高效价抗-D的RhD cat Ⅵ type 3型标本分析——附报告1例

目的通过对1例弱D的标本进行RHD基因外显子检测，分析其产生抗-D的分子基础。方法RhD血型采用盐水试管法、抗-D效价及弱D确认的检测均采用卡式抗球蛋白法；RHD基因外显子D1。D10、270A、1227A的检测采用PCR—SSP法。结果该标本IgM抗-D检测为初筛阴性；血清中抗-D效价128；IgG、IgG＋IgM抗-D检测结果为弱D；RHD基因检测结果为D3—6外显子缺失，确认该标本为部分D即RhDcatVItype3，基因结构为RHD—CE（3-6）-D。结论Rh部分D血型可以产生高效价抗-D。

RhD变异型DⅥ Ⅲ型的血清学及基因定型研究

目的探讨血清学定型为Rh D变异型DⅥⅢ型的分子基础。方法对2例Rh D定型弱阳性、阴性反应的标本进行ABD(DⅥ-)血型卡检测、试管法检测Ig M抗-D、Liss/Coombs卡检测Ig G抗-D、直接抗人球蛋白试验、Rh分型卡检测Rh抗原分型、同时采用PCR-SSP进行Rh D基因检测。结果 2例标本Ig M抗-D均阴性,3批Ig G抗-D均4+,ABD(DⅥ-)血型卡D阴性,Rh分型为Ccee,Rh D基因检测结果为D3-6外显子缺失,确认为DⅥⅢ型,基因结构为Rh D-CE(3-6)-D。结论对于Rh D弱阳性的标本可采用分子生物学的方法做基因定型。作为受血者和供血者在临床输血中和临床抗-D同种免疫的预防和监护中的策略是不同的。

豫西地区汉族RhD(-)基因的遗传多态性研究

目的观察豫西地区人群RhD（-）基因的遗传多态性,探讨本地区RhD（-）个体的RH基因构成。方法利用（SSP-PCR）方法检测豫西地区的无偿献血者中无血缘关系的40例RhD（＋）和129例RhD（-）个体的7个RHD特有的外显子（外显子第3,4,5,6,7,9和10）和RHD及RHCE第4内含子的构成状态。结果40例RHD（＋）献血者中均发现了RHD、RHCE内含子4以及RHD外显子第3,4,5,6,7,9和10;在129例RhD（-）献血者标本当中77例（59.69%）的个体既没有RHD内含子4,也没有上述7个RHD外显子,32例（24.81%）的献血者检查出有RHD内含子4和所有的RHD外显子,其余的20例（15.50%）RHD（-）献血者中携带至少1个RHD外显子;从129例RhD（-）标本中检出的20例Del型均能捡出上述7个外显子。结论豫西地区RHD（-）个体的RH基因结构具有多态性,主要表现为RHD基因全缺失、部分缺失和不缺失。

189例RhD血清学初筛阴性个体基因多态性研究

目的了解血清学RhD阴性个体基因的多态性及其发生机制。方法从2015年1月-2018年8月本实验室收集经单克隆IgM-抗-D初筛RhD阴性的189(人)份送检标本,采用间接抗球蛋白法及单克隆IgG-抗-D吸收放散方法鉴定其D抗原;采用PCR-SSP方法做中国人常见RHD基因分型,并对其RHD基因10个外显子序列做比对分析。结果本组初筛RhD阴性个体中,具有RHD基因者的比例为32.8%(62/189),完全缺失RHD基因(d/d)者为67.2%(127/189);62名具有RHD基因者:D^el型(RHD1227G>A/d)占66.1%(41/62),融合型占25.8%(16/62),包括DⅥ^Ⅲ[RHD-RHCE(3-6)-RHD/d]9例、DⅤ^Ⅱ[RHD-RHCE(5)-RHD/d)3例、RHD-RHCE(3-9)-RHD]2例、DBT-1[RHD-RHCE(5-7)-RHD/d及RHD-RHCE(3-8)-RHD各1]2例,弱D型占8.1%(5/62),含1例弱D15型[RHD(845G>A)/d]。结论弄清RhD阴性献血者和患者个体基因的结构特点,为临床安全输血提供重要依据。

山东省潍坊市RhD初筛结果呈阴性汉族无偿献血者的Rh血型表型及RHD基因多态性分布研究

目的探讨山东省潍坊市RhD初筛结果呈阴性汉族无偿献血者的Rh血型表型及RHD基因多态性分布特点。方法选择2015年3月至2017年7月,于潍坊中心血站参加无偿献血的1307例RhD初筛结果呈阴性的汉族献血者为研究对象。其中,男性献血者为921例,女性为386例,年龄为18~55岁。采用血清学检测方法对1307例RhD初筛结果呈阴性献血者的RhD阴性进行确认。血清学检测采用3个不同厂家的抗-D血型定型试剂和间接抗人球蛋白试验。对经血清学检测确认为RhD阴性的献血者,进行Rh血型表型分型,并且计算各RhCcEe的表型频率和单倍型频率。选择2015年9月至2016年3月参加无偿献血的116例RhD初筛结果呈阴性献血者进行RHD基因检测。RHD基因检测采用PCR-序列特异性引物(SSP)法和人类红细胞RHD基因分型试剂盒,并且进行基因多态性分析。Rh血型表型频率和单倍型频率,采用方根法计算。各Rh血型表型频率分布的Hardy-Weinberg遗传平衡检验采用χ2检验。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求,并且与所有献血者签署临床研究知情同意书。结果①本研究对1307例RhD初筛结果呈阴性献血者的RhD阴性进行确认的结果显示,RhD阴性献血者为1244例(95.2%),RhD变异型为63例(4.8%)。②本研究1244例RhD阴性献血者中,ccee、Ccee、ccEe、CCee、CcEe、CCEe表型献血者分别为773例(62.14%)、329例(26.45%)、83例(6.66%)、40例(3.22%)、18例(1.45%)、1例(0.08%)。cde、CdE、Cde、cdE单倍型频率分别为78.83%、0.06%、16.99%和4.12%。经Hardy-Weinberg遗传平衡检验,本研究纳入的1244例RhD阴性献血者的Rh血型表型频率观察值与期望值比较,差异无统计学意义(χ2=2.17,P>0.05)。③本研究116例RhD初筛结果呈阴性献血者的RHD基因分型结果显示,RHD外显子全部缺失基因型为77例(66.4%),RHD-CE(2-9)-D型为13例(11.2%),弱D15型为3例(2.6%),DEL RHD1227A纯合型为19例(16.4%),DEL RHD1227A杂合型为4例(3.5%)。结论本研究初步探明本地区RhD阴性献血者的Rh血型表型及RHD基因分布特点,可为确保本地区Rh阴性血型患者的临床输血安全,并为Rh阴性稀有血型库建立,提供参考依据。