筛查RhD弱表达变异体

目的研究不同检验方法在RhD弱表达变异体中的应用范围及相互之间的关系。方法应用酶介质法和间接抗球蛋白试验(indirect antiglobulin test,IAT)在盐水凝集法初筛出的RhD阴性个体中进一步筛查弱D/部分D,然后在IAT确认的RhD阴性个体中采用吸收放散试验筛查DEL型。结果 278例RhD阴性个体酶介质法和IAT分别筛查出13和15例弱D/部分D,吸收放散试验筛查出64例DEL型。结论在这几种RhD弱表达变异体筛查方法中,盐水凝集法不能筛查RhD弱表达变异体,只能筛查正常表达的RhD抗原;酶介质法和IAT可以筛查弱D/部分D,酶介质法比IAT少检出两例(P>0.05),但得出酶介质法不如IAT敏感的结论尚早,有待于大样本的进一步研究;在IAT确认的RhD阴性个体中,若采用更为敏感的吸收放散试验,仍有部分个体RhD抗原检测为阳性。

Rh复合体的结构与功能

Rh血型系统发现距今已有60多年，在临床输血医学中是一个复杂且具有多型性的血型系统，由两个同源性很高的RHD和RHCE基因编码的具有12次跨膜的RhD和RhCE蛋白，RHAG基因编码Rh有关糖蛋白RhAG，这些蛋白和其他膜蛋白（LW，IAP，GPB，Duffy，带3）在红细胞膜上形成一个核心复合物，参与氨的转运。在临床输血中，Rh血型系统可引起胎儿和新生溶血病（HDN）和输血反应。RH基因遗传背景存在种族差异，同时也存在多种类型的RhD变异体，现将Rh血型系统的分子遗传情况及其在临床的应用综合如下。